CURS 7a

Genetica

Natura genei

7.1 CONCEPTUL DE PRELUCRARE A INFORMAȚIILOR ÎN CELULĂ

Activitățile complexe ale celulelor unice, precum și ale organismelor
multicelulare, sunt controlate și ghidate de un set de instructiuni de constructie sau plan
(gene) blocate în cromozomi. În esență, planurile conțin informații pentru sinteza
proteinelor specifice. Deoarece proteinele alcătuiesc atât citoarhitectura de bază, cât și
enzimele care direcționează metabolismul, natura proteinelor produse va determina
caracteristicile structurale și funcționale ale celulei sau organismului.
Biologia moleculară modernă se concentrează pe (1) modul în care informația
este aranjată (codificată) în cromozom, (2) cum este procesată informația, (3) modul în
care planul se reproduce ori de câte ori celula se divide, astfel încât fiecare celulă să
aibă o copie a planului și (4) modul în care informațiile pot fi modificate pentru a furniza
un nou material mesager. Reglarea și controlul fiecăreia dintre aceste tranzacții de
informații constituie încă un aspect al biologiei moleculare, o disciplină care oferă o
înțelegere a vieții prin înțelegerea rolurilor jucate de macromolecule.
Acum realizăm că proprietățile unei singure macromolecule, ADN-ul, pot explica
întreaga agendă de codificare, procesare, replicare și modificare (mutabilitate) a
informațiilor. ADN-ul este un model care direcționează destinul celulei pe parcursul vieții
sale. De asemenea, este, într-un anumit sens, materialul nemuririi, deoarece ADN-ul
trece de la o generație la alta pentru a menține continuitatea genetică între părinte și
descendenți. În unii viruși, ARN-ul, o rudă apropiată a ADN-ului, preia partea centrală cu
rol informational.
La fel ca o matriță de nisip folosită pentru o turnare de bronz, ADN-ul creează o
moleculă mesager cu structură complementară, mai degrabă decât să îndeplinească
sarcina de a crea proteinele în mod direct. Necesitatea folosirii unui mesager constă în
importanța ADN-ului, a materialului genic primar și a pericolelor care pândesc în
citoplasmă unde are loc sinteza proteinelor. Deși ADN-ul este o macromoleculă relativ
stabilă, de lungă durată, el poate fi degradat de enzime numite ADN-aze sau alterat de
schimbările din mediul său imediat. La fel ca generalul care nu intră în miezul bătăliei în
timpul unui război, de asemenea, ADN-ul (la eucariote) este sechestrat în spatele liniilor
membranei nucleare, din acest loc protejat, poate produce una, niciuna sau mai multe
copii ale moleculei mesager care va efectua producerea unei anumite proteine.
Producerea unei molecule mesager dintr-o matriță de ADN se numește
transcripție. Molecula mesager este o anumită specie de ARN numită ARN mesager
(ARNm). ARNm se va uni ulterior cu ribozomii citoplasmei și cu alte molecule-accesorii
pentru a sintetiza o proteină. Acest pas se numește traducere (translatie). Astfel,
informația sau codul specializat pentru asamblarea aminoacizilor într-o proteină este
mai întâi transcrisă din ADN pe o „bandă” de ARN și apoi tradusă într-o proteină. ADN-
ul însuși suferă o replicare ori de câte ori o celulă se divide, astfel încât informațiile unei
generații pot fi transmise fiecărui membru al generației următoare.
În procesul de codificare a informațiilor, la transmiterea acelei informații până
când o proteină este asamblată și replicarea modelului, este necesar un grad ridicat de
fidelitate. Dacă mesajul devine confuz în oricare dintre acești pași, va apărea o lipsă de
coerență în producerea proteinelor. Cu toate acestea, o anumită modificare a mesajului
este posibilă în cadrul naturii conservatoare a aparatului informațional. Alterarea fizică
în substructura ADN-ului duce la modificări ale secvenței codificate numite mutații.
Aceste mutații, evenimente relativ rare, oferă noi secvențe genetice care trebuie testate
în cursul modificărilor evolutive. Sexul amestecă pachetul; mutațiile adaugă cărți noi
celor vechi.

