ENZIMELE

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Planul:

Caracteristica general a enzimelor.

Apoenzime i cofactori enzimatici.
Organizarea structural a enzimelor.
Specificitatea enzimelor.
Particularitile catalizei enzimatice.
Cinetica reaciilor enzimatice.
Enzime allosterice
Clasificarea i nomenclatura enzimelor.

I. Caracteristica general a enzimelor

Definiia enzimei s-a conturat atunci, cnd
s-a observat c n sistemele biologice au loc
procese catalitice, survenite din extracte de
orz germinal ce realizeaz hidroliza amidonului.
Astfel, n 1833 a fost obinut diastaza (sub
form de pulbere alb).

Dac n 1920 erau estimate 10

15 enzime prin observarea efectului
aciunii lor, astzi sunt caracterizate
parial peste 2 000 enzime, dintre
care circa 500 au fost obinute sub
forma
unor
preparate
perfect
purificate i studiate din punct de
vedere fizico-chimic i biologic.

I. Caracteristica general a enzimelor

Enzimele

sunt
substane
care
catalizeaz reaciile biologice din
organism. Ele au un rol esenial n
biosinteza i degradarea substanelor
din materia vie. Se gsesc n toate
organismele vegetale, animale i m/o.

Toate transformrile biochimice

n esuturi i celule sunt posibile
numai prin aciunea enzimelor, care
se mai numesc i biocatalizatori.
3

I. Caracteristica general a enzimelor

Sub aspect chimic, enzimele sunt
proteine
cu
rol
funcional
foarte
important. Ele sunt produse numai de
organismele vii i i pot manifesta
activitatea enzimatic att n interiorul,
ct i n afara organismului.
Substana asupra creia
acioneaz enzimele poart
numele de substrat.
4

I. Caracteristica general a enzimelor

Dup locul unde i manifest activitatea,
enzimele se pot clasifica n exo- i endoenzime.

Exoenzimele, dup formarea lor n celule, sunt

eliminate n lichidele din organism, unde i exercit

activitatea catalitic. Astfel de enzime sunt ntlnite
n lichidele interstiiale, din diferite caviti, din seva
elaborat etc.
Endoenzimele, numite i enzime intracelulare, i
exercit aciunea n celulele n care s-au format. Ele
sunt de dou feluri:
lioenzime, legate mai slab n celul i
desmoenzime.

I. Caracteristica general a enzimelor

Formarea i degradarea enzimelor n

organism se realizeaz cu o vitez mai
mare dect se produce biosinteza i
degradarea
proteinelor
cu
rol
structural.

Enzimele nu s-au putut sintetiza

pn n prezent n laborator, dar s-a
reuit s se stabileasc succesiunea
aminoacizilor din lanul polipeptidic al
unor enzime.

II. Apoenzime i cofactori enzimatici

Unele
enzime,
care
reprezint
proteine omogene (holoproteine) posed
proprieti
catalitice
exercitate
n
exclusivitate
numai
de
componenta
proteic pe care este localizat situsul
catalitic.

II. Apoenzime i cofactori enzimatici

La alte enzime, proprietilor catalitice
rezult din interaciunea i cooperarea dintre
componenta proteic i anumite macromolecule
sau ioni metalici denumii cofactori.
Aceste enzime sunt eterogene, fiind
constituite
dintr-o
component
proteic
purttoare a situsului catalitic i denumit
apoenzim
i
o
component
neproteic
denumit cofactor, care se localizeaz la
nivelul centrului catalitic.

II. Apoenzime i cofactori enzimatici

Apoenzima i cofactorul inactive catalitic
ca entiti separate formeaz un complex
molecular enzim cofactor denumit n
terminologia clasic holoenzim.

Apoenzim

Inactiv

Cofactor

Inactiv

Holoenzim

Complex activ

II. Apoenzime i cofactori enzimatici

Dup natura chimic i modul
lor de legare la apoenzim,
cofactorii se clasific n:

Coenzime.
Grupri prostetice.
Ioni metalici.

