Introdução à Biologia
Molecular e
Biotecnologia
Aspectos Gerais
Informação Genética
Dogma Central da Biologia Molecular
Prof. Marcelo H. S. Ramada
Célula eucariótica x procariótica
Células Animais
CÉLULA ANIMAL
Microtúbulo
Centrossomo
Envelope Nuclear
Nucléolo
Retículo
Endoplasmático
Ap. Golgi M. Plasmática Núcleo Mitocôndria
5 m
Células Vegetais
CÉLULA VEGETAL Mitocôndria Lisossomo
Vacúolo
Aparelho
de Golgi
Nucléolo Vacúolo
Núcleo
Cloroplasto
5 m Envelope Nuclear
Retículo Endoplasmáticos
Composição de uma célula bacteriana
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0actina%20(tamb%C3%A9m,redes%20bidimensionais
%20e%20g%C3%A9is%20tridimensionais.
METABOLISMO
Metabolismo (do grego metabolismos, μεταβολισμός,
que significa "mudança", troca[1]) é o conjunto
de transformações que as substâncias químicas sofrem
no interior dos organismos vivos.
A expressão metabolismo celular é usada em
referência ao conjunto de todas as reações químicas
que ocorrem nas células.
INDÚSTRIA DA INFORMAÇÃO
❑ A forma e o funcionamento de
qualquer célula são decorrentes direto
ou indiretamente da presença de um
arsenal de proteínas.
❑ As proteínas são macromoléculas
sintetizadas sob o comandos de
instruções específicas presentes nos
genes – parte “funcional” do DNA.
BIOLOGIA MOLECULAR
❑ Retrata o estudo da estrutura e função dos genes, bem como da
organização e funcionamento do genoma.
Utiliza bioinformática e biologia computacional
para estudar a estrutura e função dos genes
HISTÓRICO DA BIOLOGIA MOLECULAR
❑ James Watson (geneticista microbiano) e Francis Crick (físico
inglês) descobriram a estrutura do DNA em 1953.
.... MAS TUDO COMEÇOU HÁ MUITO
MAIS TEMPO!
HISTÓRICO INTEGRADO
1869 - Friedrich MIESCHER
1880 - Albrecht KOSSEL
1889 - Richard ALTMANN
1910 - Thomas MORGAN
1928 - Frederick GRIFFITH
1944 - AVERY, MACLEOD & McCARTY
1952 - HERSHEY & CHASE
... e outros mais!
NUCLEÍNA
FRIEDRICH MIESCHER
▪ 1868: Primeiros estudos bioquímicos do núcleo celular.
▪ Utilizava nas pesquisas núcleos de células derivadas de
curativos cirúrgicos (leucócitos de secreção purulenta).
▪ Descobriu a presença de um composto de natureza ácida (rico
em fósforo e em nitrogênio, desprovido de enxofre e resistente
à ação da pepsina - enzima proteolítica) → nucleína Friedrich Miescher
(1844-1895)
ÁCIDO NUCLÉICO
1880: ALBRECHT KOSSEL
- Demonstrou que a nucleína continha bases nitrogenadas
em sua estrutura.
Albrecht Kossel
(1853-1927)
1889: RICHARD ALTMANN
- Obteve nucleína com alto grau de pureza, comprovando
sua natureza ácida e dando-lhe o nome de ácido nucléico.
Richard Altmann
(1852-1900)
DESCOBERTA DA TRANSFORMAÇÃO
▪ 1928: FREDERICK GRIFFITH
DESCOBERTA DA TRANSFORMAÇÃO
PRINCÍPIO TRANSFORMANTE
▪ 1944: AVERY, MACLEOD E MACCARTY: determinaram que o DNA é o
material hereditário
PRINCÍPIO TRANSFORMANTE
▪ 1953: ALFRED HERSHEY E MARTHA CHASE
▪ Confirmação final de que era através do DNA que as
informações sobre hereditariedade eram passadas
Martha Chase Alfred Hershey
(1927–2003) (1908–1997)
DNA → 32P
Proteína → 35S
A ESTRUTURA DO DNA
▪ Mesmo antes da estrutura do DNA ser elucidada, estudos genéticos indicaram
que o material genético deve três propriedades principais:
1. Como essencialmente cada célula do corpo tem a mesma constituição
genética, as características estruturais do DNA devem permitir uma
replicação fiel a cada divisão celular;
2. Como o DNA deve codificar várias proteínas, o material genético deve ter um
conteúdo informacional;
3. Como as mutações fornecem a matéria-prima para a seleção evolutiva, o
material genético deve ser capaz de mudar em raras ocasiões, mas a
estrutura deve ser estável para garantir a informação codificada.