7.2 CĂUTAREA BAZELOR CHIMICE ALE CARACTERELOR MOȘTENITE

IMPLICAREA CROMOZOMILOR ȘI A ADN-ULUI

În același timp în care Gregor Mendel își făcea experimentele genetice pe

mazărea de grădină (1865-1870), un tânăr biochimist elvețian pe nume Friedrich
Miescher izola o substanță necunoscută până acum din nucleele celulelor de puroi și,
mai târziu , din icre. El a numit acest material acid nucleină. Mai târziu a fost numit acid
nucleic datorită proprietăților și locației sale. Materialul lipicios pe care Miescher l-a
extras cu minuțiozitate din bandajele mirositoare și îmbibate cu puroi pe care le-a
colectat de la pacienții din spital a fost de fapt ADN, chiar materialul care cuprindea
genele încrucișărilor lui Mendel și care oferă baza pentru biologia moleculară modernă.
În 1882, Walther Flemming a colorat cromozomii celulelor aflate în mitoză (vezi
Curs 8) și a descris procesul complex de diviziune celulară prin care se menține o
constanță a numărului de cromozomi. Mai târziu, Theodor Boveri a descris procesul
meiotic care are ca rezultat o reducere precisă a numărului de cromozomi de la două
seturi (2n) la un set (n) în formarea gameților (sperma/ oua).
În ciuda semnificației aparent evidente a cromozomilor în viața celulei și a
mecanismelor eredității, cei mai mulți biologi au avut tendința de a le respinge
importanța până în 1918, când o serie de experimente în relația sexuală conduse de CB
Bridges au arătat în mod concludent. că cromozomii sunt baza fizică a moștenirii; adică
poartă genele, unitățile de ereditate. Destul de des în științe există un decalaj de mulți
ani între o descoperire și recunoașterea și acceptarea ei de către comunitatea generală
din cercetare.
La începutul Primului Război Mondial, chimistul german Robert Feulgen a
dezvoltat o metodă de colorare a ADN-ului și mai târziu a arătat că ADN-ul se găsește
practic exclusiv în cromozomi. În anii 1920, proprietățile chimice ale ADN-ului au fost
elaborate de P. A. Levene. El a arătat că unitatea de bază a acestei macromolecule
este o nucleotidă (vezi Fig. 7.1), o moleculă constând dintr-o grupare fosfat, un zahăr cu
5 atomi de carbon numit dezoxiriboză și o singură bază azotată (vezi Fig. 7.2) selectată
dintr-un rezervor de două purine (adenină sau guanină) și două pirimidine (timină sau
citozină).
 Levene a continuat să propună că ADN-ul este o tetranucleotidă, că
macromolecula constă din patru nucleotide unite între ele. Se credea că fiecare
nucleotidă a tetranucleotidei conține de obicei o bază azotată diferită, astfel încât cele
patru baze ar fi apoi prezente în cantități aproximativ egale în tot ADN-ul. O structură
atât de simplă pentru moleculă i-a determinat pe oamenii de știință să concluzioneze în
mod eronat că ADN-ul nu ar putea fi materialul primar pentru ereditate și controlul
metabolismului celular. O moleculă care posedă proprietățile unui limbaj genetic ar
trebui să fie capabilă să poarte multe variații în structura sa fundamentală pentru a ține
seama de mulți biți de informații necesari pentru a regla structura și funcția celulei.
O complexitate mai mare a ADN-ului a fost sugerată în anii 1940 de seria
elegantă de experimente efectuate de Erwin Chargaff și asociații săi. Chargaff a arătat
că cele patru baze comune ale ADN-ului nu sunt prezente în părți egale, ci
demonstrează o variație considerabilă. Domeniul de variație este în concordanță cu
posibilitatea ca ADN-ul să fie materialul model al celulei. Chargaff a mai arătat că, în
cadrul modelului de variabilitate pentru baze, se obține o regulă constantă: cantitatea de
adenină (A) este întotdeauna egală cu cantitatea de timină (T), iar cantitatea de guanină
(G) este întotdeauna egală cu cantitatea de citozină (C). ). De aici rezultă că cantitatea
totală de purine (A + G) este egală cu cantitatea totală de pirimidine (T + C). Aceste
regularități au fost deosebit de revelatoare atunci când sunt adăugate la descoperirea
că cantitatea de ADN din toate celulele somatice (non-sex) ale unui organism este
întotdeauna aceeași, dar că gameții (celulele de reproducere) au jumătate din totalul
găsit în celulele somatice.
Au continuat să se acumuleze dovezi care implică ADN-ul ca material ereditar
fundamental: pneumococii (bacterii care provoacă pneumonie) ale unei tulpini ar putea
fi alterați permanent (procesul de transformare) de către ADN-ul unei a doua tulpini; s-a
demonstrat că virușii se înmulțesc prin captarea mașinilor de sinteză a proteinelor ale
unei celule bacteriene și deturnarea subversivă a acesteia la nevoile ADN-ului viral; iar
recombinarea sexuală a bacteriilor a implicat în mod clar manipularea ADN-ului. Ceea
ce era necesar, a fost stabilirea structurii ADN-ului pentru a explica în termeni de
arhitectură moleculară modul în care ADN-ul ar putea codifica informația, ar procesa
această informație, se reproduce și chiar să-și modifice ocazional propria structură
pentru a produce noi unități mesagere.

