Colestat

enzimatic
Metodă enzimatică pentru determinarea colesterolului
în ser sau plasmă

SEMNIFICAȚIE CLINICĂ geneizadas. Amesteca prin inversare, fara a agita. Eticheta si fe-
La determinación de colesterol în formă izolată are utilitate char.
diagnostic limitat. S-a observat că colesterolul este unul dintre Se pot pregăti cantități diferite respectând pro-
factorii care contribuie la formarea ateromului dat porții stabilite. Este important de asemenea, să respectăm
că complicațiile arteriosclerotice prevalează în indi- ordinul de adăugare a reactanților și asigurarea unei perfecțiuni
viduosi hipercolesterolémici. homogenizarea acestora, pentru ca Reactivul B
Studiile epidemiologice demonstrează că riscul de ... nu deteriora Reactivul de Lucru.
tratamentul bolii coronariene pentru indivizi de mai mult
de 40 de ani cu colesterolemie mai mică de 2,10 g/l este de 3 ori PRECAUȚII
mai puțin de între indivizi cu mai mult de 2,30 g/l și 6 ori Reactivii sunt pentru utilizare diagnostic 'in vitro'.
mai mic decât între indivizi cu peste 2,60 g/l. Reactivul B (fenol) este toxic și iritant. R36/38: irită ochii și pielea.
ochii și pielea. R25: toxic prin ingestie. S24/25: se evită
FUNDAMENTELEMETODEI contact cu ochii și pielea. S37/39: folosiți mănuși adecvate-
Schema reactivă este următoarea: spate și protecție pentru ochi/față.
lipază Utilizați reactivii respectând măsurile de precauție obișnuite
esteri de colesterol colesterol + acizi grași de lucru în laboratorul de analize clinice.
CHOD Toate reactivoarele și eșantioanele trebuie eliminate de
colesterol + O2 colesten-3-ona + H2O2 conform normelor locale în vigoare.
POD
H2O2+ 4-AF + fenol quinona colorată + H2O STABILITATEȘI INSTRUCȚIUNI DE
DEPOZITARE
REACTIVI PROVOZAȚI Reactivi furnizați: sunt stabili în frigider (2-10)oC)
A. Reactiv A: soluție de 4-aminofenazonă 25 mmol/l. până la data de expirare indicată pe cutie. Nu menține-
B. Reactiv B: soluție de fenol 55 mmol/l. ner la temperaturi ridicate pe parcursul unor perioade prelungite.
[Link]:suspensieconținând lipazăfungală300U/ml, Reactiv de lucru: în frigider și în borcan de sticlă
colesteroloxidază(CHOD)3U/mlși peroxidază(POD)20U/ml. culoarea caramel este stabilă 1 lună de la momentul său de
S. Standard: soluț ie de colesterol 2 g/l. preparare.
Concentraț ii finale
Lipaza≥ 6000 U/l INDICII DE INESTABILITATE SAU DETERIORAREA
CHOD ......................................................................≥ 60 U/l REACTIVI
POD≥ 400 U/l În timpul utilizării, Reagentul de Lucru poate dezvolta un
4-AF ..................................................................1,25 mmol/l un color rozaliu deschis care nu afectează rezultatele atâta timp cât
Fenol .................................................................2,75 mmol/l se procese un Blanco con cada lote de determinări și un
pH ......................................................... 7,4± 0,1 (a toamb.) Standard periodic. Aruncați-l atunci când citirile de
Blanco sean superiori la 0,160 D.O. sau citirile Stan-
REACTIVI NEFURNIZAȚI dardul se află anormal de scăzut.
Apă distilată. Vezi LIMITĂRILE PROCEDURII.
MOSTRĂ
INSTRUCȚIUNI PENTRU UTILIZARE Ser sau plasmă
Standard: amesteca prin inversare înainte de utilizare. a) Recolta: trebuie să se obț ină ser sau plasmă din ma-
Reactiv A: gata de utilizare. nera obisnuita.
Reactiv B: gata de utilizat. Vezi PRECAUȚII. b) Aditivi: în cazul în care proba folosită este plas-
Reactant C: homogeniți prin inversare înainte de utilizare, evitați- se recomandă utilizarea exclusivă a heparinei ca an-
tând la formarea de spumă. ticoagulante pentru obținerea acestuia.
Reactivo de lucru: în funcție de volumul de muncă, plasați c) Substanț e interferente cunoscute:
într-un cilindru 50 de părți de apă distilată, 5 părți de Reac- - În afară de heparină, anticoagulantele comune interferează-
tivoA, 5 părți de Reactiv B și aduce la 100 părți cu apă ren în determinare.
destilată. Adăugați 2 părți de Reactiv C anterior homo- - Serurile cu hemoliză vizibilă sau intensă produc valori