10

III. Organizarea structural a enzimelor

Enzimele
reprezint
un
edificiu
macromolecular complex determinat de
nivelurile de organizare structural ale
proteinelor.
Fiind o clas special de molecule
proteice, enzimele se caracterizeaz prin
unele particulariti structurale specifice
care le confer activitate catalitic.
Astfel, enzimele posed n structura lor
anumite zone, denumite situsuri.

11

III. Organizarea structural a enzimelor

Situsul catalitic o zon specific i
delimitat, constituit dintr-un numr mic
de radicali de aminoacizi, care formeaz o
geometrie spaial perfect ordonat i
structural asimetric, la nivelul creia se
exercit proprietatea catalitic a enzimei
prin capacitatea de a interaciona cu
moleculele de substrat asupra crora
acioneaz.

12

III. Organizarea structural a enzimelor

S
SC

[ES]

E enzim
SC situs catalitic
S substrat
[ES] complex enzim-substrat

13

III. Organizarea structural a enzimelor

Situsul allosteric existent pe lng

situsul catalitic, la enzimele allosterice.

Prin internediul situsului allosteric la
enzimele reglatoare (allosterice) se leag
un efector allosteric (inductor sau
inhibitor); de obicei enzimele allosterice
sunt constituite din 2 sau mai multe
subuniti.

14

III. Organizarea structural a enzimelor

SC

EA
SA

EA efector allostreic
SA situs allosteric
E enzim
SC situs catalitic
S - substrat

15

III. Organizarea structural a enzimelor

n
funcie
de
organizarea
lor
structural
ca
molecule
proteice,
enzimele se ncadreaz n urmtoarele
grupe principale:

enzime monomere,
enzime oligomere,
izoenzime,
complexe (sisteme) enzimatice.
16

III. Organizarea structural a enzimelor

Enzime

monomere

structuri
enzimatice constituite dintr-un singur
lan polipeptidic, n care este inclus
situsul
catalitic
(ex.:
ribonucleaza,
tripsina, pepsina etc.).
Ele au mase moleculare mici.

17

III. Organizarea structural a enzimelor

Enzime

oligomere

sunt agregate
moleculare constituite din dou sau mai
multe subuniti (protomeri) asociate ntro structur compact. (Ex.: aldolaza,
lactatdehidrogenaza, creatinkinaza etc.).

18

III. Organizarea structural a enzimelor

Izoenzime configuraii spaiale diferite

ale uneia i aceleiai enzime ce se
deosebesc printr-o serie de proprieti
fizico-chimice, dar cu aceeai specificitate
de substrat.

19

III. Organizarea structural a enzimelor

Sisteme (complexe) enzimatice edificiu

polifuncional constituit dintr-un numr de

molecule de enzime intim asociate prin
interaciuni necovalente, care particip
mpreun ntr-un ir de reacii nlnuite.
ntr-o asemenea secven, produsul de
reacie catalizat de prima enzim a
sistemului multienzimatic devine substratul
enzimei urmtoare .a.m.d. pn la
obinerea produsului final de reacie.

20

IV. Specificitatea enzimelor

Enzimele posed o specificitate de
aciune foarte nalt. Astfel, datorit
specificitii de substrat, o enzim are
capacitatea de a selecta numai un substrat
sau un numr limitat de substrate asupra
crora acioneaz, condiionnd o reacie
biochimic bine definit.
Enzimele prezint:
specificitate de substrat i,
specificitate de aciune.
21

IV. Specificitatea enzimelor

Specificitatea
de substrat

Specificitatea
de aciune

Relativ
Stereospecificitatea
Absolut

Specificitatea
geometric
22

IV. Specificitatea enzimelor

Specificitatea

de

substrat

reprezint capacitatea enzimei

de a alege substratul asupra

cruia urmeaz s acioneze.