SECRETUL ADN-ULUI : DUBLA ELICE

Folosind fotografiile cu difracție de raze X ale ADN-ului realizate de Rosalind

Franklin și descoperirile multor alți cercetători, precum și propriile lor interpretări geniale
ale datelor disponibile, Watson și Crick au dezvoltat un model pentru structura ADN-ului.
Ei au descoperit că nu este o singură polinucleotidă mare, ci, mai degrabă, un geamăn
dublu catenar . Fiecare catenă este o spirală, iar cele două catene sunt împletite una în
jurul celeilalte. O bobină completă are 10 baze (vezi Fig. 7.3).

EXEMPLUL 1
Cel mai simplu mod de a vizualiza structura ADN-ului este să îl privim ca pe o
scară răsucită. Fiecare parte a scării este alcătuită din grupe alternante de zaharuri și
fosfat. Din fiecare zahăr ies bazele. O bază dintr-un fir este legat cu legături de hidrogen
cu o bază din catena alăturată. Aceste perechi de baze, câte una din fiecare catenă,
alcătuiesc treptele scării și fixează astfel o catenă de alta. ADN-ul poate exista în cel
puțin patru formațiuni geometrice. Forma descrisă de Watson și Crick este B-ADN (Fig.
7.4b). O formă parțial desfășurată este cunoscută ca A-DNA, în timp ce o configurație
strâns încolăcită, extrem de compactă este cunoscută sub numele de C-ADN. Z-ADN-ul
este o formă în care helixul este înfășurat în direcția opusă celei a B- ADN-ului și
coloana vertebrală a moleculei demonstrează o formă în zig-zag (Fig. 7.4a).
Legăturile de hidrogen ale bazelor (împreună cu interacțiunile hidrofobe dintre
ele) țin dubla elice împreună. Deși fiecare legătură de H este relativ slabă, în întregul
agregat, cu atâtea legături H, atașarea celor două catene este destul de puternică.
Datorită dimensiunilor respective și componenței chimice a bazelor, adenina este
întotdeauna legată încrucișat cu timina (prin două legături de hidrogen), iar citozina este
întotdeauna legată de guanină (prin trei legături de hidrogen). Prin urmare, se spune că
adenina și timina sunt baze complementare, la fel ca guanina și citozina. Această relație
complementară explică descoperirile lui Chargaff că în ADN, A = T și G = C.
Fiecare zahăr care formează coloana vertebrală a catenei este unit printr-o
moleculă de fosfat la atomul de carbon 5 (C-5) al zahărului de deasupra; un fosfat la C-
3 îl unește cu zahărul de dedesubt. Un capăt al catenet, având zahărul fără zahăr
deasupra lui și, prin urmare, un carbon liber sau fosforilat în poziția C-5, se numește
capătul 5’; celălalt capăt, la care zahărul terminal nu are zahăr dedesubt și are astfel un