870350022 / 00 p. 1/9
 falsamente crescute, astfel încât nu trebuie folosite. CONVERSIEDEUNITĂȚI
- În seruri puternic hiperlipidemice poate fi observată tur- colesterol (mg/dl) x 0,01
în acest caz, diluați volumul final de reacție la 1/2 colesterol (g/l) x 2,59
ó 1/3 cu alb de reactivi, repetă lectura și multiplică colesterol (g/l) = colesterol (mmol/l) x 0,39
rezultatul prin factorul de diluție.
-Nuintervin:bilirubinapânăla200mg/l,acidascorbicpânăla METODĂ DE CONTROLALCALITĂȚII
75 mg/l, acid uric până la 200 mg/l, fără hemoliză ușoară. Procesarea a 2 niveluri ale unui material de control al calității
A se referi la bibliografia lui Young pentru efectele de (Standatrol S-E 2 niveluri) cu concentrații cunoscute
droguri în metoda prezentă. de colesterol, cu fiecare determinare.
d) Stabilitate ș i instrucț iuni de păstrare: co-
Lesterolul în ser este stabil 1 săptămână în frigider (2-10)oC) VALOAREDEREFERINȚĂ
y 2 luni congelat, fără adăugarea de conservanți. Panelul de experți al Programului Național de Educație privind Colesterolul
gram (NCEP) furnizează următoarele valori de colesterol:
MATERIALE NECESARE (neprovizionat) Dorit: < 2,00 g/l
- Spectrofotometru sau fotocolorimetru. Moderament ridicat: 2,00 - 2,39 g/l
- Micropipete, pipete și material volumetric adecvat. Elevat≥ 2,40 g/l
- Sticlă de sticlă culoare caramel.
Cu toate acestea, se recomandă ca fiecare laborator să stabilească
- Tuburi sau cuve spectrofotometrice cu fețe paralele.
Baie de apă la 37°C (opțional). intervalele sau valorile de referință proprii.
- Ceas sau timer.
LIMITĂRIALEPROCEDURII
CONDIȚIIDEREACȚIE Ver substanțe interferente cunoscute în EȘANTION.
- Lungimea de undă: 505 nm în spectrofotometru sau în fotoco- Alte cauze ale rezultatelor eronate sunt:
lorímetro cu filtru verde (490-530 nm). - Reducerii scad răspunsul de culoare în timp ce
-Temperatura de reacție: 37°C că oxidantii colorează reactivul, crescând albul
- Timp de reacție: 15 minute aceștia. Acești agenți sunt frecvent întâlniți în
- Volumul probei: 20 ul apă distilată folosită pentru prepararea Reagentului de Tra-
scăzut, motiv pentru care se recomandă să se controleze calitatea
- Volumul de Reactiv de Lucru: 2 ml
- Volumul final de reacție: 2,02 ml aceeași
Volumul probelor și al reactivilor poate fi crescut sau - Detergentii, metalele grele și cianurile sunt inhibate.
a scădea proporțional (Ex.: 10 ul de probă + 1 ml res enzimatici.
de Reactivo de Trabajo sau 50 ul + 5 ml). - Incubație incorectă. Nivelul apei din baie nu trebuie să
ser inferior celui al reactivilor din tuburi.
- Utilizarea standardului unui echipament cu reactivii altuia.
reactivii și standardul fiecărui echipament formează un ansamblu
PROCEDURA
În trei tuburi de fotocolorimetru sau cubete spectrofoto- perfect controlat și standardizat.
măsuri marcate B (Alb), S (Standard) și D (Desco-
nocido), așezați: PERFORMANȚĂ
a) Reproducibilitate: procesând replicatele aceleaș i
B S D mostre în 10 zile diferite, s-a obținut:
Standard - 20 ul - Nivel D.S. C.V.
1,57 g/l ± 0,033 g/l 2,32 %
Mostră - - 20 ul 2,90 g/l ± 0,065 g/l 2,23 %
Reactiv de lucru 2 ml 2 ml 2 ml 4,71 g/l ± 0,102 g/l 2,13 %

