PERFIL EUROLINE ANA 23 (IgG)

Instrução de teste
NÚMERO DO PEDIDO ANTICORPOS CONTRA SUBSTRATO IG CLASS FORMATO
dsDNA, nucleossomos, histonas, SS-A
Ro-52, SS-B, nRNP/Sm, Sm, Mi-2α Revestido de Ag
DL 1590-1601-23 G 16 x 01 (16)
Mi-2β, Ku, CENP A, CENP B, Sp100 IgG imunoblot
DL 1590-6401-23 G 64 x 01 (64)
PML, Scl-70, PM-Scl100, PM-Scl75 tiras
RP11, RP155, gp210, PCNA, DFS70
Indicações: O kit de teste EUROLINE fornece determinação qualitativa in vitro de autoanticorpos humanos
da classe de imunoglobulina IgG aos 23 antígenos diferentes: dsDNA, nucleossomos, histonas, SS-A,
Ro-52, SS-B, nRNP/Sm, Sm, Mi-2α, Mi-2β, Ku, CENP A, CENP B, Sp100, PML, Scl-70, PM-Scl100
PM-Scl75, RP11, RP155, gp210, PCNA e DFS70 no soro ou plasma para apoiar o diagnóstico de
Síndrome de Sharp (MCTD), lúpus eritematoso sistêmico (LES), síndrome de Sjögren, progressivo
esclerose sistêmica, polimiosite/dermatomiosite, síndrome de sobreposição, forma limitada de esclerose sistêmica progressiva
esclerose (síndrome CREST) e colangite biliar primária.
Application: Em um consenso internacional ([Link], 2014) para o padronizado
nomenclatura dos padrões de células HEp-2 na imunofluorescência indireta, diferentes padrões de núcleo celular foram
definido (padrão, AC1 –XX). O EUROLINE ANA-Profile 23 oferece uma abordagem multiplex para o
confirmação e diferenciação de 23 autoanticorpos que causam os padrões nucleares descritos no
consenso, em apenas uma incubação, com processamento totalmente automatizado opcional e avaliação objetiva de
resultados dos testes usando o software EUROLineScan.
Princípios do teste: O kit de teste contém tiras de teste revestidas com linhas paralelas de anticorpos altamente purificados.
gens. No primeiro passo da reação, as tiras de imunoblot são incubadas com amostras diluídas dos pacientes. No
no caso de amostras positivas, os anticorpos IgG específicos (também IgA e IgM) se ligarão ao correspondente
site antigênico. Para detectar os anticorpos ligados, é realizada uma segunda incubação utilizando uma enzima-
IgG anti-humano rotulado (conjugado enzimático) catalisando uma reação de cor.
Conteúdo do kit de teste:
Componente Formato Formato Símbolo
1. Testes de tiras revestidos com os antígenos
dsDNA, nucleossomos, histonas, SS-A, Ro-52,
SS-B, nRNP/Sm, Sm, Mi-2α, Mi-2β, Ku, CENP A
16 tiras tirinhas de 4 x 16 .TIRA.
CENP B, Sp100, PML, Scl-70, PM-Scl100
PM-Scl75, RP11, RP155, gp210, PCNA e
DFS70
2. Controle positivo
1 x 0,02 ml 4 x 0,02 ml .CONTROLE POS 100x.
(IgG, humano), concentração 100x
3. Conjugado enzimático
IgG anti-humano marcado com fosfatase alcalina 1 x 3 ml 4 x 3 ml .CONJUGAR 10x.
(cabra), 10x concentrado
4. Tampão de amostra, pronto para uso 1 x 100 ml 3 x 100 ml .AMOSTRA DE BUFFER.
5. Tampão de lavagem, concentração 10x 1 x 50 ml 1 x 100 ml .LAVAGEM BUFFER 10x.
6. Solução de substrato
Cloreto de nitroazul de tetrazólio/5-Bromo-4-cloro- 1 x 30 ml 4 x 30 ml .SUBSTRATO.
3-indolilfosfato (NBT/BCIP), pronto para uso
7. Bandeja de incubação 2 x 8 canais ---
8. Instruções de teste 1 livreto 1 livreto
.LOTE. Lot description Temperatura de armazenamento

.IVD. Dispositivo médico de diagnóstico in vitro Não aberto utilizável até

As modificações na versão anterior estão marcadas em cinza.

 Médica
EUROIMMUN Diagnósticos laborais
AG

Os seguintes componentes não estão incluídos nos kits de teste, mas podem ser encomendados na EUROIMMUN sob o
números de ordem respectivos.
A realização do teste requer uma bandeja de incubação:
ZD 9895-0130 Bandeja de incubação com 30 canais
ZD 9898-0144 bandeja de incubação com 44 canais (preto, para o EUROBlotOne e EUROBlotCamera)
sistema)
Para a criação de protocolos de trabalho e a avaliação de tiras de teste incubadas usando o EUROLineScan
papel verde e folha adesiva são necessários:
ZD 9880-0101 Papel verde (1 folha)
ZD 9885-0116 Folha adesiva para aproximadamente 16 tiras de teste
ZD 9885-0130 Folha adesiva para aprox. 30 tiras de teste

Preparação e estabilidade dos reagentes

Nota: Este kit de teste só pode ser utilizado por pessoal treinado. As tiras de teste e as bandejas de incubação são destinadas
para uso único. Todos os reagentes devem ser trazidos à temperatura ambiente (+18°C a +25°C) aprox.
30 minutos antes do uso. Não aberto, os reagentes são estáveis até a data de validade indicada quando armazenados a
+2°C a +8°C. Após a abertura inicial, os reagentes são estáveis por 12 meses ou até a data de validade, a menos que
salvo indicação em contrário nas instruções. Reagentes abertos também devem ser armazenados a +2°C a +8°C e protegidos
da contaminação.

