01/10/2025

PMBqBM – UFAL
Bioquímica experimental

ENZIMAS- Sacarase, Amilase

e Urease
Doutoranda: Elane Conceição dos Santos
Profa. Dra. Leticia Anderson Bassi

Enzimas
Ø A maioria são proteínas;
Estrutura Estrutura Estrutura Estrutura
primária secundária terciária quaternária

Agregação de 2 ou mais
Aminoácidos α-Hélice Cadeias polipeptídicas cadeias polipeptídicas
2

1
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Enzimas
ØFunção: Catalisadores das reações químicas dos sistemas biológicos.
A atividade catalítica depende da sua conformação

Sítio
ativo

Desnaturação

Enzimas
Ø Algumas enzimas são funcionalmente completas, mas outras dependem
de moléculas adicionais para exercer sua função.

Íons inorgânicos: Vitaminas e minerais

Cofator 2+ 2+
Fe2+, Mg , Zn2+, Ni , Cu
2+

Moléculas orgânicas:
Coenzima A, FAD, NAD,
Coenzima
Biocina

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Classificação das enzimas

ØAs enzimas são classificadas de acordo com as reações que catalisam

Fonte: Lehninger

Classificação das enzimas

ØA nomenclatura das enzimas geralmente termina com o sufixo
–ase, indicando a ação sobre um substrato específico.

Sacarase à hidrólise da sacarose

Amilase à hidrólise o amido
Urease à hidrólise a uréia

Nem todas seguem essa regra (tripsina, pepsina)

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Característica importantes da reação enzimática

Ø Especificidade ao substrato
A enzima reconhece e atua apenas sobre um tipo específico de molécula.

ØAumentam a velocidade da reação

Atuam como catalisadores, reduzindo a energia de ativação.

ØNão afetam o equilíbrio da reação

Apenas aceleram a reação – não altera o resultado final.

ØNão são consumidas na reação

Podem ser utilizadas várias vezes.

Como as enzimas funcionam

Ø Reação enzimática
Complexo
Substrato enzima/produto Produto (s)

Enzima Complexo Enzima

enzima/substrato

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Como as enzimas funcionam

ØO complexo enzima-substrato é fundamental para ação enzimática

Sítio
ativo

Substrato
Enzima
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Como as enzimas funcionam

ØO complexo enzima-substrato é fundamental para ação enzimática

Sítio
ativo
Substrato

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Como as enzimas funcionam

A enzima muda ligeiramente de
Produtos
Substrato forma após a ligação com o
substrato
Sítio ativo

Substrato se liga no Complexo Complexo Produtos saem do

sítio ativo da enzima enzima/substrato enzima/produto sítio ativo da enzima

11

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Fatores que influenciam a atividade enzimática

Ø Temperatura
• Cada enzima tem uma temperatura ótima;

Atividade Desnatura a
enzimática enzima

Perde interações intramolecular e por isso - atividade

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Fatores que influenciam a atividade enzimática

Ø pH (acidez ou alcalinidade)
• Cada enzima tem um pH ótimo;

•Tripsina (no intestino): atua em pH básico (~8)

•Pepsina (no estômago): atua em pH ácido (~2)

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Fatores que influenciam a atividade enzimática

Ø Concentração do substrato

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Fatores que influenciam a atividade enzimática

Ø Presença de inibidores

Moléculas que diminuem ou impede a ação enzimática

Inibição Inibição
reversível irreversível

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Fatores que influenciam a atividade enzimática

Ø Presença de inibidores
Moléculas que diminuem ou impede a ação enzimática

Inibição • Competitiva
reversível • Não competitiva

Inibição Inibição
irreversível permanente

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Hidrolases

Sacarase
• Hidrólise de
carboidratos
Amilase

Urease • Hidrólise da uréia

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Enzimas Sacarase e Amilase

ØEnzimas digestivas

Atuam na hidrólise de carboidratos - sacarose e amido

Facilita a digestão e absorção

Saliva e intestino

Essenciais para gerar energia

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Sacarase
Ø Hidrolisa ligações α (1-2) da sacarose
Produtos da ação
Dissacarídeo enzimática

Ligação
glicosídica

1 2

aldose cetose

19

19

Sacarase
Ø Hidrolisa ligações α (1-2) da sacarose
Hidrólise da
Sacarose ligação glicosídica Glicose Frutose

Sacarase

20

20

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Amilase
Produtos da ação
Ø Hidrolisa ligações α(1-4) das cadeias do amido enzimática
Polissacarídeo Maltose

Dextrina
linear
Glicose

21

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Amilase
Ø Hidrolisa ligações α(1-4) das cadeias do amido Dextrina Linear

Hidrólise da
Amido ligação glicosídica
Glicose
Maltose

Amilase

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Objetivo da aula prática

Ø Fatores importantes para ação enzimática:

Especificidade enzimática

Termolabilidade enzimática

Inibição enzimática

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Procedimento experimental
Ø Reagente de Benedict

Detecção de
açúcares
redutores Solução Sol. verde a Sol. laranja a Sol. vermelho
Semiquantitativa azul amarelo avermelhado tijolo
Sem açúcares Pouco açúcares Grandes
Moderado
redutores redutores quantidades

Composiçãoà sulfato de cobre que fornece os íons cúpricos

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Procedimento experimental
Ø Reagente de Benedict

