AzAS3.1.7.5.

Proteine din mtase natural Aspecte generale Mtasea natural este un material proteic sintetizat de o varietate de organisme, precum viermi de mtase, pianjeni, scorpioni sau mute avnd proprieti n funcie de sursa de provenien. Cel mai cunoscut tip de mtase este cel obinut din coconii viermilor de mtase, Bombyx mori, fibrele avnd utilizri textile n China de mai bine de 5000 ani. n ultimii ani, o atenie deosebit o are i mtasea ce provine de la pianjen, de exemplu speciile Nephila clavipes i Araneus diadematus. Viermii de mtase trec prin mai multe stadii de dezvoltare (ou sau embrion, larv, pup i molie), dar cea mai mare cantitate de mtase este produs n etapa de larv cnd se formeaz coconul. n cocon se disting dou tipuri de proteine: fibroina i sericina. Fibroina este o protein fibroas compus din dou lanuri proteice de mase moleculare diferite - unul heavy (H) i altul light (L), i glicoproteine. Sericina este o protein macromolecular ce servete drept adeziv al filamentelor din fibroin din coconii de mtase. n cazul viermilor de mtase, proteinele sunt sintetizate n glanda de mtase sub form de soluie apoas 12 - 15%, care se concentreaz i este apoi filat prin orificiul glandei cu un diametru de 0,03 - 0,4 nm sub form de filamente care formeaz coconul.

Compoziia firelor de mtase Fibroina din mtase este format din dou catene: una heavy cu masa molecular de aproximativ 325 000 i una light cu o mas molecular de 25 000, care se pot separa prin reacii reductive i care sunt n raportul 1:1. Sericina are o mas molecular n intervalul 20 00031 000. Fibroina reprezint aproximativ 70 - 80% din coconul de mtase iar sericina 20 - 30%, n funcie de origine i condiiile de hrnire. n mtase se mai intlnesc componente minore precum grsimi, pigmeni, componente minerale i carbohidrai, asa cum se prezint n tabelul 3-15.

Tabelul 3-15. Compoziia coconilor de mtase din Bombyx mori Component Fibroina Sericina Grsimi i cear Carbohidrai Elemente anorganice Pigmeni Compoziie, % 70-80 20-30 0,4-0,8 1,2-1,6 0,7 0,2

Studiile efectuate asupra coconilor de mtase au demonstrat c acetia au compoziii diferite n funcie de stratul analizat. Astfel, n stratul exterior coninutul de sericin este mai ridicat (32,4%) i cel de fibroin mai sczut (65%) n timp ce n stratul interior sericina reprezint 18%, iar fibroina 79%. Fibroina este o protein alctuit n cea mai mare parte (aproximativ 60%) din glicin, alanin i serin, aminoacizi care se gsesc n raportul 3:2:1 i care sunt distribuii n secvenele: Gly-Ala-Gly-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala-Gly-Ala-Gly-Ser Aminoacizii cu grupri R mai voluminoase (arginina, treonina, tirosina) se gsesc n catena fibroinei n zonele amorfe. Compoziia fibroinei din Bombyx mori n aminoacizi este redat n tabelul 3-16:
Tabelul 3-16. Compoziia fibroinei n aminoacizi din mtasea produs de Bombyx mori n procente (%) Aminoacid Glicin Alanin Valin Leucin Isoleucin Serin Treonin Acid aspartic Acid glutamic Lisin Arginin Histidin Tirosin Fenilalanin Prolin Triptofan Metionin Cistein Compoziie, % 44,6 29,4 2,2 0,53 0,66 12,1 0,91 1,3 1,02 0,32 0,47 0,14 5,17 0,63 0,36 0,11 0,1 0,2

n regiunile cristaline ale fibroinei, catenele proteinei cu grupri laterale, notate cu R, de volum mic (H-glicina, CH3-alanina i CH2-OH-serina) sunt extinse complet n configuraia , fiind apropiate, fapt care permite formarea de legturi de hidrogen, figura 3-23.

Fig. 3-23 Structura n fibroin: a) vedere din fa; b) vedere lateral. R=gruparea lateral a aminoacizilor

Regiunile cristaline ale fibroinei confer fibrelor o nalt rezisten la traciune, dar elasticitatea este redus datorit faptului c lanurile proteinei sunt extinse la maxim. Mtasea prezint totui o anumit flexibilitate care se explic prin structura lamelar ce permite planurilor s alunece unul peste cellalt. Acest fapt se datoreaz forelor secundare de tip van der Vaals, reduse ca intensitate, ce menin planurile legate ntre ele. Fibra de mtase este lucioas, iar luciul este rezultatul luminii reflectate de planurile din polimer. Sericina este un complex de proteine lipicioase care cimenteaz filamentele de mtase n cocon. Au fost identificate cel puin ase proteine cu mase moleculare cuprinse ntre 65 i 400 kDa. Se caracterizeaz printr-un coninut ridicat n serin (38%) precum i ali aminoacizi ce conin funciuni OH care le confer caracterul de adeziv. n tabelul 3-17 este redat compoziia n aminoacizi a sericinei produs de Bombyx mori.