-Tiras de teste revestidas: Prontas para uso. Abra a embalagem com as tiras de teste apenas quando as tiras tiverem
atingiu a temperatura ambiente (+18°C a +25°C) para evitar condensação nas tiras. Após a remoção de
as tiras o pacote deve ser selado hermeticamente e armazenado a +2°C a +8°C.

- Controle positivo: O controle é um concentrado 100x. Para a preparação do controle pronto para uso
a quantidade necessária deve ser retirada do frasco usando uma ponta de pipeta limpa e diluída 1:101
com tampão de amostra. Exemplo: adicione 15 µl de controle a 1,5 ml de tampão de amostra e misture bem. O
o controle diluído pronto para uso deve ser utilizado no mesmo dia de trabalho.

Conjugado enzimático: O conjugado enzimático é fornecido como um concentrado 10x. Para a preparação de
o conjugado de enzima pronto para uso, a quantidade necessária deve ser retirada do frasco usando um
limpe a ponta da pipeta e dilua 1:10 com tampão de amostra. Para uma tira de teste, dilua 0,15 ml de enzima
conjugue com 1,35 ml de tampão de amostra. O conjugado de enzima diluído pronto para uso deve ser utilizado em
o mesmo dia útil.

Buffer de amostra: Pronto para uso.

-Buffer de lavagem: O buffer de lavagem é fornecido como um concentrado 10x. Para a preparação do pronto para
use uma solução de lavagem, a quantidade necessária deve ser retirada do frasco usando uma ponta de pipete limpa e
diluído 1:10 com água destilada. Para uma tira de teste, dilua 1 ml em 9 ml de água destilada. Pronto para
o tampão de lavagem diluído deve ser usado no mesmo dia de trabalho.

-Solução de substrato: Pronto para uso. Feche o frasco imediatamente após o uso, pois o conteúdo é sensível.
para a luz .

Armazenamento e estabilidade: O kit de teste deve ser armazenado a uma temperatura entre +2°C e +8°C. Não deve
congele. Não aberto, todos os componentes do kit de teste são estáveis até a data de validade indicada.

Eliminação de resíduos: Amostras de pacientes, controles e tiras de teste incubadas devem ser manuseadas como infecciosas.
resíduos. Outros reagentes não precisam ser coletados separadamente, a menos que declarado de outra forma em documentos oficiais
regulamentos.

Aviso: O controle de origem humana testou negativo para HBsAg, anti-HCV, anti-HIV-1 e
anti-HIV-2. No entanto, todos os materiais devem ser tratados como um potencial risco de infecção e devem
ser manuseados com cuidado. Alguns dos reagentes contêm azida de sódio em uma concentração não declarável.
Evite o contato com a pele.

2
 Médica
EUROIMMUN Diagnóstico laboratorial
AG

Preparação e estabilidade das amostras do paciente

Amostras: Soro humano ou plasma EDTA, heparina ou citrato.

Estabilidade: Amostras de pacientes a serem investigadas podem geralmente ser armazenadas a +2°C a +8°C por até 14 dias.
Amostras diluídas devem ser incubadas dentro de um dia útil.

Diluição da amostra: As amostras dos pacientes para análise são diluídas 1:101 com buffer de amostra usando um limpo
ponta de pipeta. Por exemplo, adicione 15 µl de amostra a 1,5 ml de tampão de amostra e misture bem por vortexing. Amostra
pipetas não são adequadas para misturar.

Incubação

Pré-tratar: Remova a quantidade necessária de tiras de teste da embalagem e coloque-as

cada um em um canal vazio (Certifique-se de que a superfície das viagens de teste não está
danificado!) O número na fita de teste deve ser visível. Preencha os canais de
a bandeja de incubação de acordo com o número de amostras de soro que devem ser
testado com 1,5 ml de tampão de amostra cada.
Incubar por 5 minutos à temperatura ambiente (+18°C a +25°C) em um agitador.
agitador. Em seguida, aspire todo o líquido.

Incubar Preencha cada canal com 1,5 ml das amostras de soro diluído usando um limpo
(1stpasso) pontas de pipeta.
Incube por 30 minutos à temperatura ambiente (+18°C a +25°C) em uma plataforma oscilante
misturador.

Wash: Aspire o líquido de cada canal e lave 3 x 5 minutos cada um com

1,5 ml de tampão de lavagem em concentração de trabalho em um agitador oscilante.

Incubar: Pipetar 1,5 ml de conjugado de enzima diluído (marcado com fosfatase alcalina
(2ndpasso) IgG anti-humano) em cada canal.
Incubar por 30 minutos à temperatura ambiente (+18°C a +25°C) em uma mesa de agitação
coqueteleira.

Lavar Aspire o líquido de cada canal. Lave conforme descrito acima.

Incubar: Pipete 1,5 ml de solução de substrato nos canais da bandeja de incubação.

(3rdetapa) Incubar por 10 minutos em temperatura ambiente (+18°C a +25°C) em uma plataforma oscilante.
shaker.

