STRUCTURA NUCLEOTIDELOR

Nucleotidele = derivai ai bazelor azotate Bazele azotate - purinice: adenina, guanina - pirimidinice: citozina, uracil, timina Tautomerie - amino - imino - lactam - lactim

STRUCTURA NUCLEOTIDELOR
Nucleozid = baz azotat + pentoz - riboza (legtur b-N-glicozidic) - 2-dezoxiriboza

Nucleotid = nucleozid + acid fosforic (legtur esteric)

STRUCTURA NUCLEOTIDELOR
Nucleozid di- i trifosfai (legturi fosfo-anhidridice)

Nomenclatur
Baz azotat Adenina Guanina Citozina Uracil Timina Nucleozid Adenozina Dezoxi-adenozina Guanozina Dezoxi-guanozina Citidina Dezoxi-citidina Uridina (Dezoxi)-Timidina Nucleotid AMP (acid adenilic) dAMP GMP (acid guanilic) dGMP CMP (acid citidilic) dCMP UMP (acid uridilic) (d)TMP (acid timidilic)

ROLURILE BIOLOGICE ALE NUCLEOTIDELOR

Unitile structurale ale acizilor nucleici: ADN, ARN Rezerv de energie - nucleozid trifosfai (ATP, UTP) - legturi macroergice (tip fosfo-anhidrid) particip la reacii de sintez (endergonice) Activarea precursorilor metabolici care particip la reacii de sintez: - UDP-glucoza, UDP-glucuronat - CDP-colina - S-adenozil-metionina Componente structurale ale unor coenzime: - NAD, NADP, FAD, CoA Semnalizarea celular nucleotidele ciclice au rol de mesageri secunzi - AMPc, GMPc Efectori alosterici ai unor enzime

Nucleotide i nucleozide cu roluri specifice

S-adenozil-metionina UDP-glucoza

NAD

AMP ciclic

BIOSINTEZA NUCLEOTIDELOR

Sursele de nucleotide - exogen (alimentar) - endogen - catabolismul acizilor nucleici celulari - sinteza endogen de nucleotide

BIOSINTEZA NUCLEOTIDELOR PURINICE

2 ci: Sinteza de novo - pornind de la precursori Calea de salvare - prin reutilizarea bazelor libere

I. Biosinteza de novo
Ficatul = sediul principal al sintezei Localizare: citosolic Consumatoare de energie Produce direct nucleotide (bazele azotate NU sunt intermediari n cursul sintezei) Biosinteza ribonucleotidelor precede sinteza dezoxiribonucleotidelor

Precursori: intermediari amfibolici: aminoacizi (Gly, Gln, Asp), CO2, riboz-5-P acidul tetrahidrofolic (FH4) = donor a 2 atomi de C, sub form de N10-formil FH4 Pornete de la riboz-5-P pe acesta se construiete nucleul de purin Se sintetizeaz mai nti IMP (inozin monofosfat) precursorul AMP i GMP

Biosinteza de novo schem general

Primele 2 etape ale sintezei de novo

Riboz-5-P activat sub form de PRPP (5-P-ribozil-1-pirofosfat), prin transferul gruprii pirofosfat din ATP, sub aciunea PRPP sintetazei Gruparea amidic a glutaminei dislocuiete PPi, sub aciunea PRPP glutamin amidotransferazei 5-P-ribozil-amina (legtur b-N-glicozidic): conine N9 al viitorului nucleu purinic Urmeaz construcia pas cu pas a nucleului de purin

Biosinteza de novo a nucleotidelor purinice

Biosinteza AMP i GMP din IMP Sinteza AMP - gruparea NH2 provine din aspartat - particip GTP ca donor de energie Sinteza GMP - gruparea NH2 provine din glutamin - particip ATP ca donor de energie

Reglarea sintezei de purine

Amploarea sintezei de purine depinde de urmtorii factori:

1. Concentraia PRPP depinde de: disponibilitatea de riboz-5-P (format n calea pentoz-fosfailor) activitatea PRPP sintetazei: inhibat alosteric de ADP i GDP
2. Etapa limitant de vitez = reacia catalizat de PRPP glutamin amido-transferaza inhibat alosteric de produii finali: AMP i GMP 3. Asigurarea unei sinteze echilibrate a nucleotidelor adenilice i guanilice: AMP i GMP inhib propria lor sintez din IMP ATP este necesar pentru transformarea IMP n GMP GTP este necesar pentru transformarea IMP n AMP

Reglarea sintezei de purine

II. Biosinteza purinelor prin reutilizarea bazelor libere (calea de salvare)

Bazele azotate libere rezultate din catabolismul nucleotidelor pot fi reutilizate pentru sinteza unor noi nucleotide

Mecanism:

Dou enzime: APRT: adenin fosfo-ribozil transferaza

HGPRT: hipoxantin-guanin fosfo-ribozil transferaza

II. Calea de reutilizare a bazelor libere

Importan: cale mult mai economic: prin reutilizarea produilor de catabolism, se economisesc intermediari amfibolici i energie AMP i GMP formate pe aceast cale diminu sinteza de novo (prin inhibiia Gln amido-transferazei) Eficacitate: reutilizarea a 90% din bazele purinice libere PRPP = intermediar comun n - biosinteza de novo - calea de salvare

Biosinteza nucleozid di- i trifosfailor

Prin transferul de grupri fosfat din ATP Nucleozid monofosfat kinaze: Nucleozid difosfat kinaze:

Adenilat kinaza: ATP + AMP

2 ADP

Biosinteza dezoxiribonucleotidelor
Prin reducere la C2 al ribozei Pornete de la ribonucleozid-difosfai Catalizat de un complex enzimatic - ribonucleotid reductaza: Tioredoxina: cofactor proteic care poate exista n form redus i n form oxidat 2 enzime: - ribonucleotid reductaza - tioredoxin reductaza O coenzim: NADPH Reglare - alosteric: ATP (+) dATP ()

Catabolismul nucleotidelor purinice

Xantin oxidaza: - conine FAD, Mo, 4 centri cu Fe-S - n cursul reaciei se formeaz O2 (superoxid: specie reactiv de oxigen)

Anomalii ale metabolismului purinelor

Hiperuricemii: Acidul uric (urat de Na+ la pH fiziologic) hidrosolubilitate la concentraii precipit depunere sub form de cristale n esuturi (tofi): - articulaii fenomene inflamatorii (artrit) guta - esuturi moi - cile urinare calculi urinari (litiaz uric) Hiperuricemii primare (boli genetice) Guta comun anomalii ale enzimelor implicate n metab. purinelor sintez de nucleotide purinice producie de acid uric - activitii PRPP sintetazei (variant a enzimei cu Km ) - activitii PRPP-Gln amido-transferazei (mutaie la nivelul situsului alosteric sensibilitate la controlul prin feed-back negativ) Sindromul Lesch-Nyhan deficitul HGPRT reutilizrii hipoxantinei i guaninei - transformrii lor n acid uric - formrii GMP nu mai inhib Gln amido-transferaza sinteza de novo a purinelor producia de acid uric Deficitul glucozo-6-fosfatazei (boala von Gierke, glicogenoza de tip I) - G-6-P angajare n calea pentoz-P sintez de riboz-5-P disponibilitate de PRPP pentru sinteza de novo a purinelor

Anomalii ale metabolismului purinelor

Hiperuricemii secundare Turnover crescut al acizilor nucleici celulari (leucemii; chimioterapie, radioterapie) Scderea excreiei renale a acidului uric (insuficiena renal)

Tratamentul hiperuricemiilor: Allopurinol analog structural al hipoxantinei inhib competitiv xantin oxidaza (este substrat pentru XO oxidat la oxipurinol, care rmne strns legat n centrul activ al enzimei o inactiveaz)

BIOSINTEZA NUCLEOTIDELOR PIRIMIDINICE

Precursori: acid aspartic, glutamin, CO2, PRPP Localizare: citosol Dou ci: biosinteza de novo biosinteza prin reutilizarea bazelor pirimidinice libere (amploare mult mai redus dect n cazul purinelor) Are loc diferit fa de sinteza purinelor: mai nti este sintetizat nucleul de pirimidin (sub forma acidului orotic) apoi are loc ataarea de riboz-5-P (provenit din PRPP) primul nucleotid este OMP UMP precursorul CTP i dTMP

Biosinteza nucleotidelor pirimidinice

Reacia iniial: sinteza carbamil-fosfatului sub aciunea carbamil-fosfat sintetazei II (CPS-II CPS-I din ureogenez)

CPS-I Localizare celular Calea metabolic Sursa de azot Reglatori Mitocondrie Ciclul ureei Amoniac Activator: N-acetil-glutamat

CPS-II Citosol Sinteza pirimidinelor Gruparea amidic a glutaminei Inhibitor: UTP Activator: PRPP

Reglarea sintezei de pirimidine: CPS-II - inhibat feed-back de UTP - activat de PRPP Aspartat transcarbamilaza - inhibat feed-back de CTP

Biosinteza nucleotidelor pirimidinice

Defecte enzimatice: orotat fosforibozil-transferaza sau OMP decarboxilaza aciduria

orotic ereditar (acumulare de acid orotic eliminare prin urin)

Biosinteza nucleotidelor pirimidinice

Sinteza TMP

Activ n celulele aflate n diviziune (sintetizeaz ADN) TMP exist numai ca dezoxiribo-nucleotid Precursorul su este dUMP Gruparea CH3 provine din N5,N10-CH2-FH4 Sinteza este catalizat de timidilat sintetaza

FH2-reductaza regenereaz FH4 proces esenial pentru multe reacii care utilizeaz FH4 N5,N10-CH2-FH4 se reface pe seama serinei

Catabolismul nucleotidelor pirimidinice

Bazele azotate rezultate din catabolismul nucleotidelor pirimidinice degradate n compui hidrosolubili (b-alanin i b-aminoizobutirat) eliminai pe cale renal

CHIMIOTERAPICE FOLOSITE N TRATAMENTUL CANCERULUI

Celulele canceroase se divid activ necesiti de nucleotide ca precursori ai ADN i ARN => compuii care acioneaz ca inhibitori ai sintezei nucleotidelor afectarea sintezei ADN i ARN blocarea diviziunii celulare. 1) Analogi sintetici ai bazelor azotate - sunt ncorporai n acizii nucleici perturb mperecherea bazelor n cursul sintezei ADN

2) Inhibitori ai unor enzime implicate n biosinteza nucleotidelor Analogi ai glutaminei inhib glutamin-amido-transferazele - ex: Azaserina

CHIMIOTERAPICE FOLOSITE N TRATAMENTUL CANCERULUI

2) Inhibitori ai unor enzime implicate n biosinteza nucleotidelor Inhibitori ai sintezei TMP: - 5-F-uracil inhib timidilat sintetaza (dup transformare n F-dUMP)

- Metotrexat - analog al acidului folic inhib competitiv dihidrofolat reductaza ( mpiedic refacerea FH4, necesar sintezei TMP)