Tabelul 3-17. Compoziia sericinei n aminoacizi produs de Bombyx mori Aminoacid Glicin Alanin Valin Leucin Isoleucin Serin Treonin Acid aspartic Acid glutamic Lisin Arginin Histidin Tirosin Fenilalanin Prolin Triptofan Metionin Cistein Compoziia, % 12,7 5,51 2,68 0,72 0,55 31,97 8,25 13,84 5,8 3,26 2,86 1,3 3,4 0,43 0,57 0,05 0,14

Sericina, care se gsete pe suprafaa firelor de mtase (figura 3-24) este solubil la fierbere n soluii apoase ce conin acizi, baze, spun sau detergeni sintetici. Procesul de ndeprtare a stratului de sericin de pe suprafaa firelor de mtase se numete degomare. n afara rolului de cimentare a filamentelor n cocon, sericina confer mtsii rezistena la oxidare i UV, efect antimicrobian i proprietatea de a absorbi i elibera ap. ndeprtarea este necesar pentru a conferi luciu filamentelor de mtase.

Fig. 3-24 Imagini SEM ale filamentelor de mtase nainte (A) i dup (B) procesul de degomare, n urma cruia sericina a fost ndepartat

Proprietile mtsii naturale Firele de mtase natural prezint proprieti care pot concura cu cei mai avansai polimeri sintetici, dar spre deosebire de acetia, se obin n condiii mult mai puin dure, din materii prime regenerabile i sunt biodegradabile. De foarte muli ani au aplicaii textile, urmate apoi de utilizri industriale i biomedicale. Fibrele de mtase sunt lungi, subiri, uoare i catifelate. Sunt termotolerante, izolatoare, au luciu puternic, afinitate pentru uscare i umectabilitate. Prin dizolvare i precipitare (regenerare) se poate modifica raportul dintre faza cristalin i cea amorf, deci se pot influena numeroase proprieti ale fibrelor de mtase natural. a) Proprietile mecanice remarcabile ale fibrelor de mtase sunt rezultatul structurii chimice i microstructurii acestora (zone cristaline distribuite printre zonele amorfe). Cteva proprieti mecanice ale fibrelor de mtase i componentelor sale i ale unor biomateriale sunt prezentate n tabelul 3-18.
Tabelul 3-18. Compoziia ntre proprietile mecanice ale unor biomateriale utilizate n prezent i mtase Material Sericina Bombyx mori Fibroina Bombyx mori Mtase Bombyx mori Mtase pianjeni Colagen Tendon Os (colagen) Kevlar Cauciuc sintetic Rezistena la traciune [MPa] 500 610-690 740 845-972 0,9-7,4 150 160 3600 50 Modulul de elasticitate [Gpa] 5-12 15-17 10 11-13 0,0018-0,046 1,5 20 130 0,001 Alungirea la rupere [%] 19 4-16 20 17-18 24-68 12 3 2,7 850

b) Stabilitatea termic a fibrelor de mtase natural este excelent pn la 200C. Sub 140C nu se constat modificri chimice, iar la temperaturi mai mari de 200C ncep s se formeze gaze (CO, CO2, NH3) prin degradarea gruprilor laterale ale aminoacizilor. c) Reactivitatea chimic a fibrelor de mtase este ridicat datorit gruprilor laterale ale aminoacizilor. Aceast proprietate este folosit pentru modificarea chimic sau grefarea unor monomeri pe catena proteinei n vederea modificrii proprietilor acesteia. Fibroina modificat cu acid bromacetic (5% fa de protein) i incubat n SBF prezint numeroase zone acoperite cu hidroxiapatit (figura 2.1-22) decelate prin SEM i EDX. Mtasea are un caracter amfoter, coninnd att grupri cationice ct i grupri anionice care reacioneaz n funcie de pH. Cu acizii minerali formeaz sruri sau, dac acizii sunt slabi,