Pare: Aspire o líquido de cada canal e lave cada tira 3 x 1 minuto

com água destilada.

Avaliar: Coloque a tira de teste no protocolo de avaliação, deixe secar ao ar e avalie.

Para incubação automatizada com o EUROBlotMaster, selecione o programa Euro01 AAb EL30.

Para incubação automatizada com o EUROBlotOne, selecione o programa EURO 01/02.

3
 Médico
EUROIMMUN Labordiagnóstica
AG

EUROLINE ANA Perfil 23 (IgG)

Protocolo de incubação

Pré-tratar
Coloque a tira de teste no canal de incubação e preencha cada um
canal com 1,5 ml de tampão de amostra

5 min Agitar

1. Step: Incubate
Aspire, pipete 1,5 ml de amostra de soro diluído (1:101) em
o canal de incubação

30 min Agitar

Lavar
Aspire, lave 3 x 5 min com 1,5 ml de concentração de trabalho
lavar o tampão cada

2. Passo: Incubar
Aspire a partir de, pipete 1,5 ml de conjugado enzimático em
canal de incubação

30 min Agitar

Lavar
Aspire, lave 3 x 5 min com 1,5 ml de concentração de trabalho
lavar o tampão cada

3. Etapa: Incubar
Aspire, pipete 1,5 ml de substrato no canal de incubação

10 min Agitar

Pare
Aspirar, enxaguar três vezes com 1,5 ml de água destilada

Avaliação
EUROLineScan (digital)

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 Médica
EUROIMMUN Diagnóstico Laboratorial
AG

Interpretação dos resultados

Manipulação: Para a avaliação de tiras de teste incubadas, geralmente recomendamos o uso de
EUROLineScansoftware. Após parar a reação usando água deionizada ou destilada, coloque o em-
Coloque as tiras de teste incubadas na folha adesiva do protocolo de trabalho verde usando um par de pinças. O
a posição das tiras de teste pode ser corrigida enquanto estão molhadas. Assim que todas as tiras de teste forem colocadas
sobre o protocolo, eles devem ser pressionados firmemente usando papel de filtro e deixados para secar ao ar. Depois que estiverem secos,
as tiras de teste serão coladas ao filme adesivo. As tiras de teste secas são então digitalizadas usando um scanner plano
scanner (EUROIMMUN) e avaliado com EUROLineScan. Alternativamente, a imagem e a avaliação são
possível diretamente das bandejas de incubação (EUROBlotCamera e EUROBlotOne). Para geral
Para informações sobre o programa EUROLineScan, consulte o manual do usuário do EUROLineScan.
(YG_0006_A_UK_CXX, EUROIMMUN). O código para inserir o teste no EUROLineScan é
ANA_23.
Nota: O desempenho correto da incubação é indicado por uma coloração intensa da banda de controle.
Uma faixa branca na posição de um antígeno deve ser interpretada como negativa.
Antígenos, padrões nucleares HEp2 associados (padrão Anti-Célula, AC1 - XX) e sua disposição
nas tiras: As tiras de teste EUROLINE foram revestidas com os seguintes antígenos:
Antígeno AC Description
dsDNA
dsDNA AC-1 DNA de dupla fita nativa altamente purificado Nucleossomos
Núcleo- Histonas
AC-1 Mononucleossomos nativos altamente purificados
alguns
Histonas AC-1 Histonas altamente purificadas SS-A
Ro-52
SS-A AC-4 Antígeno SS-A altamente purificado (60 kDa, nativo)
Ro-52 -* Ro-52 recombinante (52 kDa) SSB
SS-B AC-4 Antígeno SS-B altamente purificado (nativo)
RNP/Sm
nRNP/Sm AC-5 U1-nRNP altamente purificado (nativo) Sm
Antígeno Sm altamente purificado (nativo), o principal componente Mi-2α
Sm AC-5
da preparação de Sm é apresentada pela proteína D
Mi-2α AC-4 Proteína recombinante Mi-2α Mi-2β
Mi-2β AC-4 Proteína recombinante Mi-2β
Ku AC-4 Proteína Ku recombinante Ku
CENP A AC-3 Proteína A do centrômero recombinante CENP A
CENP B AC-3 Proteína B do centrômero recombinante CENP B
Sp100 AC-6 Proteína Sp100 recombinante Sp100
PML
PML AC-6 Proteína PML recombinante
Scl-70
Scl-70 AC-29 Antígeno Scl-70 altamente purificado (topoisomerase I de DNA)
PM-Scl100AC-8 Proteína recombinante PM-Scl100 PM100
PM-Scl75 AC-8 Proteína recombinante PM-Scl75 (75 kDa) PM75
Recombinant subunit POLR3K of human RNA
RP11 AC-10* RP11
polimerase III
RP155
Subunidade recombinante POLR3A do RNA humano
RP155 AC-10*
polimerase III gp210
gp210 Proteína recombinante gp210 AC-11*
PCNA AC-13 PCNA recombinante (36 kDa) PCNA
DFS70 AC-2 DFS70 recombinante (comprimento total)
DFS70
A alocação de antígenos nas classificações de AC foi feita com base em [4] e nos padrões conhecidos de
Células HEp-2 da EUROIMMUN. Ro-52 não foi alocada a nenhum AC. RP11 e RP155 apresentam um padrão em
As células HEp-2 da EUROIMMUN, que correspondem ao AC-10, em [4], a RNA polimerase AC-5 está alocada. Em Controle
Células EUROIMMUN HEp-2, gp210 mostra um AC-11, em [4], gp210 AC-12 é alocado.

