Curs 5 Genetica 25.03.
201
3
Codul genetic
Acesta a fost descifrat in vitro la [Link] si elucidarea lui a a vut loc in 1966. Initial s-a pornit de la 3
ipoteze, tinand cont de faptul ca exista 4 nucleotide si 20 de aminoacizi esentiali:
1. Prima ipoteza – o nucleotida codifica pentu 1 aminoacid. De aici ar rezulta ca exista doar 4
aminoacizi in natura. (41=4a.a. – nu se aplica);
2. A doua ipoteza – 2 nucleotide codifica pentru 1 aminoacid. => 4 2=16 aminoacizi. (nu se aplica);
3. A treia ipoteza – 3 nucleotide codifica pentru 1 aminoacid. =>4 3=64 aminoacizi. Ipoteza
demonstrata a fi cea corecta.
Apare notiunea de codon = ca fiind unitatea functionala a codului genetic si este reprezentata de o
tripleta de nucleotide.
Codul genetic reprezinta totalitatea celor 64 de codoni. Din cei 64 de codoni 61 codifica pt aa si 3 sunt
considerati codoni STOP – UAA, UAG si UGA.
Exista si 2 codoni START – AUG si GUG. Cel mai frecvent utilizat este AUG.
AUG -> codifica pentru metionina la organismele eucariote si pentru N-formil-metionina la organismele
procariote. GUG este utilizat in cazurile in care nu exista AUG.
Reading frame(cadrul de citire)=Reprezinta o secventa de nucleotide care
pornind dintr-un anumit punct este citita secvential pana la final.
Mutatia frame-shift este o mutatie care apare in urma unor insertii sau deletii; in urma acestei mutatii
apar modificari ale cadrului de citire.
Ex: AGC ACG ...daca apara un nou nucleotid intre adenina si guanina vom avea AAGC ACG deci va
modifica cadrul de citire primul codon transformandu-se de la AGC la AAG.
Deci mutatia frame-shift determina aparitia unei noi secvente de codoni si automat a unei noi secvente
de aminoacizi.
Mutatia missense apare ca urmare a unei substitutii si determina aparitia unui nou codon care codifica
pentru un alt aminoacid.
Mutatia nonsense apare tot ca urmare a unei substitutii si determina aparitia unui codon STOP.
Curs 5 Genetica 25.03.201
3
Caracteristicile codului genetic
1. Polinearitatea – exista o corespondenta stricta intre secventa de nucleotide si aminoacizii din
proteina sintetizata;
2. Lipsa semnelor de punctuatie – citirea se face codon dupa codon fara intreruperi;
3. Universalitatea codului genetic – acelasi codon codifica pentru un aminoacid la toate sistemele
biologice. Acest lucru dovedeste stabilitatea codului genetic. Modificarea informatiei genetice,
fie prin mutatie fie prin recombinare nu determina modificarea specificitatii codonilor;
4. Nesuprapunerea – 2 codoni alaturati nu au nucleotide comune. Gene suprapuse prin modificari
ale cadrului de citire nu inseamna codoni suprapusi;
5. Degenerarea codului genetic – un aminoacid poate fi codificat de mai multi codoni. Singurii
aminoacizi care sunt codificati de un singur codon sunt metionina si triptofanul. (acestia se
intalnesc mai rar in proteine);
In general codonii XYUsi XYC codifica pentru acelasi aminoacid la fel ca si XYA si XYG.
Codonii care codifica pentru acelasi aminoacid se numesc codoni sinonimi.
Exemplu de nesuprapunere:
GCU UGU UUA GGA AUUA (ala-cys-leu-arg-ile) schimbarea cadrului de citire modifica secventa de a.a.
CUU GUU UAG GAA UUA (leu-val-tyr-glu-leu)
Transcrierea
Este procesul de sinteza catalizata enzimatic a moleculelor de ARN ca urmare a citirii informatiei
codificate de moleculele de ADN.
Prin transcriere atat la eucariote cat si la procariote sunt sintetizate toate moleculele de ARN (ARNm,
ARNr, ARTt, ARNsn).
Molecula de ARN rezultata in urma transcrierii inainte de orice procesare, poarta numele de transcript
primar.
+1
PROMOTOR gena TERMINATOR
-40,... +3,+4,...
Toate bazele dinaintea celei +1 se noteaza cu – in fata.
Daca de la promotor se transcrie o singura gena => transcriere monocistronica; daca pornind de la
promotor se transcriu mai multe gene => transcriere policistronica.(in general intalnita la procariote)
Curs 5 Genetica 25.03.201
3
Enzima care catalizeaza procesul de transcriere est ARN polimeraza.
La procariote exista o singura ARN polimeraza care determina transcrierea tuturor moleculelor de ARN.
La eucariote exista 3 specii mo,eculare de ARN polimeraza.
ARN polimeraza se leaga situs-specific la moleculele de ADN intr-o regiune numita PROMOTOR.