23

IV. Specificitatea enzimelor

Specificitatea absolut enzima acioneaz

numai asupra unui substrat. De exemplu, ureaza

acioneaz numai asupra substratului ureea,
succinatdehidrogenaza asupra acidului succinic.

stereospecificitatea enzima acioneaz numai

asupra unuia din izomerii substratului, ca de exemplu,
izomerii optici dextrogiri sau levogiri (D sau L);
specificitatea geometric enzima acioneaz
asupra izomerilor cis-trans (exemplu, fumaraza
catalizeaz adiia unei molecule de ap numai la
izomerul trans al acidului fumaric).

24

IV. Specificitatea enzimelor

Specificitatea relativ (se mai numete i

specificitate relativ de grup) enzima

acioneaz asupra unui grup de substrat,
care au o constituie chimic asemntoare.
Totui numrul de substrate este limitat.

De exemplu, hexokinaza, catalizeaz

fosforilarea n prezena ATP a unei serii de
hexoze
ca
substrate.
Alte
exemple:
peptidazele, fosfatazele etc.

25

IV. Specificitatea enzimelor

Specificitatea de aciune
Se mai numete i specificitatea de
reacie, care reprezint proprietatea unor
enzime de a cataliza un anumit tip de
reacie ce st la baza clasificrii enzimelor.
De
exemplu,
enzimele
proteolitice
catalizeaz hidroliza legturilor peptidice a
mai multor substrate de natur proteic
(polipeptidic).

26

IV. Specificitatea enzimelor

Compatibilitatea dintre enzim (E) i
substratul su de reacie (S) se
realizeaz dup principiul lact - cheie.

+
Enzim

Recunoatere

Substrate
posibile

+
Substrat
Complex
nerecunoscut
[ES]
27

V. Particularitile catalizei enzimatice

n celulele organismelor vii decurg
sute de reacii chimice n cadrul crora
are loc transformarea substanelor
organice cu participarea nemijlocit a
catalizatorilor biologici enzimele.
Cataliza enzimatic se caracterizeaz
prin anumite particulariti, i anume:

28

V. Particularitile catalizei enzimatice

[Link] sunt catalizatori extrem de
puternici: reacia enzimatic decurge de 106
1012 ori mai repede dect o reacie spontan
necatalizat ce are loc n soluie apoas. n
organismele vii, n prezena enzimelor timp de
secunde, iar uneori i a prilor de secunde,
au loc reacii succesive complicate, pentru
efectuarea crora ntr-un laborator de chimie
ar fi nevoie de zile, sptmni, adeseori chiar
i luni ntregi de lucru.

29

V. Particularitile catalizei enzimatice

2.

Reaciile
catalizate
de
enzime, spre deosebire de cele
chimice ale substanelor organice,
efectuate
n
condiii
de
laborator, au loc fr formare de
produse secundare i cu un
randament de aproximativ 100%.

30

V. Particularitile catalizei enzimatice

3. Toate enzimele sunt n stare

s acioneze n condiii relativ

blnde:

temperatur

moderat

(25 - 40C), presiune normal,

pH = 7,0 7,5.

31

V. Particularitile catalizei enzimatice

4.
Enzimele
posed
o
specificitate
pronunat fa de reacia ce o catalizeaz i
fa de substraturi. Datorit acestui fapt n
celula vie pot avea loc concomitent o mulime
de reacii chimice. Unele dintre ele duc la
scindarea substanelor organice complexe i
formarea unor substane mai simple nsoite
de eliberarea de energie, altele (de exemplu,
biosinteza polimerilor biologici), nsoite de
consumare de energie.

32

V. Particularitile catalizei enzimatice

5. Reaciile chimice catalizate de
enzime, care decurg n celul, sunt
organizate n sisteme enzimatice,
alctuite
din
cteva
reacii
consecutive (de la 2 pn la 20 i mai
multe). Multe sisteme enzimatice sunt
legate cu anumite structuri celulare
(de
exemplu,
enzimele
oxidrii
biologice funcioneaz n componena
mitocondriilor).