A ESTRUTURA DO DNA
❑ Para construção do modelo estrutural do DNA, Watson e Crick reuniram
resultados de experimentos anteriores (peças do quebra-cabeças) para formar o
quebra-cabeças tridimensional (modelo da dupla hélice).
Watson e Crick - 1993
“AS PEÇAS DO QUEBRA CABEÇA”
1ª PEÇA
PHOEBUS LEVENE
❑ Estudou estrutura dos ácidos nucléicos.
❑ Descobriu a ribose em 1909 e a desoxiribose em 1929.
Phoebus Aaron T Levene
❑ Sugeriu a estrutura dos nucleotídeos, como fosfato-açúcar-base. (1869–1940)
❑ Acreditava que cada molécula tinha quatro nucleotídeos.
“AS PEÇAS DO QUEBRA CABEÇA”
PHOEBUS LEVENE
✓ DNA era feito de quantidades iguais de A,
G, C e T
“A molécula não poderia carregar a
informação genética porque é muito
simples!”
Diagrama molecular de um tetranucleotídeo hipotético, proposto
incorretamente por Phoebus Levene por volta de 1910.
AS REGRAS DE CHARGAFF
2ª PEÇA: As regras de Chargaff da composição de bases (~1950)
1. A quantidade total de nucleotídeos pirimidínicos (T+C) é sempre igual à
quantidade total de nucleotídeos purínicos (A+G).
- No DNA humano, as porcentagens eram:
A=30.9% T=29.4% G=19.9% C=19.8%
2. A quantidade de T é sempre igual à quantidade de A, e a quantidade de
C é sempre igual a quantidade de G. Mas a quantidade de A+T não é
necessariamente igual à quantidade de G+C. Essa proporção varia Erwin Chargaff
entre organismos diferentes, mas é praticamente a mesma em tecidos 1905–2002
de um mesmo organismo.
A=T, C=G ; A+G = C + T
Razão de Chargaff: A+T/G+C Variável
A ESTRUTURA DAS ALFAS-HÉLICES
3ª PEÇA
LINUS CARL PAULING
❑ Publicação da estrutura do DNA como uma hélice
tripla, contendo as bases voltadas para fora.
LINUS CARL
PAULING
-Culpou as imagens, que eram melhores na (1901–1994)
Inglaterra!
A ESTRUTURA HELICOIDAL
ROSALIND FRANKLIN
❑ Análise de difração de raios X do DNA
❑ Modelo = estrutura helicoidal (em espiral)
❑ Sem que Franklin soubesse, sua melhor imagem obtida de
difração de raios X foi mostrada a Watson e Crick por Maurice
Wilkins, e essa foi a chave principal do quebra-cabeça!
Rosalind Franklin
1920 –1958
A ESTRUTURA DO DNA
WATSON E CRICK
❑ Prelúdio: 1952
“Desde o dia de nosso primeiro encontro, Crick e eu pensamos que seria
altamente provável que a informação genética do DNA fosse codificada pela
sequência de quatro bases”
❑ Sabiam da proporção G=C, A=T
A estrutura do DNA é assunto da próxima aula!
O DOGMA CENTRAL DA BIOLOGIA MOLECULAR
❑ 1956: Francis Crick formula o “dogma central da biologia
molecular”.
– O fluxo da informação genética é unidirecional: “O DNA faz o
RNA que faz a proteína”.
replicação
transcrição tradução
DNA RNA Proteína
Assuntos para as próximas aulas!
Quando as peças se uniram...
Histórico recente
• Década de 70: Manipulação do DNA
• Década de 80: Técnica de PCR
• Década de 90: Genômica e Proteômica
Manipulação de DNA
Enzimas de
restrição
DNA ligase
DNA híbrido
DNA humano DNA de barata
AATCG,,,,
TTAGCTTAA + AATTCCGTTTA
,,,, GGGAAAT
AATCGAATTCCGTTTA
TTAGCTTAAGGGAAAT
ATP
AMP +
PPi
Clonagem
Fragmento de DNA
a ser clonado
DNA vetor
Ligação catalisada
pela DNA ligase
DNA recombinante
Transformação
DNA recombinante
Cromossomo
bacteriano
Insulina humana sintetizada por
bactérias
Principais culturas transgênicas
soja algodão
milho
canola
Sequenciamento automático de DNA
Sequenciamento de última geração
Projeto Genoma Humano
- 1º cromossomo (1999)
-”rascunho” (2000)
3 100 000 000 nt
Dolly (1997) - clone mamífero
Células tronco
Kit de diagnóstico baseado no DNA
• Por $79, o DNA é testado para
saber como o organismo do
cliente responde a 10
substâncias (cafeína, estatinas
(colesterol), warfarin (raleia o
sangue) tamoxifen (câncer de
mama).
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ser testados para 23 potenciais
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condições genéticas.
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