Incubați 15 minute în baie de apă la 37oC o 30 de minute b) Recuperare: adăugând cantităț i cunoscute de co-
temperaturaambientală(25oC).Citește înfotocolorimetrucu lesterol a distintos sueros, se obtuvo o recuperare între
filtro verde (490-530 nm) sau în spectrofotometru la 505 nm, 98 y 101%, pentru orice nivel de colesterol între 1,90 și 4,79 g/l.
aducând aparatul la zero cu Alb. c) Limită de detecț ie: depinde de fotometrul utilizat ș i
de la lungimea de undă. Conform sensibilității re-
draga, schimbarea minimă a concentrației detectabile pentru
ESTABILITATEAMELANGEIDEREACȚIE FINALĂ 0,001 D.O. va fi aproximativ 0,007 g/l.
Culoarea reacției finale este stabilă timp de două ore, așa că d) Liniaritate: reacția este liniară până la 5 g/l. Pentru valori
absorbția trebuie citită în acest interval. superioare, diluați 1/2 cu Alb și repetați citirea multipli-
când rezultatul final este 2.
CALCULULREZULTATELOR
PREZENTARE
2,00 g/l
Dxf unde f = - 250 ml (Cod. 1220101)
S 1000 ml (Cod. 1220102)

870350022 / 00 p. 2/9
Folosind reactanții de Colestatenzimatic împreună cu SIMBOLURI
HDL-Colesterol Reactiv Precipitant o HDL-Colesterol Următoarele simboluri sunt utilizate în toate seturile de reacție
FTyLDL-Colesterol Reactiv Precipitant (proviș ti se- tivouri pentru diagnosticare Wiener lab.
paradigma de Wiener lab.) este posibil să se determine coles-
terol legat de lipoproteinele cu densitate mare (HDL-colesterol Acest produs îndeplinește cerințele previzibile
rol) și lipoproteinele cu densitate mică (LDL-colesterol).
C tos de la Directiva Europeană 98/79 CE de produse
sanitarii pentru diagnosticul "in vitro"
BIBLIOGRAFIA
- Allain, C.C. et al. - Clin. Chem. 20:470 (1974). P Reprezentant autorizat în Comunitatea Europeană
Fundația Americană pentru Sănătate - Declarație
și boala coronariană - pg. 255 (1972).
de poziție privind dieta
V Uso diagnostic "in vitro"

- Castelli, W.P. - Prescrierea actuală 6/77:39 (1977). suficient pentru <n> eseuri
X Conținut
- Flegg, A.S.-Ann. Clin. Biochem. 10:79 (1973).
- I.F.C.C. - Clin. Chim. Acta 87/3:459 F (1978). H Data expirării
- Trinder,P. -Ann. Clin. Biochem. 6/24 (1969).
- Coniglio R.I.-Acta Bioq. Clin. Latinoam. XXIII/2:201, 1989. l Limită de temperatură (a se conserva la)
Panelul de experți al Programului Național pentru Educația în Domeniul Colesterolului

JAMA 285/19:2486 (2001). G Nu congela

Volum după reconstituire

Cont. Conținut

g Număr de lot

M Elaborat de:

Xn
Nociv

Coroziv / Caustic

Xi
Irritante

eu Consultați instrucțiunile de utilizare

Calibr. Calibrator

b Control

b Control Pozitiv

c Control Negativ

h Număr de catalog

MWienerLaboratoriosS.A.I.C.
Riobamba2944
2000-Rosario-Argentina
[Link]
Dir.Téc.:VivianaE.Cétola LaboratorulWiener.
Biochimie
ProdusAutorizatA.N.M.A.T.
[Link].:5983/83-5660/99 2000 Rosario - Argentina
870350022 / 00 p. 3/9 UR091119