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 Médica
EUROIMMUN Laboratóriodiagnóstico
AG

A EUROIMMUN recomenda interpretar os resultados com base na intensidade do sinal:

Intensidade do sinal EUROLineScan

Resultado
Scanner de mesa
0-5 o Negativo
6-10 (+) Frontal
11-25 ou 26-50 +, ++ Positivo
>50 +++ Fortemente positivo

Os resultados na faixa limítrofe (+) devem ser avaliados como aumentados, mas negativos. A tabela acima
contém valores para a avaliação usando um scanner de mesa. Os valores para outros instrumentos suportados
pelo EUROLineScan pode ser encontrado no programa EUROLineScan. Para isso, marque o correspondente
análise na lista de testes (menu principal "Ajuda" → "Teste") e clique em detalhes e selecione o correspondente
instrumentin"imagem fonte".

Um teste de imunofluorescência indireta deve sempre ser realizado em paralelo com a determinação de
anticorpos do núcleo celular pela EUROLINE. Por um lado, isso fornece uma verificação de plausibilidade como um seguro-
proteger contra resultados falso-positivos, por outro lado, usando células EUROIMMUN HEp-2, e em
particularmente em combinação com seções congeladas do fígado de primatas, a imuno-fluorescência permite a de-
detecção de uma gama mais ampla de anticorpos do núcleo celular, uma vez que nem todos os antígenos do núcleo celular estão atualmente disponíveis
na EUROLINE.

Para o diagnóstico médico, os sintomas clínicos do paciente e, se disponíveis, outros achados devem
deve sempre ser considerado juntamente com o resultado sorológico. Um resultado sorológico negativo não
excluir a presença de uma doença.

Características do teste

Calibração: A reatividade de cada antígeno é padronizada pelo soro de referência humano CDC-ANA #1 para
#11 dos "Centros de Controle e Prevenção de Doenças" (CDC, Atlanta, EUA). A reatividade do CDC
O soro na EUROIMMUN EUROLINE é resumido na tabela a seguir:

CDC-1 CDC-2 CDC-3 CDC-4 CDC-5 CDC-6 CDC-7 CDC-8 CDC-9 CDC-10 CDC-11

Antígeno Homoge Manchado/Com Manchas RNP Sm SS-A nucleolar Centro- Scl-70 Jo-1 PM-Scl
neous/ SS-B meramente
rebordo
nRNP/Sm pos. neg. pos. pos. pos. neg. neg. neg. neg. neg. neg.
Sm pos. neg. pos. neg. posição. neg. neg. neg. neg. neg. neg.
SS-A não pos. pos. neg. neg. não. pos. neg. neg. neg. neg.
Ro-52 neg. pos. posição. neg. neg. neg. pos. neg. neg. posição neg.
SS-B neg. pos. pos. neg. neg. neg. neg. neg. neg. não. neg.
Scl-70 neg. neg. neg. neg. neg. neg. não. neg. pos. não neg.
PM-Scl neg. neg. não. neg. neg. neg. neg. neg. não. neg. pos.
Jo-1 neg. neg. neg. neg. neg. não. neg. neg. neg. pos. neg.
CENP B não neg. neg. neg. neg. neg. neg. posição. neg. neg. neg.
PCNA neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg.
dsDNA pos. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg. neg.
Nucleossomos pos. neg. neg. neg. neg. neg. pos. neg. neg. neg. não.
Histonas pos. neg. neg. neg. neg. neg. pos. neg. neg. neg. neg.
Rib. P proteína neg. neg. não. neg. não. neg. neg. neg. neg. neg. neg.
AMA-M2 neg. neg. não. não. neg. neg. neg. pos. neg. neg. neg.

A especificidade desses soros foi determinada no CDC por padrões de imunofluorescência (substrato:
células HEp-2 e fígado de primatas), os resultados da imunodifusão dupla ou eletroforese imunoataque
(as soro não são em nenhum caso monoespecíficos).

Faixa de medição: O EUROLINE é um método qualitativo. Nenhuma faixa de medição é fornecida.

6
 Médico
EUROIMMUN Laboratório de Diagnóstico
AG

Reações cruzadas: A alta especificidade analítica do sistema de teste é garantida pela qualidade do
substratos de antígenos usados (antígenos e fontes de antígenos). Este EUROLINE detecta especificamente a classe IgG
anticorpos contra dsDNA, nucleossomos, histonas, SS-A, Ro-52, SS-B, nRNP/Sm, Sm, Mi-2α, Mi-2β, Ku
CENP A, CENP B, Sp100, PML, Scl-70, PM-Scl100, PM-Scl75, RP11, RP155, gp210, PCNA e
DFS70. Nenhuma reação cruzada com outros autoanticorpos foi encontrada.