33

V. Particularitile catalizei enzimatice

6. Reaciile metabolice, catalizate de enzime
au o reglare strict: se formeaz attea feluri
de molecule simple de cte este necesar pentru
biosinteza
diferitor
substane
organice.
Sistemele biologice sunt n stare s regleze
sinteza catalizatorilor proprii enzimelor.
Autoreglarea le permite celulelor vii s susin o
anumit stare staionar chiar i la schimbarea
considerabil a mediului ambiant i s modifice
aparatul enzimatic, ca rspuns la schimbarea
brusc a condiiilor mediului nconjurtor.

34

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Cinetica chimic respectiv cinetica

enzimatic, studiaz procesele chimice

sub raportul vitezelor de reacie,

respectiv al evoluiei n timp a
transformrilor
caracteristice
unei
reacii chimice. De asemenea, cinetica
enzimatic include i factorii care
influeneaz reaciile enzimatice.

35

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Astfel, la baza proceselor enzimatice

st viteza reaciilor chimice i factorii,
care influeneaz asupra vitezei.
Se deosebesc:
Reacii de ordinul I.
A P
Viteza reaciei este direct
proporional cu concentraia unuia din
reactani:
dA
V= -

dt

=K A

constanta vitezei

36

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

2. Reacii de ordinul II.

A + B P
V= -

dA
dt

=K A

sau

sau

A2 P

V= -

dA
dt

=K A

3. Reacii de ordinul III. viteza reaciilor este proporional cu

produsul a 3 reactani.

4. Reacii de ordinul n. viteza reaciilor este proporional cu

produsul a n reactani.

5. Reacii de ordinul 0. viteza reaciei nu este n dependen de nici

unul din reactani. Aceste reacii au viteza de reacie constant. n acest
caz enzima este saturat cu substrat, iar viteza (V) este maxim i
constant.
6. Reacii de ordin mixt. reaciile care iniial au un anumit ordin de
reacie, iar apoi tind spre ordinul 0.

37

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Deci, reaciile catalizate de enzime se

supun regulilor generale ale cineticii
chimice, ns ele mai posed o
particularitate saturarea de substrat.

38

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Michaelis i Menten au elaborat o teorie

general a cineticii pentru urmtoarea
ecuaie de vitez:
V0 =

Vmax
Km +

Km constanta Michaelis-Menten

Ecuaia
Michaelis-Menten
Cnd V = Vmax, atunci Km = [ S ]

39

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Cinetica reaciilor enzimatice, respectiv
viteza de reacie (V) este dependent de o
serie de factori i anume:
1. Concentraia substratului aceast
dependen a fost descris anterior. Iniial,
creterea concentraiei substratului determin
o cretere rapid a vitezei de reacie (reacie
de ordinul nti); ulterior, viteza de reacie
crete lent (reacie de ordin mixt) i final, la
concentraii mari de substrat devine maxim;
cptnd o valoare constant (reacie de
ordinul 0).
40

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

2. Concentraia enzimei n condiii n

care concentraia substratului este

constant, viteza de reacie iniial (V)
este direct proporional cu concentraii
crescnde ale enzimei, ntre anumite
limite: la concentraii crescute de
enzim (E), viteza de reacie devine
constant.
V

[E]

41

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

3.
Temperatura.
Datorit
termolabilitii
lor,
activitatea
enzimatic se manifest numai ntre
anumite
limite
de
temperatur.
Temperatura la care enzima manifest
activitate maxim n aceleai alte
condiii se numete temperatur optim
a activitii enzimatice.

42

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Temperatura optim
a activitii enzimatice

43

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

n stare uscat enzimele sunt mai rezistente la
temperaturi (de exemplu, enzimele seminelor).
Temperatura acioneaz asupra:
degradrii enzimelor;
vitezei de disociere a complexului [ ES ], cu
formare de produse (K+2);
strii de ionizare a tuturor complexelor reaciei,
inclusiv a enzimei;
legrii enzimei cu cofactorii sau inhibitorii;
afinitii enzimelor fa de substrat;
legrii coenzimei i a altor cofactori.
44

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Influena vitezei reaciei enzimatice

poate fi caracterizat dup ecuaia
empiric a lui Arrenius:

d ln K
V=
=
dt

Ea
RT2

Ecuaia lui Arrenius

unde: K constanta vitezei;

R constanta gazelor;
Ea energia de activare a reaciei date;
T temperatura absolut.