Glicose
Ácido glucônico

Cu2Oà óxido de cobre (precipitado)

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Prática
Ø Materiais necessários

Termômetro
Micropipetas
Banho-maria

Tubos de ensaio Recipiente com gelo ou água corrente Béqueres

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26

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Prática
Ø Reagentes necessários

• Solução de Sacarase
(levedo de padaria 1%)
• Solução de Sacarose (1%)
• Solução de Amilase (0,1%)
• Solução de Amido (5%)

Solução de Lugol
Reagente de Benedict

27

27

Procedimento experimental
Ø Especificidade enzimática
Tubo 1: Sacarase + sacarose
Tubo 2: Sacarase + amido
Tubo 3: Amilase + sacarose
Tubo 4: Amilase + amido 1 2 3 4 5 6

Tubo 5: sacarose
Tubo 6: amido

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28

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Procedimento experimental
Ø Especificidade enzimática

Reagente de
1 2 3 4 5
Benedict 6

Os tubos foram aquecidos a 100°C por 3 min

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29

Procedimento experimental
Ø Especificidade enzimática
Tubo 1: Sacarase + sacarose
Tubo 2: Sacarase + amido
Tubo 3: Amilase + sacarose
Tubo 4: Amilase + amido
1 2 3 4 5 6
Tubo 5: sacarose
Tubo 6: amido
+ + + +
1 2 3 4 5 6
+ + + + +

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30

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Procedimento experimental
Ø Termolabilidade enzimática

+ -

Iodo e iodeto de potássio

31

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Procedimento experimental
Ø Termolabilidade enzimática
Tubo 1: Sacarase + H2O destilada
Tubo 2: Sacarase + H2O destilada
Tubo 3: Amilase + H2O destilada
Tubo 4: Amilase + H2O destilada

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32

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Procedimento experimental
Ø Termolabilidade enzimática
Tubo 1: Sacarase + H2O destilada

Tubo 3: Amilase + H2O destilada

Aquecimento
100°C (5 min)
apenas tubos 1 e 3

Resfriamento
Água corrente ou gelo
33

33

Procedimento experimental
Ø Termolabilidade enzimática
Tubo 1: Sacarase (aquecido) + sacarose
Reagente de
Tubo 2: Sacarase + sacarose Benedict Lugol
Tubo 3: Amilase (aquecido) + amido
Tubo 4: Amilase + amido

Aquecimento 37°C (10 min)

Todos os tubos

100°C a 3 min

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34

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Procedimento experimental
Ø Termolabilidade enzimática
Tubo 1: Sacarase (aquecido) + sacarose
Tubo 2: Sacarase + sacarose
Tubo 3: Amilase (aquecido) + amido
Tubo 4: Amilase + amido 1 2 4 3

+ + +
+
1 2 4 3
+ +
35

35

Enzima Urease
Ø Catalisa a hidrólise da ureia em amônia e CO2

Encontrada à plantas (feijão), bactérias, fungos e no solo

Detectada pela mudança de pH (alcalino)

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36

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Urease
Ø Catalisa a hidrólise da ureia em amônia e CO2

Composto nitrogenado

Ureia

Urease
37

37

Procedimento experimental
ØFenolftaleina

Meio aquoso íons de

hidroxila (OH)
Amônia

Interage com H2O formando OH

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38

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Procedimento experimental
ØFenolftaleina

39

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Prática
ØMateriais necessários

Tubos de ensaio
Banho-maria
Pipeta Pasteur ou
conta-gotas

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40

20
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Prática
ØReagentes necessários

• Solução de Urease (obtida

da farinha de soja)

• Solução de Uréia (1%)

• Solução de Tiouréia (1%)
Inibidor competitivo

• Cloreto de Mercúrio (0,1%)

Inibidor irreversível
Fenolftaleína

41

41

Procedimento experimental
ØEspecificidade enzimática

Tubo 1: Uréia + Urease + fenolftaleína.

Tubo 2: Uréia + fenolftaleína.
Tubo 3: Tiouréia + Urease + fenolftaleína.
Agitados
levemente

37°C por 5 min

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42

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Procedimento experimental
ØEspecificidade enzimática
Tubo 1: Uréia + Urease + fenolftaleina.
Tubo 2: Uréia + fenolftaleina.
Tubo 3: Tiouréia + Urease + fenolftaleina.

+ - -
Tiouréia

37° C
43

43

Procedimento experimental
ØTermolabilidade enzimática
Tubo 4: Urease + H2O destilada

Aquecimento
100°C (5 min)

Resfriamento
Uréia Fenolftaleína
(água corrente)
Agitar levemente

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Procedimento experimental
ØInibição enzimática
Tubo 5: Uréia + Urease + Cloreto de
mercúrio + fenolftaleina

Tubo 6: Uréia + Urease + fenolftaleina

Agitados
levemente

37°C por 5 min

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45

Procedimento experimental
ØInibição enzimática
Tubo 5: Uréia + Urease + Cloreto de
mercúrio + fenolftaleina

Tubo 6: Uréia + Urease + fenolftaleina

- +
Cloreto de mercúrio
Banho-maria 37°C 5 min

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Enzimas: Sacarase, Amilase e Urease

Ø Enzimas aceleram reações químicas sem serem consumidas;
ØCada enzima atua em um substrato;
ØMudanças visuais (cor, pH) indicam a atividade enzimática

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Dúvidas?

Obrigada!

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