Interferência: Soro hemolítico, lipêmico e icterícia até uma concentração de 5 mg/ml de hemoglobina, de
20 mg/ml de triglicerídeos e 0,4 mg/ml de bilirrubina não mostraram efeito nos resultados analíticos do presente
EUROLINE.
Variação inter e intraensaio: A variação interensaio foi determinada por múltiplas análises de
amostras caracterizadas ao longo de vários dias. A variação intraensaio foi determinada por múltiplas análises
de amostras caracterizadas em um dia. Em todos os casos, a intensidade das bandas estava dentro do especificado
Essa EUROLINE apresenta excelente reprodutibilidade inter e intraensaio.
Sensitivity and specificity:
dsDNA: Para a detecção de autoanticorpos contra dsDNA, uma sensibilidade de 94% em referência a
O método ELISA foi determinado usando 36 amostras de pacientes com LES. A especificidade foi de 100% para
doadores de sangue saudáveis (n = 50) e para um painel de doenças reumáticas não-Lupus (síndrome de Sjögren)
n = 14, esclerose sistêmica n = 18).
Nucleossomos: Para a detecção de autoanticorpos contra nucleossomos, uma sensibilidade de 97% com
a referência ao método EUROIMMUN Anti-Nucleosomes ELISA (IgG) foi determinada usando
34 amostras de pacientes com LES. A prevalência clínica determinada pelo ELISA (teste notificado pelo CE,
revestido com mononucleossomos nativos livres de histona H1 e proteínas não-histona, Patente
EP1476750B1/US7566545 (B2) equivale a 53%. A especificidade foi de 100% para doadores de sangue saudáveis.
(n = 50) e em um painel de doenças reumáticas não SLE (síndrome de Sjögren n = 14, esclerose sistêmica
n = 18).
Histones:For the detection of autoantibodies against histones a sensitivity of 78% with reference to the
ELISA method was determined using 41 samples of patients with SLE. The specificity was 100% for
doadores de sangue saudáveis (n = 50) e 97% em um painel de doenças reumáticas não relacionadas ao LES (síndrome de Sjögren)
n = 14, esclerose sistêmica n = 18).
SS-A: Para a detecção de autoanticorpos contra SS-A, uma sensibilidade de 100% em relação ao ELISA
o método foi determinado usando 14 amostras de pacientes com síndrome de Sjögren. A especificidade foi
100% para doadores de sangue saudáveis (n = 50) e 95% em um painel de doenças reumáticas não-SLE (sistêmicas
esclerose n = 18, MCTD n = 22.
Ro-52: Para a detecção de autoanticorpos contra Ro-52, uma sensibilidade de 100% em relação a
o método western blot foi determinado usando 103 amostras de pacientes com LES e síndrome de Sjögren
(LES n = 23, síndrome de Sjögren n = 77 e lúpus eritematoso neonatal n = 3). A especificidade foi
100% para doadores de sangue saudáveis (n = 65). Anticorpos contra Ro-52 não são específicos para doenças e podem ser
detectado em amostras de pacientes sofrendo de miosite, esclerose sistêmica e outras doenças reumáticas
doenças, ou seja, em 7 de 20 amostras de pacientes com esclerose sistêmica, autoanticorpos contra Ro-52 foram
detectado.
Reações de anticorpos isolados com Ro-52 não devem ser avaliadas como positivas para anti-SS-A ou específicas para
SLE ou síndrome de Sjögren, uma vez que podem ocorrer em muitas doenças autoimunes diferentes.

Recomendamos interpretar o EUROLINE com referência ao teste de triagem ANA (HEp-2

células/fígado de primata) da seguinte forma:

IIFT EUROLINE
Result
Células HEp-2 Ro-52 (52 kDa) SS-A (60 kDa)
ANA negativo positivo negativo Anti-SS-A negativo

ANA positivo positivo negativo Anti-SS-A negativo

ANA positivo positivo ou negativo positivo Anti-SS-A positivo

7
 Médica
EUROIMMUN Diagnóstico Laboratorial
AG

Foi demonstrado em vários estudos que soro positivo para anti-SS-A sempre contém anticorpos contra
native SS-A (proteína de 60 kDa) e pode também apresentar anticorpos contra Ro-52. Por exemplo, em um
Estudo japonês (EUROIMMUN) com soros de 103 pacientes com lupus eritematoso sistêmico (LES) e síndrome de Sjögren (LES n = 26,
A síndrome de Sjögren n = 77), que foram caracterizadas como positivas para anti-SS-A por dupla imunodifusão,
foram investigados. 102 soros reagiram com SS-A nativo, e 90 soros reagiram adicionalmente com o Ro-52
banda. Mas nenhum soro mostrou apenas uma reação com a banda Ro-52. Este estudo demonstra que anti-
corpos contra o SS-A nativo podem ser detectados de forma confiável usando o SS-A nativo. Em casos raros e em
casos suspeitos de síndrome de lúpus neonatal, o antígeno Ro-52 pode fornecer informações suplementares importantes
informação.

SS-B: Para a detecção de autoanticorpos contra SS-B, uma sensibilidade de 100% em relação ao ELISA
o método foi determinado usando 14 amostras de pacientes com síndrome de Sjögren. A especificidade foi
100% para doadores de sangue saudáveis (n = 50) e 97% em um painel de doenças reumáticas não-LES (sistêmico
sclerosis = 18, MCTD n = 22).

nRNP/Sm: Para a detecção de autoanticorpos contra RNP/Sm, uma sensibilidade de 100% em referência a
o método ELISA foi determinado usando 22 amostras de pacientes com MCTD (doença do tecido conectivo misto)
doença). A especificidade foi de 100% para doadores de sangue saudáveis (n = 50) e 96% em um painel de não-LES
doenças reumáticas (síndrome de Sjögren n = 14, esclerose sistêmica n = 18, polimiosite n = 25).

