Transcrição e Tradução

Transcrição e Tradução

A transferência de informações
genéticas do DNA para as
proteínas ocorre em duas
etapas:
• Transcrição, a transferência
das informações genéticas do
DNA para o RNA
• Tradução, a transferência de
informações do RNA para as
proteínas

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

 Expressão gênica

Em procariotos

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Expressão gênica

Em eucariotos

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Tipos de RNA

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Aspectos gerais da síntese de RNA
OBJETIVO
M &M
•Gerar plantas transgênicas
Alinhamento de múltiplasde seqüências incluindo as
cana-de-açúcar expressando
genômicas de quatro cepas de SCMV
•umUmaRNA na formaconservada
região de grampo –do gene da proteína de
shRNA (short hairpin)
revestimento visando
de ~ 456 o foi selecionada como gene
pb (CP)
genealvo edaamplificada
proteínaatravés
de da reação em cadeia da
revestimento
polimerase (CP)
(PCR)do vírus do
•mosaico
Obtençãoda de cana-de-açúcar
um miRNA regulador ativo em cana-de-
(SCMV).
açúcar) e inserção em duas cultivares de cana-de-açúcar
"SPF-234 e NSG-311" em experimentos independentes
usando bombardeamento de partículas
• Identificação molecular através de PCR e Southern blot
 Aspectos gerais da síntese de RNA

Diferencia-se do mecanismo de síntese de

DNA
• Os precursores são trifosfatos de
ribonucleosídios em vez de trifosfatos
de desoxirribonucleosídios
• Só um filamento de DNA é usado como
molde para a síntese de uma cadeia de
RNA complementar em qualquer região
• Possibilidade de iniciar novas cadeias de
RNA sem necessidade de um filamento
iniciador preexistente

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Aspectos gerais da
síntese de RNA

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Transcrição em procariotos
Um segmento de DNA transcrito para
produzir uma molécula de RNA é uma
unidade de transcrição
• Genes individuais
• Vários genes contíguos

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

 Transcrição em procariotos

• Iniciação
Estrutura de um promotor
típico em E. coli. A RNA
polimerase liga-se à
sequência -35 do promotor
e inicia o desenrolamento
dos filamentos de DNA na
sequência -10 rica em AT. A
transcrição começa na
bolha de transcrição em um
sítio 5 a 9 pares de bases
além da sequência -10.
Fonte: Snustad & Simmons (2013)
Sequencias de consenso
Transcrição em procariotos

• Alongamento

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Transcrição em procariotos

Terminação
• Ocorre quando a RNA polimerase
encontra um sinal de término.
• Terminadores independentes de ρ (rô)
• Terminadores dependentes de ρ

Fonte: Snustad & Simmons (2013) Fonte: Edisciplinas USP

Transcrição e Processamento de RNA em
eucariotos
População de transcritos
• RNA nuclear heterogêneo (hnRNA) em
vista da grande variação nos tamanhos das
moléculas de RNA presentes
• As principais partes desses hnRNA são
sequências de íntrons não codificadores,
que são excisadas dos transcritos primários
e degradadas no núcleo

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

 Transcrição e Processamento de RNA em
eucariotos

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

• A RNA polimerase II requer a assistência de vários fatores de transcrição basais.

• Outros fatores de transcrição e sequências reguladoras denominadas
acentuadores e silenciadores modulam a eficiência da iniciação
Transcrição e Processamento de RNA em
eucariotos
• Iniciação das cadeias de DNA
• Promotores reconhecidos pela RNA polimerase II são
constituídos de elementos conservados curtos, ou módulos,
localizados na região 5'

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Transcrição e Processamento de RNA em
eucariotos

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Alongamento da cadeia de RNA e acréscimo
de caps de metilguanosina na extremidade 5'

• Os caps de 7-MG são reconhecidos por

fatores proteicos que participam da
iniciação da tradução
• Também ajudam a proteger as cadeias
de RNA em crescimento contra a
degradação por nucleases
• Cadeia com cerca de 30 nucleotídeos