carbon liber sau fosforilat la C-3, se numește capătul 3' (vezi Fig. 7.3). Prim-ul (') este
folosit la numerotarea carbonilor din zahăr pentru a-i distinge de carbonii din baza
atașată. Fiecare catenă are polaritatea opusă fatî de catena complementară. Capătul 5'
al unei catene se află la același capăt cu capătul 3' al catenei asociate. Se spune astfel
că sunt antiparalele. Aceasta sugerează că firele ar fi putut fi sintetizate de fapt în
direcții opuse.
Trebuie remarcat faptul că, deoarece o bază purinică relativ mare va fi
întotdeauna asociată cu o pirimidină relativ mică, molecula lungă de ADN nu se va
umfla sau nu se va strânge, dar va tinde să mențină o lățime uniformă în toată dubla
elice. Deoarece celula medie conține aproximativ 2 m de ADN, există o mare necesitate
de a compacta molecula din nucleu. Unitatea fundamentală de împachetare este
nucleozomul (Fig. 7.5), care conține atât ADN, cât și diferite tipuri dintr-o mică proteină
de bază numită histonă. Nucleozomul este o structură asemănătoare mărgelelor care
diminuează considerabil lungimea extinsă a ADN-ului.
7.3 CODIFICAREA INFORMAȚIILOR-LIMBAJUL GENEI

Watson și Crick și-au publicat modelul ipotetic pentru structura ADN-ului într-o
lucrare de o pagină și jumătate în revista Nature în 1953. Acest eveniment a marcat
începutul epocii biologiei moleculare. La scurt timp după aceea, printr-o căutare activă a
început să se înțeleagă exact modul în care structura ADN-ului ar putea explica
codificarea informațiilor, procesarea informațiilor (transcripție și traducere), replicarea
macromoleculelor purtătoare de informații și modificarea ocazională a mesajului în sine.
George Gamow a fost printre primii care au realizat că, dacă ADN-ul conține
codul pentru asamblarea aminoacizilor în proteine, atunci codul trebuie să aibă cel puțin
20 de „cuvinte” (codoni) diferite pentru a explica aranjamentele celor 20 de aminoacizi
naturali. Deoarece fosfații și zaharurile sunt aranjate într-o secvență alternativă
nevariabilă de-a lungul axei lungi a fiecărei catene de polinucleotide, aceste părți ale
nucleotidei nu pot reprezenta un limbaj cu o gamă largă de opțiuni structurale. Evident,
atunci, aranjarea bazelor de-a lungul catenelor este mecanismul de codificare. Ar putea
acest limbaj, sau cod, cu alfabetul său de baze să fie format din codoni cu o literă? Nu,
pentru că patru baze diferite ar putea furniza doar patru codoni diferiți. În mod similar,
patru baze diferite luate câte două ar produce doar 16 combinații diferite, după cum
urmează:

Dacă luăm trei baze drept unitete de codon, avem 4 3 sau 64 de aranjamente
diferite posibile, cuvinte mai mult decât suficiente pentru a controla ansamblul a 20 de
aminoacizi. Gamow a emis ipoteza codonului triplet, iar mai târziu Crick și-a demonstrat
validitatea operativă. (Pentru a determina cei 64 de codoni tripleți adăugați fiecare dintre
cele patru baze pe rând la cele 16 dublete prezentate mai sus.)
Codul genetic, constând dintr-o secvență liniară de trei baze, pare a fi universal
pentru toate formele vii, de la bacterii la oameni. De asemenea, este degenerat
(redundant) prin aceea că un număr de codoni diferiți pot reprezenta același aminoacid.
De exemplu, din Tabelul 7.1, putem vedea că leucina are șase codoni: UUA, UUG,
CUU, CUC, CUA și CUG. Deoarece există mult mai mulți codoni decât sunt necesari
pentru inserarea a 20 de aminoacizi într-un lanț proteic, unii dintre codoni pot fi utilizați
ca semne de punctuație, adică semnale de pornire sau oprire, în timpul sintezei unei
proteine.
Informații semnificative despre sinteza unei proteine pot fi conținute doar într-una
dintre firele dublei elice. Orice codon de pe catena opusă din acea regiune este
complementul codonului său respectiv de pe catena de sens opus. De exemplu, citind
ambele catene de la capetele lor 5’ respective, o secvență triplet de CTG pe catena de
sens ar crea secvența CAG pe catena opusă. Chiar dacă secvențele complementare
pot codifica foarte bine aminoacizii, și nu aiureli, probabil că nu vor fi aceiași aminoacizi
ca cei codificați de codonii de pe catena de sens și, astfel, vor plasa aminoacizii greșiți
în proteină. Cu toate acestea, pentru o proteină diferită, catena complementară poate
deveni catena de sens într-o altă porțiune a ADN-ului.
Probleme Rezolvate

7.1 Ce este o genă?

O genă este o unitate de informație care direcționează activitatea celulei sau a
organismului pe parcursul vieții sale. Își transmite mesajul descendenților atunci când
celula sau organismul se împarte sau se reproduce, astfel încât gena este și o unitate
de moștenire. În experimentele clasice ale lui George Beadle și Edward Tatum (1940) s-
a demonstrat că gena poartă informațiile necesare pentru a produce o singură enzimă
sau, după cum ipoteza a fost modificată ulterior, o singură proteină. De fapt, o singură
genă poartă informațiile pentru sinteza unui singur lanț polipeptidic, în timp ce multe
proteine constau dintr-un număr de lanțuri polipeptidice (structură cuaternară).
La un moment dat, se credea că unitatea genetică pentru crearea unei proteine
funcționale (cistronul) este diferită de lungimea ADN-ului necesar pentru a produce o
mutație (muton) sau pentru a efectua o recombinare a alinierii genetice de-a lungul
cromozomului (recon). Această separare a diferitelor funcții ale genelor, totuși, nu a fost
văzută în literatura recentă. Putem vedea gena ca o lungime a ADN-ului care codifică
un anumit produs. De obicei, acest produs este un lanț polipeptidic, dar poate fi și un tip
de ARN, cum ar fi ARNt sau ARN ribozomal (ARNr). O anumită genă poate exista în
una dintre mai multe forme alternative sau alele.