Sm: Para a detecção de autoanticorpos contra Sm, uma sensibilidade de 100% em relação ao ELISA
o método foi determinado usando 45 amostras de pacientes com LES. A especificidade foi de 100% para saudáveis
doadores de sangue (n = 50) e 100% em um painel de doenças reumáticas não-SLE (síndrome de Sjögren n = 14,
esclerose sistêmica n = 18, polimiosite n = 25.

Mi-2α: Sera de 264 pacientes com miosite caracterizada clinicamente e 120 amostras de controle foram
investigados por anticorpos contra Mi-2α. A prevalência foi de 7%, com uma especificidade de 100%.

Mi-2βe Ku: Sera de 153 pacientes com miosite clinicamente caracterizada (50 pacientes com
dermatomiosite, 89 pacientes com polimiosite, 4 pacientes com dermatomiosite juvenil e 10 pacientes
com miopatias por corpos de inclusão) e 77 soros de pacientes controle (26 pacientes com síndrome de Sjögren,
26 pacientes com LES e 25 pacientes com esclerose sistêmica foram investigados quanto a anticorpos contra
Mi-2β e Ku. Houve prevalências de 3% cada, com uma especificidade para miosite de 100% e 97%.
respectivamente.

Scl-70, CENP A, CENP B, RP11, RP155, PM-Scl100 e PM-Scl75: 129 soros de pacientes com
esclerose sistêmica clinicamente caracterizada (SSc, forma difusa e limitada) assim como 202 soros de
pacientes controle (50 pacientes com dermato/polimiosite, 50 com lúpus eritematoso sistêmico, 42 com
artrite reumatoide e 60 doadores de sangue saudáveis foram testados para anticorpos contra Scl-70, CENP A,
CENP B, RP11 e RP155 (subunidades da RNA Polimerase III), PM-Scl100 e PM-Scl75. Sensibilidades e
as especificidades foram calculadas pela análise ROC no valor de corte dado de 10 unidades de intensidade de
Programa EUROLINEScan.

Anti- Sensitivity [%] Specificity [%]

Scl-70 65,1 98,5
CENP A 10,9 98,5
CENP B 13.2 98,5
RP11 5.4 99,5
RP155 7.0 100,0
PM-Scl100 6.6 99.0
PM-Scl75 11.8 98,0

8
 Médica
EUROIMMUN Laboratório de diagnóstico
AG

Sp100, PML e gp210: Soro de 170 pacientes com colangite biliar primária clinicamente caracterizada
colangite (PBC), 49 soros de pacientes com hepatite autoimune (AIH), 200 soros de pacientes com
hepatite viral (HCV ou HBV) foram investigadas para a presença de anticorpos contra Sp100, PML e
gp210. Com base neste estudo, quatro pacientes do painel de pacientes com AIH foram diagnosticados com PBC/AIH
síndrome de sobreposição.

Anti- Sensitivity [%] Specificity [%]

Sp100 20.6 99,2
PML 12.9 98,8
gp210 26,5 98,8

PCNA: Em 13 dos 20 soros dos pacientes, apresentando um padrão positivo de ciclinas I na imunofluorescência indireta.
(células HEp-2/fígado de primata), autoanticorpos contra PCNA foram detectados. A especificidade foi de 100% para
doadores de sangue saudáveis (n = 50) e 99% em soro negativo para ciclina I de pacientes com LES (n = 83).

A investigação de soros de 198 doadores de sangue saudáveis mostrou uma prevalência de 3,5% (n = 7)
para autoanticorpos contra DFS70. Todas as amostras positivas apresentaram um padrão ANA granulado e um granulado
coloração dos cromossomos (típica do anti-DFS70) no teste de imuno fluorescência indireta com
Células HEp-2. A investigação de soros de 50 amostras com padrão ANA positivo e parcialmente claro mostrou,
em relação ao método de referência ELISA, uma sensibilidade de 92,3% com uma especificidade de 91,7% para o
detecção de autoanticorpos contra DFS70. Com relação ao método de referência Westernblot (total
lisado celular de células HEp-2 com detecção específica da banda DFS70), a investigação mostrou uma
sensibilidade de 100% com uma especificidade de 85,7% nas mesmas amostras (n = 49).

Reference range:The reference range was determined by incubating samples from healthy blood
doadores (n = 50). Todos os doadores de sangue foram negativos (exceto veja DFS70).