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Término por clivagem da cadeia e acréscimo
de caudas poli(A) 3’
• As extremidades 3' dos
transcritos de RNA sintetizados
por RNA polimerase II são
produzidas por clivagem
endonucleolítica dos
transcritos primários, não pelo
término da transcrição

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Processamento do RNA

• A maioria dos genes eucarióticos

contém sequências não codificadoras
denominadas íntrons (sequencias
intercalares), que separam as
sequências codificadoras ou éxons
(sequencias expressas)
• Excisão dos íntrons

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Processamento do RNA
Os íntrons não codificadores são excisados de transcritos
gênicos por vários mecanismos diferentes
Precursores do tRNA
Clivagem endonucleotídica precisa e reações de ligação catalisadas por atividades de
endonuclease e ligase de recomposição especial

De alguns precursores de rRNA

Mecanismo autocalítico em uma reação específica mediada pela própria molécula de
RNA

De transcritos de pré-mRNA nucleares (hnRNA)

Reações em duas etapas efetuadas por partículas de ribonucleoproteína complexas
chamadas espliceossomos
Processamento do RNA

Espliceossomos
• Estruturas complexas de RNA-proteínas. Essas estruturas assemelham-se, em muitos
aspectos, a pequenos ribossomos

• Elas contêm um conjunto de pequenas moléculas de RNA denominadas snRNA

(pequeno RNA nuclear) e cerca de 40 proteínas diferentes
Processamento do RNA

• Cinco snRNA participam da

recomposição do pré-mRNA
nuclear como componentes do
espliceossomo
• UI, U2, U4, U5 e U6,

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Tradução
• Moléculas de mRNA são traduzidas nas sequências de
aminoácidos dos polipeptídios segundo as especificações do
código genético

Macromoléculas envolvidas no processo

de tradução
Mais de 50 Proteínas
polipeptídios e solúveis que
três a cinco No mínimo 20 De 40 a 60 participam da
moléculas de enzimas diferentes iniciação, do
RNA em cada ativadoras de moléculas de alongamento e
ribossomo (de aminoácidos tRNA da finalização
acordo com a da cadeia
espécie) polipeptídica
Tradução

Componentes necessários para a síntese proteica - Ribossomos

• Distribuição
• Nos procariotos – em toda célula
• Nos eucariotos - frequentemente na extensa malha de membranas
intracelulares do retículo endoplasmático
• Os ribossomos são constituídos de proteínas e RNA
• Eles têm duas subunidades
• Se dissociam quando a tradução de uma molécula de mRNA é concluída e
se reassociam no início da tradução.
Tradução

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Tradução

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Síntese e processamento de Síntese e processamento de precursor
precursor de rRNA 30S em E. coli de rRNA 45S em mamíferos.
Tradução

Componentes necessários à síntese proteica - RNA transportador

• Embora os ribossomos tenham muitos dos componentes necessários para a
síntese proteica, e as especificações para cada polipeptídio estejam codificadas
em uma molécula de mRNA, a tradução da mensagem codificada por um mRNA
na sequência de aminoácidos de um polipeptídio requer outra classe de
moléculas de RNA, o RNA transportador (tRNA)
Tradução

Descoberta dos tRNA

• Francis Crick em 1958 - molécula adaptadora que mediaria a especificação de
aminoácidos por códons no mRNA
• Pequenas moléculas de RNA( 4S, de 70 a 95 nucleotídeos)
• O RNA solúvel (sRNA) -> RNA transportador (tRNA)
• Sequência de trinucleotídios, complementar à sequência do códon no mRNA e emparelha as bases
• Há de um a quatro tRNA, para cada um dos 20 aminoácidos
Tradução

Características em • Ψ = Pseudouridina
• I = Inosina
comum dos tRNA
𝐷𝑖
• 𝐻 = Di-hidrouridina
Presença 𝑈
Todos tRNA de diversas • T = Ribotimidina
Onde se
terminam bases
liga o • Meg = Metilguanosina
com a incomuns
aminoácido
sequencia em sua • 𝐷𝑖
Dimetilguanosina
cognato 𝑀𝑒𝐺
5’-CCA-3’ estrutura
primária • 𝑀𝑒
Metilinosina
𝐼
Tradução