45

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Pentru a caracteriza influena t asupra vitezei
anumitei
reacii
chimice,
se
utilizeaz
coeficientul termic Q10, care arat de cte ori
se mrete viteza acestei reacii la majorarea
temperaturii cu 10C:

Ea =

RT2

Q10

10

Un criteriu foarte caracteristic influenei

temperaturii
asupra
enzimei,
este
termolabilitatea i termostabilitatea enzimei.
46

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

4. Efectul pH-ului.
Activitatea enzimatic este dependent de
pH-ul mediului n care se exercit aciunea.
pH optim activitatea enzimatic maxim.
pH limit limita de aciune enzimatic.
V

Amilaza de mal

Pepsina

1,5

2,0

4,5

5,2

pH
47

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

pH-ul are influen asupra:

sarcinii diferitor grupri funcionale ale
Aa din apoenzim, iar de aici i a strii de
ionizare a ntregii molecule enzimatice;
stabilitatea enzimelor i a vitezei maxime
de reacie; etc.
pH-ul optim la reaciile reversibile poate fi
diferit. De exemplu:
pH = 7,2
Acidul lactic

Acidul piruvic
pH = 6,0
48

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Influena efectorilor.
Efectori enzimatici sunt substane de
natur chimic diferit care acioneaz
asupra enzimelor, modificnd cinetica
reaciilor enzimatice.
Dup modul de aciune a lor, efectorii
enzimatici se clasific n:
- activatori,
- inhibitori i
- allosterici.

49

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Activatorii
influeneaz pozitiv activitatea enzimatic, pe care o
favorizeaz sau stimuleaz. Activatorii enzimatici i pot
exercita aciunea pe diferite ci, n funcie de natura lor,
astfel:
diferii ioni Mg2+ activeaz fosfatazele;
Mn2+ i Co2+ peptidazele;
Zn2+ dehidrogenazele;
Cl amilaza; Etc.
substane cu caracter reductor acioneaz prin
protejarea gruprilor ( SH ) active de la situsul catalitic
al enzimelor. De exemplu, cisteina, glutationul redus ( G
SH ), etc.
hormonii;
ionii de metale i coenzime;
etc.

50

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

Inhibitori
substane ce provoac diminuarea specific a
activitii enzimei. Inhibitorii fixeaz gruprile
funcionale ale poriunilor catalitice i de contact ale
centrului activ al enzimei. Deci, n urma inhibiiei nu
are loc formarea complexului [ ES ].
Din inhibitori fac parte medicamentele, toxinele,
unele produse metabolice etc. Se deosebesc:
1. inhibitori nespecifici de exemplu, metalele grele,
acidul tricloracetic, taninele etc.
2. inhibitori specifici de exemplu, cianurile sunt
inhibitori specifici pentru enzimele ce conin Fe, Cu,
Co.

51

VI. Cinetica reaciilor enzimatice

3. inhibitori ireversibili de exemplu, NaF inhib
ireversibil fosfatazele (dar u alte enzime).
4. inhibitori reversibili sunt metabolii
intermediari sau analogii lor de structur.
inhibitori competitivi se leag cu aceleai
grupri funcionale din centrul activ al E cu care
interacioneaz i substratul (amgete enzima).
inhibitori necompetitivi se leag nu de gruprile
funcionale ale E, deoarece ei nu se aseamn cu S.
Deseori se leag de centrul allosteric. De exemplu,
metalele grele sunt inhibitori nu de E, dar de [ ES
] i se formeaz [ ESI ].
5. Inhibiie cu produse finale ale reaciei.
6. Inhibiie cu exces de substrat.
52