Significado clínico
Os anticorpos contra antígenos nucleares (ANA) são dirigidos contra vários componentes nucleares celulares.
(substâncias bioquímicas no núcleo da célula). Estas abrangem ácidos nucleicos, proteínas nucleares da célula e
ribonucleoproteínas. A detecção sorológica de autoanticorpos contra nucleoproteínas celulares individuais ou várias
autoantígenos é um elemento essencial no diagnóstico de doenças autoimunes, particularmente reumáticas
As doenças. A frequência (prevalência) de anticorpos antinucleares em doenças reumáticas inflamatórias é
entre 20% e 100% (na artrite reumatoide entre 20% e 40%). Portanto, ANA diferencial
diagnósticos para detectar autoanticorpos contra diferentes antígenos nucleares é indispensável para o
identificação de doenças reumáticas individuais. A análise de ANA também é útil no diagnóstico de outras
doenças autoimunes, como colangite biliar primária (CBP) ou hepatite autoimune (HAI).
Os perfis da ANA oferecem combinações de testes inovadoras baseadas na tecnologia lineblot (EUROLINE).
Resultados de testes positivos fornecem informações serodiagnósticas importantes para o diagnóstico da doença reumática.
doenças abaixo, bem como outras doenças autoimunes, como PBC.
Lúpus eritematoso sistêmico (LES)
LES é uma doença autoimune inflamatória crônica que ocorre em fases e afeta principalmente o
tecido conectivo e vários sistemas orgânicos. Em todo o mundo, as mulheres são dez vezes mais frequentemente
afetadas pela colagenose do que os homens, onde há diferenças regionais, por exemplo, 12,5 em
100.000 mulheres na Europa Central e até 100 em 100.000 mulheres nos EUA têm LES.
a faixa etária de predileção é entre 15 e 30 anos. Os sintomas clínicos variam muito e podem incluir
butterfly erythema, discoid hyperkeratotic skin changes, purpura, arthralgia, myalgia, kidney
insuficiência, anomalias neuropsiquiátricas, polineuropatia, pericardite, cardiomiopatia, pleurite
fibrose pulmonar, anemia, hepatomegalia e esplenomegalia. Um ataque de LES é frequentemente acompanhado por
febre.
No lúpus induzido por medicamentos, cerca de 50 a 75% dos pacientes tratados com procainamida e 25 a 30% daqueles
tratados com hidralazina desenvolvem ANA sem sintomas de LES durante a terapia a longo prazo. Um terço de
esses pacientes demonstram autoanticorpos contra histonas e, após uma duração variada de terapia, mostram
poliartralagia, pleurite e pericardite. Esses ANA persistem por anos após os medicamentos terem sido
descontinuado e os sintomas diminuíram.

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2. Síndrome de Sharp (doença mista do tecido conjuntivo = DMTC)

A síndrome de Sharp é uma MCTD multissintomática e multiforme que combina sintomas de artrite reumatóide.
artrite (AR), LES, esclerose sistêmica (ES) e polimiosite. Ainda não foi esclarecido se é um
doença independente.
3. síndrome de Sjögren (síndrome de Sjögren primária, SS)
SS é uma doença autoimune inflamatória crônica das glândulas exócrinas que pode ser encontrada em um
para quatro milhões de pessoas apenas nos EUA. Nove em cada dez pacientes são mulheres. A principal característica clínica de
primary SS is ocular and oral dryness as a result of the destruction of lachrymal and salivary glands
por infiltração linfocítica. As glândulas pancreáticas, as glândulas mucosas secretoras do intestino,
brônquios ou vagina e as glândulas sudoríparas também podem ser afetadas. Cerca de 5% dos pacientes com SS
desenvolvem linfoma maligno. No SS secundário, os sinais da doença do SS primário ocorrem como
accompanying symptoms of RA, SSc, SLE, polymyositis/dermatomyositis, PBC and AIH.
4. Esclerose sistêmica (esclerodermia sistêmica, SSc)
SSc é uma doença autoimune do tecido conectivo, que afeta a pele e os órgãos internos.
afeta cerca de 2 a 50 em 100.000 pessoas em todo o mundo (EUA: 25 em 100.000) e está em torno de três a quatro
vezes mais comum em mulheres do que em homens.
O encurtamento do freno lingual e a doença de Raynaud são sintomas iniciais da esclerose sistêmica.
a fase seguinte é o edema das mãos e pés. A pele torna-se rígida e em estágios posteriores
atrófico, ceroso e fino. Finalmente, a deformação das mãos ocorre. Os dedos ficam fixos em uma posição dobrada.
posição (mão em garra) e são altamente afiladas nas extremidades (dedos de Madonna). Além disso, o
rosto mascarado característico com expressão rígida se desenvolve. Finalmente, calosidade dos órgãos internos,
particularmente do trato digestivo, pulmões, coração e rins ocorre. No momento, o envolvimento dos pulmões é o
a causa mais frequente de morte pela SSc. A SSc manifesta é a colagenose com o maior risco vital para
o paciente. A taxa de sobrevivência de 10 anos é de 55%.

A SSc é dividida em formas limitadas e difusas, dependendo da distribuição cutânea. Na forma limitada
Na forma, o envolvimento da pele é limitado às extremidades distais. Na forma difusa (também sistêmica proximal
esclerose) os sintomas estão distribuídos difusamente pelo tronco, extremidades proximais e distais
e o rosto.
5. Miosite (poli-/dermatomiosite)
As miosites autoimunes (miosites inflamatórias idiopáticas) são autoimunes sistêmicas
doenças com inflamação da musculatura esquelética, dor simétrica e proximal acentuada e
fraqueza muscular. Ocorrem com uma incidência de 0,1-1 por 100.000 por ano, uma prevalência de
1-6 por 100.000 e proporção de homens para mulheres de 1 para 2. Eles podem ser divididos em polimiosite de adultos
(cerca de 30%), dermatomiosite em adultos (cerca de 30%), polimiosite paraneoplásica dos pulmões,
ovários, glândulas mamárias, trato gastrointestinal e em doenças mieloproliferativas (cerca de 8%)
miosite/dermatomiosite infantil com vasculite associada (cerca de 7%), assim como miosites em
associação com doenças autoimunes como AR, lúpus eritematoso, MCTD e formas raras como
a granulomatose, eosinofílica, miosite focal e por corpúsculos inclusos (cerca de 20%). Deve-se notar
que dermatomiosite/polimiosite é frequentemente de origem paraneoplásica, particularmente em pacientes idosos.
Os sintomas da dermatomiosite podem ocorrer antes que o tumor seja diagnosticamente detectável.
A polimiosite (PM) é uma doença inflamatória sistêmica dos músculos esqueléticos de etiologia desconhecida.
com infiltração linfocitária perivascular. Quando a pele está envolvida, a doença é conhecida como
dermatomiosite (DM). Os sintomas clínicos da PM são episódios recorrentes de febre, fraqueza muscular,
artralgia, possivelmente síndrome de Raynaud, dificuldade em engolir e envolvimento da parte interna
órgãos. No DM, os sintomas cutâneos aparecem como exantema de cor roxa nas pálpebras, ponte do nariz e
bochechas, edema periorbital, eritema local e dermatite eczema escamosa.