Sequência nucleotídica e
configuração em folha de
trevo do tRNA de alanina
de 5. cerevisiae.
Fonte: Snustad & Simmons (2013)
Tradução
• Cada ribossomo tem três sítios de ligação ao tRNA

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Tradução

A síntese de polipeptídios usando moldes de mRNA

Moléculas de mRNA Ribossomos tRNA

• Sequências de • Componentes • Adaptadores

aminoácidos dos macromoleculares necessários para
produtos gênicos necessários para a incorporar os
polipeptídicos tradução aminoácidos aos
polipeptídios em
resposta aos
códons no mRNA
Tradução
• Iniciação da cadeia polipeptídica

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Tradução
• Iniciação da cadeia polipeptídica

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Tradução
• Iniciação da cadeia polipeptídica

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Tradução

A iniciação da tradução é mais complexa em eucariotos

• Participação de vários fatores de iniciação solúveis. Todavia, o processo geral é
semelhante, exceto por dois aspectos
• O grupo amino da metionina no tRNA iniciador não é formilado como em
procariotos
• O complexo de iniciação forma-se na terminação 5‘ do mRNA, não no sítio de
início da tradução Shine-Dalgarno/ AUG como em E. coli
Tradução

Fonte: Watson et al (2015)

 RESULTADO e M&M
OBJETIVOS
• Um acesso
Expandir de feijão-vagemdada
a caracterização
Tradução coleção e 19 genótipos de feijão
resistência do ClYVV emdas
seco representando a maioria
• Fator de iniciação 4E feijoeiro
principais por
classes demeiomercadodade
avaliação
feijão comum fenotípica em
foram identificados
• Pve-IF4E comode
estufa resistentes
391 acessos da
• Genes de resistência • Todos os genótipos que
USDA Core Collection,
permaneceram sem sintomas
99
• bc-3 e bc-3² cultivares
durante de feijão-vagem
a e
avaliação
linhagens reprodutivas,
demonstraram e um
possuir mutações
em com
painel PveIF4E
75que correspondiam
genótipos com a
bc-3 ou bc-3 2.
reação conhecida a outros
• Além disso, a combinação do alelo
patógenos
bc-u bc-22 evirais e também
o alelo By-2 para
determinar
demonstraram se ensaios comos
condicionar
Kompetitive Allele Specific
fenótipos de resistência ao ClYVV.
• Estes resultados
Polymerase Chainsintetizam
Reactionum
novo modelo para resistência
(KASP) poderiam ser
genética ao ClYVV e validam o uso
validados
dos ensaios como
KASP para futuras
a busca de
fontes debc-3
alelos alelos de resistência
em larga escala.
bc-3.
Tradução
Alongamento da cadeia polipeptídica

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Tradução

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Tradução

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

Tradução
• Fator de alogamento
• EF-1α - translation elongation factor-1α RESULTADOS
• Foram usados 877 isolados de Fusarium,
e identificadas 155 (17,7%) como
OBJETIVO
F. proliferatum, características
Identificar
morfológicase ecaracterizar
sequenciamentoFusarium
parcial
de DNA - translation
proliferatum obtido elongation
a partir defactor-1α
casos
de (EF-1α)
ceratite usando sequenciamento
• A maioria dos pacientes com ceratite
parcial
positivade para DNA [Link] proliferatum
fator de
alongamento
(44/155,28,4%)da tinha
tradução
idade (EF)
entre-1α.
51 e 60
anos
• A principal causa de infecção foi lesão por
uma planta (51/155, 32,9%)
• Testes de suscetibilidade antifúngica –
indicação de tratamento
• De acordo com os dados obtidos F.
proliferatum identificado através do
sequenciamento de DNA EF-1ɑ é uma
nova espécie importante que causa
Tradução
• Término da cadeia polipeptídica

Fonte: Snustad & Simmons (2013)

OBRIGADO