MICROSCOPIA
Prof.: Gilvânia Santana
e-mail: gilvaniamarinete@[Link]
Nazaré da Mata - 2019
MICROSCÓPIO
O microscópio é um aparelho capaz de aumentar a imagem de pequenos objetos muito
pequenos graças ao seu poder de resolução. Este pode ser composto ou simples:
microscópio composto tem duas ou mais lentes associadas; microscópio simples é
constituído por apenas uma lente células.
Em 1608, Zacharias Janssen (1580 - 1638) constrói o primeiro microscópio composto.
Em 1665, em seu livro Micrographia, Robert Hooke (1635 - 1703) utiliza um
microscópio composto para examinar amostras de cortiça e as descreve com uma
coleção de células.
Em 1674, Anton van Leeuwenhoek (1632 - 1723) relata a descoberta dos protozoários.
Mas as aplicações dos microscópios vão além das ciências biológicas:
Na área da física são utilizados para a investigação das propriedades físicas dos
materiais, na química para o estudo de cristais.
Na geologia para a análise da composição mineralógica e textura de rochas.
Além disso, os microscópios são usados em diagnósticos médicos e em diversas
aplicações industriais
Classificação dos microscópios compostos
Microscopia
Fluorescência
Óptico Invertido Ultravioleta
Microscopia
MEV
Contraste de Fases MET
Microscópio óptico
Microscópio óptico - Oculares
Microscópio óptico – canhão ou tubo
Microscópio óptico - Braço
Microscópio óptico - revólver
Microscópio óptico - objetivas
Microscópio óptico - Platina
Microscópio óptico - Condesador
Microscópio óptico - Diafragma
Microscópio óptico – Fonte de luz
Microscópio óptico – Parafusos Macrométro e Micrométro
Microscópio óptico
Microscópio óptico
Microscópio óptico
Terminologias utilizadas na microscopia
Abertura Numérica (N.A.)
A abertura numérica é um fator importante que determina a eficiência do condensador e
da objetiva. É representada pela fórmula: (NA = ηsinα), onde η é o índice de refração de
um meio (ar, água, óleo de imersão, etc.) entre a objetiva e o espécime ou condensador,
e α é metade do ângulo máximo em que a luz entra ou sai da lente de ou para um ponto
do objeto focado no eixo óptico.
Ajuste de dioptria
O ajuste da ocular de um instrumento para proporcionar acomodação para as diferenças
de visão do observador.
Microscópio óptico
Ampliação
O número de vezes que o tamanho da imagem excede o objeto original. Assim, é a
razão entre a distância entre dois pontos na imagem e a distância entre os dois pontos
correspondentes no objeto.
Ampliação total
A ampliação total de um microscópio é o poder de ampliação individual da objetiva
multiplicado pelo da ocular.
Campo de visão (F.O.V.)
A parte do campo da imagem, que é visualizada na retina do observador, e, portanto,
pode ser vista em qualquer momento. O campo de número de exibição é agora uma das
marcas padrão da ocular.
Microscópio óptico
Campo de visão real (Real Viewfield)
O diâmetro em milímetros do campo do objeto. Real Viewfield = Campo de visão da
ocular / ampliação da objetiva
Exemplo:
Campo de visão da ocular = 20 mm
Magnificação da objetiva = 10X
Diâmetro do campo do objeto = 20/10 = 2,0mm
Microscópio óptico
Condensador Abbe
Um condensador com duas lentes, localizado abaixo da platina do microscópio, com a
função de coletar luz e direcioná-la para o objeto a ser examinado. Sua alta abertura
numérica torna-o particularmente adequado para uso com a maioria das objetivas de
ampliação média e alta.
Contraste de fase
Uma forma de microscopia que converte diferenças na espessura do objeto e no índice
de refração em diferenças na amplitude e intensidade da imagem.
Diafragma
Controla o tamanho efetivo da abertura do condensador, regulando dessa forma a
quantidade de luz que entra.
Microscópio óptico
Distância de trabalho
Esta é a distância entre a lente frontal objetiva e a parte superior da lamínula quando o
espécime está em foco. Na maioria dos casos, a distância de trabalho de uma objetiva
diminui à medida que a ampliação aumenta.