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6. Artrite reumatoide (AR)

A AR é uma das doenças autoimunes mais comuns e também a mais comum crônica
doença inflamatória das articulações. A doença afeta cerca de 1% da população mundial, sendo que 75% de
as pacientes são do sexo feminino. É caracterizada pela inflamação da membrana sinovial, que se espalha
simetricamente das articulações pequenas para as grandes, levando à destruição das articulações na fase tardia
acompanhado por um envolvimento sistêmico do tecido mole. Os sintomas iniciais incluem inchaço doloroso de
juntas dos dedos básicas com rigidez matinal nas articulações. O diagnóstico mais confiável e mais precoce possível é
indispensável para manter a doença sob controle com terapia adequada e evitar danos irreversíveis nas articulações
dano.
7. Colangite biliar primária (CBP)
A PBC é uma colangite destrutiva crônica não supurativa com destruição inflamatória progressiva de
os pequenos ductos biliares e a cirrose hepática em estágio terminal. Em 80 a 90% dos casos, os pacientes são
feminino, principalmente entre 20 e 60 anos de idade. Em casos raros, a doença também afeta crianças. Em
Na Alemanha, a prevalência é de cerca de 3 a 4 casos por 100.000 habitantes. Diferenças demográficas
(Caucasianos, africanos, etc.) são mínimos.
A PBC pode ser subdividida em vários estágios usando biópsia hepática. Em cerca de 6% dos casos, há uma
aumento do risco de carcinoma hepatocelular. No estágio final da PBC (cirrose descompensada) apenas
o transplante de fígado salvará a vida do paciente. Em cerca de 75% dos casos, os pacientes transplantados se recuperam
totalmente de PBC. Alguns pacientes, no entanto, sofrem uma recaída de PBC após o transplante, mas apenas com um
curso da doença muito lento.
Além das características histológicas típicas da PBC, parâmetros serodiagnósticos específicos são
importante para confirmar casos suspeitos de PBC: 1. Marcadores bioquímicos de colestase, como
níveis aumentados de fosfatase alcalina (AP) e gama-glutamil transferase (γGT) no soro,
2. Presença de autoanticorpos específicos para PBC, em particular autoanticorpos contra mitocôndrias (AMA)
que são direcionados contra o componente M2 (família de desidrogenases oxoácidas), e 3. Adicional
determinação de ANA, em particular contra grânulos nucleares (pontos nucleares, sp100 e PML) e
contra a membrana nuclear (gp210), que também são patognomonicamente relevantes. Autoanticorpos
against centromere proteins are found regularly in a proportion of patients with overlap syndrome with
SSc.
Visão geral
Autoanticorpos
Doença autoimune Prevalência
contra
nRNP/Sm MCTD 95%
Sm LES 5% - 40%
SS-A SS ou SLE 40% - 95% ou 20% - 60%
Lúpus eritematoso neonatal 95% - 100%
Ro-52 SS ou SLE 70% - 90% ou 40% - 60%
SSc ou miopatia inflamatória idiopática 20% ou 20% - 40%
SS-B SS ou SLE 40% - 95% ou 10% - 20%
Lúpus eritematoso neonatal 75%
Scl-70 SSc 25% - 75%
Diffuse or limited form of SSc 40% - 65% ou 5% - 15%
PM-Scl SSc incluindo síndrome de sobreposição 10% - 20% ou 5% - 20%
Síndrome de sobreposição PM/SSc 18%
SSc (anti-PM-Scl75 positivo) 24% - 50%
SSc (positivo para anti-PM-Scl100) 7%
Jo-1 Miotoxicidade (polimiosite/dermatomiosite) 25% - 35%
CENP A SSc - forma limitada ou SSc - forma difusa 80% - 95% ou 5% - 10%
CENP B SSc - forma limitada ou SSc - forma difusa 80% - 95% ou 8%
PBC 10% - 30%
PCNA LES 3%
dsDNA LES 40% - 90%
Nucleossomos LES 40% - 70%
Histonas LES induzido por medicamentos 95% - 100%
LES ou AR 50% ou 15% - 50%
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Autoanticorpos
Doença autoimune Prevalência
contra
P ribossômico LES 10%
proteína
AMA M2: PBC ou outras doenças crônicas do fígado até 96% ou 30%
SSc 7% - 25%
DFS70 Dermatite atópica 4% - 10%
Doenças reumáticas 5% - 10%
Mi-2α DM aproximadamente 20%

Mi-2β DM, associado à neoplasia aprox. 10%

(por exemplo, carcinoma de cólon ou mama)
Ku LES/miosite/esclerose sistêmica até 10%/40%/5%
RP11 SSc 5%
RP155 SSc 7%
Sp100 PBC 21%
PML PBC 13%
gp210 PBC 26%

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