VII. Enzimele allosterice

- posed un alt sau alte centre de fixare dect
cel activ, unde sunt fixai liganzii.
Caracteristicile enzimelor allosterice:
Au ca i toate enzimele, centru catalitic, unde
se fixeaz i se modific substratul, dar mai
posed un alt centru, care are o poziie
spaial pentru fixarea metabolismului reglator,
numit efector sau modulator. Acest centru e
specific pentru fiecare modulator.
Moleculele enzimelor allolosterice sunt mai
mari, mai complexe i formate din dou
subuniti identice i simetrice.

53

VII. Enzimele allosterice

Sunt dou tipuri de enzime allosterice:

homotrope unde modulatorul i
substratul constituie aceeai
substan;
heteroptrope enzimele sunt reglate
de modulatori, care dup structur
difer de substrat.
Structura enzimelor allosterice a fost
redat anterior.

54

VIII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Au fost adoptate 2 nomenclaturi paralele:
sistematic include denumirile chimice
raionale pentru substratul enzimei date.
Arat caracterul precis al reaciei
catalizate avnd denumirea substratului +
sfritul az.
De
exemplu,
succinatdehidrogenaza,
malathidrataza etc.
recomandate (de lucru ) folosit n
practic.

55

VIII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Toate enzimele au fost mprite n 6

clase, fiecare cu subclasele ei.
Fiecare enzim are codul su format din
4 cifre:
I clasa;
II subclasa;
III subsubclasa;
IV numrul de ordine n subsubclas.

56

VIII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasele de enzime sunt:

Clasa I. Oxidoreductaze (14 subclase)
catalizeaz reaciile de oxidoreducere.
Acioneaz
asupra
urmtoarelor grupe: CH OH; CH
CH3; CH NH2.
Exemple: alcooldehidrogenaza;
ascorbatoxidaza;
catalaza; peroxidaza etc.
57

VIII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasa II. Transferaze (8 subclase)

catalizeaz reaciile de transfer
intermolecular al diferitor grupuri chimice i
resturi. Ele transfer aa grupuri ca: gr.
metilice ( CH3 ), formilice ( COH ),
carboxilice ( COOH ); resturi de aldehide,
cetone, acizi; grupri ce conin N2, P, S
etc.
Exemple: hexokinaze; aminotransferaze;
carboxiltransferaze; aciltransferaze;
aminoaciltransferaze etc.
58

VIII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasa III. Hidrolaze (9 subclase)

scindeaz hidrolitic legturile
intramoleculare. Hidrolazele
scindeaz urmtoarele legturi:
glicozidice, peptidice, C N, C C,
P N etc.
Exemple: -amilaza; dipeptidaze;
ATP-aza; pepsina etc.

59

VIII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasa IV. Liaze (5 subclase)

scindeaz hidrolitic i leag grupele
la legturi duble, precum i reaciile
de nlturare a acestor grupe. Ele
pot scinda legturile: C C, C O,
C N, C S.
Exemple: decarboxilaza acidului
piruvic; aspartaza; cisteindesulfhidraza etc.
60

VIII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasa V. Izomeraze ( 5 subclase)

catalizeaz reaciile de izomerizare
(racemaze, epimeraze, cis-trans
izomeraze etc.). Acioneaz asupra:
aminoacizilor, derivailor
aminoacizilor, hidroxiacizilor etc.
Exemple: fosfopentozoizomeraze;
fosfoglucoizomeraze etc.

61

VIII. Clasificarea i nomenclatura enzimelor

Clasa VI. Ligaze (sintetaze) (4

subclase) catalizeaz reacii de
legare a 2 molecule nsoite de
scindarea legturilor pirofosforice n
molecula ATP-ului sau a unui
nucleozidtrifosfat analogic. Ligazele
formeaz urmtoarele: C O; C S;
C N; C C.
Exemple: acetil CoA-sintetaza;
peptidsintetaze; amidsintetaze etc.
62