acetia se pot ataa de protein prin legturi de hidrogen. n mediu acid legturile peptidice sunt hidrolizate. d) Proprieti fizice Firele de mtase sunt higroscopice i la o umiditate relativ de 65% pot absorbi pn la 30% ap, gonflarea firului pe direcie transversal fiind de 18,7%. Fibroina uscat are Tg egal cu 175C, dar care scade considerabil n prezena apei. Mtasea este solubil ntr-un numr limitat de solveni datorit aranjamentului ordonat al catenelor i legturilor de hidrogen intercatenare. Cei mai cunoscui solveni sunt soluiile apoase de sruri de litiu (LiBr, LiSCN), NaSCN sau sistemele CaCl2/H2O/EtOH i Ca(NO3)2/MeOH. Radiaiile vizibile i UV produc nglbenirea i fotodegradarea firelor de mtase, aciunea cea mai energic fiind a radiaiilor cu lungime de und de 220-370 nm. Sensibilitatea mrit la radiaii se explic prin prezena aminoacizilor treonin, tirosin i fenilalanin n zonele amorfe ale fibrei i care absorb radiaiile din domeniul UV (250-300 nm). Energia absorbit produce oxidarea gruprilor laterale ale aminoacizilor la grupri cromofore (de exemplu: chinone care dau culoarea galben) i formarea de radicali liberi care rup legturile peptidice din protein. e) Biocompatibilitatea firelor de mtase natural Firele de mtase provenind de la Bombyx mori au fost utilizate n aplicaii biomedicale n special pentru suturi, chiar cu cteva secole n urm. Practica chirurgical a pus n eviden unele reacii adverse i o hipersensibilitate a organismului la mtase. Studii efectuate n ultimii 10 ani au artat c aceste efecte negative se datoreaz prezenei sericinei (n mtasea virgin) sau a urmelor de sericin din firele de mtase folosite ca biomaterial. Dac sericina este ndeprtat total, fibroina reprezint una dintre cele mai promitoare substane pentru biotehnologii i materiale biomedicale datorit unui complex de proprieti: biocompatibilitate bun, permeabilitate pentru oxigen i vapori de ap, biodegradabilitate n timp, rezisten microbian i compatibilitate cu sngele, posibilitatea de control genetic n vederea modificrii compoziiei i secvenei proteinei, proprieti mecanice unice i reactivitate chimic. Aplicaii biomedicale ale fibroinei ntelegerea comportrii firelor de mtase fa de organismele vii ct i proprietile deosebite ale acestui material au determinat reconsiderarea lui ca biomaterial pentru sutur. Fibroina poate fi folosit la realizarea diferitelor tipuri de pansamente n chirurgie: deoarece

accelereaz procesul de vindecare a rnilor i arsurilor i pot fi uor ndeprtate fr a deteriora esututul nou format. Proteina fibroas este un material biologic folosit pentru fabricarea pielii artificiale, cea sulfonat are aciune anti-HIV-1, iar prin legare cu colagen recombinat uman (RHLC) se obine un film utilizat n afeciuni hepatice. Fibroina simpl sau modificat chimic cu funciuni carboxil sau OH servete la obinerea unor compozite hidroxiapatit-fibroin folosite ca os artificial. Prin dizolvare n anumii solveni i reconstituire prin precipitare, fibroina poate fi prelucrat n filme: geluri, pudre, spume sau chiar tuburi cu diametru mai mic de 5 mm i avnd pereii poroi pentru nlocuirea vaselor de snge. Din soluie se pot obine microparticule pentru eliberarea controlat de principii active sau suporturi de diferite forme pentru culturi de celule pentru studii ori n vederea reconstruciei diferitelor esuturi. Membranele din fibroin regenerat pot fi folosite ca fotosenzori pentru analiza H2O2. Prin grefarea fibroinei pe celuloz, poliacetat de vinil, acetat de celuloz, polietilen glicol sau prin formarea de reele interpenetrante cu aceti polimeri se pot obine materiale cu multiple utilizri biomedicale. Reamintim c toate aceste aplicaii ct i altele viitoare au la baz cteva avantaje importante ale fibroinei din mtasea natural: proprieti mecanice superioare oricrei fibre naturale i care rivalizeaz cu multe fibre sintetice de nalt performan; fibrele naturale au fost testate n numeroase aplicaii chimice; posibilitatea de a prelucra mtasea din soluii apoase pentru a obine filme, tuburi, microparticule, geluri etc.; fibroina se poate modifica uor prin diferite reacii chimice; se poate modifica genetic compoziia pentru a controla masa molecular, gradul de cristalinitate i solubilitatea; fibroina are un ritm lent de biodegradare att in vivo ct i in vitro.