La procariote promotorii sunt constituiti din 4 regiuni si au aproximativ 60pb.
Cele 4 regiuni esentiale ale promotorilor la procariote sunt:
- 2 hexameri cu secvente conservate;
- 1 hexamer in pozitia -35 cu secventa TTGACA;
- 1 hexamer in pozitia -10 cu secventa TATAAT.
Intre hexameri exista o regiune de aproximativ 15-20pb. Exista si elemente UP (upstream) regiuni
bogate in A si T.
Practic un pormotor arata astfel:
+1
UP TTGACA 15-20b TATAAT
-60,-40b -35b -10b
In ceea ce priveste ARN polimeraza de la procariote – aceasta este o holoenzima cu dimensiuni destul de
mari (480 KDa) si un diametru de 100 Å. – practic este vizibila la M.E.
La [Link] exista aproximativ 7000 de molecule de ARN polimeraza per celula.
Holoenzima este formata din 4 subunitati:α,β,β’si σ.
Modul de asamblare al enzimei este:
α -> 2α -> 2α β -> 2αββ’ -> 2αββ’σ unde 2αββ’ formeaza miezul enzimei.
In celula exista de 3x mai multe molecule de miez decat subunitati sigma simple.
Rolul subunitatilor
α Rol in asamblarea holoenzimei si in reglajul genetic
β Responsabila de formarea legaturilor fosfodiestericeintre ribonucleotide – deci sinteza ARN
β’ Implicata in legarea ARN-polim. la molecula de ADN – legare care nu este situ-specifica si se
bazeaza pe afinitate chimica
σ Rol in atasarea situs-specifica a ARN-polim. la molecula de ADN
Curs 5 Genetica 25.03.201
3
αCTD- capatul COOH terminal al subunitatii;
αNTD – capatul NH2 terminal al subunitatii.
Intre αCTD si αNTD exista o regiune linker.
Moleculele de ARN-polim. se leaga de molecula de ADN intr-o regiune cuprinsa intre -50 si +20.
Intr-o prima etapa subunitatea sigma recunoaste hexamerul din pozitia -35, se leaga la molecula de ADN
si formeaza complexul binar ADN-ARN-polimeraza numit si promotor inchis.
In momentul in care se leaga subunitatea sigma la hexamerul -10 incepe sa se formeze bucla de
transcriere iar structura se numeste promotor deschis.
Spre deosebire de ADN-polimeraza, ARN-polimeraza desface singura molecula de ADN.
Are functie de proofreading, cu toate acestea apare o greseala la aprox. 10 4 nucleotide. Un alt rol al
ARN-polimerazei este refacerea dublului helix Adn.
Dupa sinteza a 8-10 nucleotide, subunitatea sigma se desprinde si se poate lega la un alt miez de Arn-
polimeraza(de aceea sunt de 3x mai multe molecule de miez decat subunitati sigma).
In ceea ce priveste transcrierea exista 3 etape:
1. Initierea transcrierii
2. Elongarea
3. Terminarea transcrierii
1 – Initierea transcrierii
Presupune atasarea primului ribonucleotid si complexul binar se transforma in complex ternar
Curs 5 Genetica 25.03.201
3
(ADN-ARNpolim.-ARN). Dupa 8-10 nucleotide subunitatea sigma se desprinde- moment in care se
considera ca etapa de initiere a luat sfarsit.
2 – Elongarea
Presupune sinteza molecului de ARN si, ca si in cazul ADN –polimerazei- sinteza se realizeaza in sensul
5’->3’.
Subunitatea beta este responsabila de polimerizare.
La [Link] viteza de sinteza este de 30-40n/s. Molecula de ARN-polimeraza se deplaseaza impreuna cu
bucla de transcriere de-a lungul moleculei de [Link] ADN-ARN se formeaza/se mentine pe o
portiune scurta de aproxim. 12pb si se mai numeste si intermediar de transcriere. Este mai putin stabil
decat duplexul ADN.
Exista proteine care inca nu au fost identificate total, numite factori de transcriere. Ca de exemplu
factorul Gre.
3 – Terminarea transcrierii
Se face cu ajutorul unor teminatori care pot fi rhoindependenti sau rhodependenti.
Terminatorii rhoindependenti sunt alcatuiti din secvente repetate invers, in special bogate in GC,
formate de 8-10 nucleotide de A ceea ce determina apartitia structurii de ac de par.
La terminatorii rhoindependenti se formeaza deci structura de hair-pin ce determina stationarea Arn-
polimerazei si dislocarea transcriptului -> terminarea transcrierii.
In cazul terminatorilor rhodependenti este necesara prezenta proteinei rho care are aprozimativ 50kDa
si are rol in stabilizarea structurii de hair-pin si determina detasarea transcriptului -> terminarea
translatiei.
Partial 22-04 din primele 6 cursuri.