RNA: Transcrição e
Processamento
Marcelo H. S. Ramada
Conjunto de todo o
DNA de um organismo
Genoma
• Síntese de RNA a partir de DNA.
Transcrição
• A transcrição é um processo seletivo: genes são
transcritos quando seus produtos são
necessários.
rRNA
mRNA
tRNA
Tipos de RNA
Nucleotídeos de RNA
• Pentose: ribose.
• Uracila ao invés de
Timina.
• A-U; C-G
Molécula de RNA
• Fita simples!
• Pode formar duplas-fitas
consigo mesmo, em uma
estrutura secundária de
grampo, por exemplo
Transcrição
• A transcrição é baseada no pareamento
complementar de bases.
• A iniciação da síntese de RNA não
requer um primer, como na replicação.
• Nucleotídeos trifosfato são adicionados
ao grupo 3’-OH da molécula crescente
de RNA pela RNA polimerase.
• Sentido da transcrição: 5’-3’
• Primeiro nucleotídeo permanece como
trifosfato
Iniciação
Alongamento
Transcrição
Processamento
Somente em eucariotos
Terminação
Iniciação
em
procariotos Promotor
Fita
codificadora
Fita
molde
Sequência Sequência Sítio de início
consenso consenso da transcrição
Promotores - regiões do DNA mRNA
que são reconhecidos pela
maquinaria de transcrição.
Promotores antecedem o
início do sítio de transcrição.
Sequência consenso:
sequência conservada
Promotores de procariotos
RNA
polimerase –
E. coli
RNA Polimerase e Fator Sigma
Fatores Sigma de E. coli
Início da transcrição e alongamento
• Mecanismos de término em E.
coli:
• Intrínseco
• Término direto
• Formação de grampo no RNA que
causa instabilidade.
Término
• Dependentes de rho
• Sítio de ligação para proteína rho.
• Proteína rho “anda” até a RNA
polimerase
• Proteína rho desfaz híbrido DNA+RNA
Terminação
intrínseca
• Término direto
• Instabilidade no híbrido
• Liberação
Terminação rho (ρ) dependente
Terminação
rho (ρ)
dependente
Transcrição
em
Eucariotos
Os genomas eucarióticos maiores
têm muito mais genes a serem
reconhecidos e transcritos.
A transcrição em
2. Presença de núcleo separa
eucariotos é espacialmente a transcrição e
mais complicada tradução.
por três motivos: - Processamento do RNA
3. O DNA é organizado em cromatina
que pode bloquear o acesso da RNA
polimerase.
RNA polimerases de
eucariotos
Tipo Transcritos
RNA pol I Grandes rRNAs
RNA pol II Pre-mRNA, alguns snRNAs, snoRNAs
RNA pol III tRNAs, pequeno rRNA, snRNAs
O trabalho da transcrição é dividido entre 3 polimerases diferentes.
Iniciação
• Eucariotos requerem
Fatores Gerais de
Transcrição (FGT) para se
ligarem às regiões no
promotor antes da ligação
do cerne da RNA
polimerase II.
TFII – fator de transcrição da RNA polimerase II
Promotor do “early gene” de SV40
Início da
Promotor do gene da timidina cinase transcrição
Promotores
de genes de Promotor do gene da histona H2B
eucariotos
TATA Box só existe em eucariotos.
“TATA binding protein”
(TBP)
➢ A transcrição se inicia quando TBP se liga ao TATA-box
• Após o início da transcrição, a RNA
polimerase II dissocia-se da maioria
dos FGT para alongar o transcrito
primário.
• Alguns dos FGT permanecem no
promotor para atrair o próximo cerne
de RNA polimerase II.
Como RNA polimerase II é
capaz de se separar dos
GTF?
(RNA nascente)
• CTD = subunidade β da RNA polimerase
Domínio da
cauda de • A fosforilação do CTD enfraquece a ligação da
RNA polimerase a outras proteínas FGT.
carboxila – CTD
• CTD fosforilada permite a ligação de proteínas
que irão fazer o processamento do RNA.
Processam
ento do
RNAm
Adição de Cap 5’
• Ocorre após 20-30
nucleotídeos
transcritos.
• Proteínas
interagem com a
cauda CTD
• CAP é ligado a
cauda CTD pela
proteína CBC
Remoção
de Íntrons
(Splicing)
Gene de eucarioto
Eucarioto (não-colinear) x procariotos
(colinear)
Remoção de Informação não contínua
Íntrons
Eucariotos possuem vários íntrons, que
(Splicing) podem variar de 50 a 20.000
nucleotídeos.
Éxons normalmente tem menos de 1000
nucleotídeos, variando principalmente
entre 100-200 nucleotídeos.
Splicing e
formação do
spliceosome
Poliadenilação
Poliadenilação
CPSF - Fator específico
de clivagem e de
poliadenilação
AUUAAA
CTsF - Fator de
estimulação da
clivagem
PAP - PoliA
Polimerase
Visão geral de um mRNA maduro
Splicing alternativo
Splicing alternativo - fibronectina
Gene da
fibronectina
mRNA da
fibronectina de
fibroblasto
mRNA da
fibronectina de
hepatócito
Splicing alternativo – α-tropomiosina
Organização dos éxons no gene
Transcritos
Músculo
estriado
Músculo
estriado
Mioblasto
Músculo
liso
Fibroblasto/não
muscular
Hepatoma
Cérebro
Processamento
em eucariotos
• Um gene grande
• O rRNA 5S é transcrito e produzido
separadamente.
• Muitas proteínas não ribossomais
auxiliam no processo de processamento
(~170)
• Alto número de proteínas ribossomais
(>70)
O nucléolo é uma fábrica de ribossomos
• Retirada das extremidades 5’ e 3’
Processamento • Modificações de bases
tRNAs • Retirada do íntron (apenas eucariotos)
RNA transportador
Anticódon: trinca de nucleotídeos complementar ao códon do mRNA.
Síntese de
RNA e DNA
dependente
de RNA