7.2 Care au fost dovezile care au condus la acceptarea ADN-ului ca material ereditar
primar?
Cromozomul eucariot, recunoscut de mult timp ca purtător al modelului vieții, era
cunoscut a fi bogat atât în ADN, cât și în proteine. Oricare dintre aceste molecule ar fi
putut fi materialul principal al modelului. Dar în 1928 Fred Griffith a arătat că
pneumococii morți, virulenți (conținând o capsulă), atunci când sunt injectați în șoareci,
pot transforma pneumococii vii, nevirulenți (fără capsulă) în bacterii vii, virulente, cu o
capsulă. Deoarece capacitatea de virulență, asociată cu capsula, era guvernată de
factori ereditari, Griffith a demonstrat posibilitatea de a efectua modificări ereditare în
bacteriile vii, prezentându-le cu o substanță găsită în bacteriile moarte. Mai târziu,
Dawson a repetat aceste experimente in vitro. În 1943, Oswald Avery și colaboratorii săi
au extras cu atenție principiul de transformare (substanța) din bacterii și au descoperit
că este ADN. Astfel, ADN-ul a fost cel care putea literalmente să iasă din mormânt și să
producă o schimbare ereditară permanentă într-un organism viu. Curând s-a descoperit
că o varietate de trăsături sunt susceptibile de transformare în bacterii; acest lucru a
oferit un sprijin puternic conceptului că ADN-ul este molecula informațională
semnificativă.
În 1952, Alfred Hershey și Martha Chase au arătat cu etichetare radioactivă că
atunci când proteinele și ADN-ul unui virus infecțios (bacteriofag) au fost administrate
bacteriilor gazdă, doar ADN-ul virusului a intrat în celulă și a determinat producerea de
nou material viral. Deoarece proteina virusului nici măcar nu a intrat în celula
bacteriană, s-a ajuns la concluzia că ADN-ul este materialul genetic al bacteriofagului.
Recombinarea trăsăturilor genetice are loc în bacterii, un organism care s-a
considerat cândva lipsit de schimburi sexuale. Studiul atent al procesului de
recombinare a arătat că acesta implică crearea unei punți protoplasmatice (pilus ) între
două sau mai multe bacterii de-a lungul căreia inelul cromozomial deschis al unei
bacterii putea fi transferat într-o bacterie primitoare. Acest proces de conjugare, văzut în
mod clar în micrografiile electronice, ar avea ca rezultat, în timpul replicării, crearea de
noi cromozomi care conțin material genetic din două surse. Deoarece cromozomii
bacteriilor sunt lanțuri goale ale ADN-ului, recombinarea sexuală a bacteriilor a
consolidat și mai mult conceptul de ADN ca material ereditar primar.
O altă linie de dovezi care indică ADN-ul ca material ereditar primar provine din
transducție. Acest fenomen, asemănător în unele moduri cu transformarea, implică
schimbul de informații genetice între două specii bacteriene cu un virus care acționează
ca un vector pentru a efectua schimbul. ADN-ul viral intră într-o bacterie, unde
subminează sistemul de procesare a informațiilor bacteriene pentru a produce material
viral nou. În acest proces, o parte din ADN-ul celulei bacteriene este integrată cu
genomul viral. Când virusul părăsește prima celulă și infectează o altă celulă, aduce
împreună cu ea ADN-ul din prima celulă pentru a se amesteca cu ADN-ul celei de-a
doua celule. În același timp, caracteristicile ereditare ale primei celule apar în a doua.
Deoarece este doar ADN-ul care trece în bacteria din virus, acest transfer de informații
genetice de la o celulă bacteriană la alta implică ADN-ul ca material principal al
modelului. Transducția reprezintă o altă tehnică de inginerie genetică. Un virus, tratat cu
material genetic străin, oferă o sondă pentru introducerea genelor într-o celulă gazdă.

7.3 Ce sunt intronii și cum afectează aceștia procesarea informațiilor genetice?

Intronii, o caracteristică a ADN-ului eucariotic, sunt catene intermediare de ADN

care se află între exoni. Exonii reprezintă material de mesaj care de fapt este tradus în
proteină, în timp ce intronii trebuie în cele din urmă excizați din produsul ARNm final.
Inițial, atât intronii, cât și exonii sunt codificați într-un transcript de ARNm. Existența
intronilor și exonilor a fost demonstrată atunci când s-a descoperit că doar aproximativ o
treime din transcrierea primară a ADN-ului a fost folosită pentru a produce proteine. Într-
un proces extrem de complicat, regiunile intronului sunt îndepărtate din transcrierea
primară brută de pe matrița ADN pentru a produce un ARNm secundar, matur, care
codifică numai exoni. Acum este clar că semnalele inițiatoare și terminatoare trebuie să
marcheze începutul și sfârșitul fiecărui intron dintr-o genă. În ciuda faptului că intronul
nu este implicat direct în modelarea produsului proteic final, acesta pare a fi esențial
pentru sinteza unui ARNm funcțional. Procesul de excizie a regiunilor intronului implică
participarea ARN ca enzimă. Acest ARN catalitic face parte dintr-o particulă proteină-
ARN cunoscută sub numele de mică particulă de ribonucleoproteină nucleară.