Eixo X
O eixo que geralmente é horizontal em um sistema de coordenadas bidimensional. No
microscópio, o eixo X dos estágios da amostra é considerado o que corre da esquerda
para a direita.
Eixo Y
O eixo que geralmente é vertical em um sistema de coordenadas bidimensional. No
microscópio, o eixo Y dos estágios da amostra é considerado o que corre de frente para
trás.
Microscópio óptico
Espessura da lamínula
As objetivas de luz transmitida são projetadas para reproduzir imagens de espécimes
cobertos por uma lamínula fina. A espessura desta pequena peça de vidro é agora
padronizada em 0,17 mm para a maioria das aplicações.
Filtro
Os filtros são elementos ópticos que transmitem luz seletivamente. Assim, pode
absorver parte do espectro, reduzir a intensidade ou transmitir apenas comprimentos de
onda específicos.
Microscópio óptico
Micrômetro (μm)
Uma unidade métrica de medida de comprimento.
μm = 1×10-6 metros ou 0.000001 metros
Nanômetro (nm)
Uma unidade de comprimento no sistema métrico.
Nm= 1×10−9 metro ou 0.000000001 metro
Óleo de imersão
Qualquer líquido que ocupe o espaço entre o objeto e a objetiva do microscópio. Esse
líquido geralmente é necessário para objetivas de distância focal de 3 mm ou menos.
Microscópio óptico
Poder de resolução
Uma medida da capacidade do sistema óptico de produzir uma imagem que separe dois
pontos ou linhas paralelas no objeto.
Profundidade de foco
A profundidade axial do espaço em ambos os lados do plano da imagem dentro da qual
a imagem é focada. Portanto, quanto maior a N.A. da objetiva, menor a profundidade de
foco.
Resolução
O resultado da exibição de detalhes finos em uma imagem.
Microscópio óptico
CUIDADOS ESPECIAIS PARA INICIAR A ANÁLISE
JAMAIS ARRASTE OU DÊ TRANCO NOS MICROSCÓPIOS
1. Antes de ligar o microscópio à tomada, verificar se o potenciômeto da lâmpada está no mínimo (caso
não esteja, poderá queimar a lâmpada);
2. Verificar se a lente objetiva mirada à platina é a de menor aumento; caso não esteja posicioná-la;
3. Baixar a mesa ao mínimo para evitar raspar a lente na lâmina colocada sobre ela;
4. Colocar a lâmina sobre a mesa e subir lentamente até encontrar o foco do objeto;
5. Para passar a lente objetiva para os próximos aumentos não há necessidade de alterar a altura da mesa,
mas sim, acertar o foco após a mudança.
Microscópio óptico
FOCALIZAÇÃO AO MICROSCÓPIO ÓPTICO INICIAR
SEMPRE COM A OBJETIVA DE MENOR AUMENTO
1. Objeto no centro da mesa
2. Ajustar a iluminação (maior quantidade de luz através do objeto)
3. Elevar a mesa até a altura máxima utilizando o macrométrico
4. Iniciar o processo de focalização, com a menor objetiva (10x) abaixando vagarosamente a mesa com o
macrométrico
5. Fazer a focalização fina – micrométrico
6. Mudar a objetiva (para 40x) e utilizar apenas o micrométrico para focalização final
7. Acertar a quantidade de luz
8. Condensador deve permanecer sempre em posição elevada
Microscópio óptico
AO FINALIZAR A ANÁLISE
1. Baixe a luz à menor intensidade pelo potenciômetro;
2. Antes de remover a lâmina, baixe a mesa e volte à lente objetiva de menor aumento;
3. Caso tenha utilizado óleo de imersão para observação na objetiva de 100X, limpar cuidadosamente com etanol;
4. Remover a lâmina e substituir;
5. No caso da finalização das análises, a luz deverá ser desligada e guardá-lo nos devido local.
6. Vale lembrar novamente que o microscópio jamais deverá ser arrastado para mudança de local e deve-se evitar
trancos, pois isso poderá danificar o núcleo óptico do aparelho.
OBRIGADO!!!
Tudo o que fizerem, façam de todo o coração, como para o Senhor,
e não para os homens, sabendo que receberão do Senhor a
recompensa da herança. É a Cristo, o Senhor, que vocês estão
servindo.
Colossenses 3:23-24