INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA DO AM
CAMPUS MANAUS CENTRO - CMC
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA, AMBIENTE E ALIMENTOS - DQA
CENTRO DE INTEGRAÇÃO EMPRESA-ESCOLA -CIEE
Bioprospecção de Fungos Macroscópicos Produtores de
Enzimas Oxidativas Coletados no Município de Manicoré -AM
ÁREA E LINHA DE PESQUISA Química Aplicada
PRÉ-PROJETO APRESENTADO AO
CENTRO DE INTEGRAÇÃO
EMPRESA-ESCOLA – CIEE, COMO
REQUISITO BÁSICO PARA
INTEGRAÇÃO DO DISCENTE AO
ESTÁGIO OBRIGATÓRIO.
AUTOR DO PRÉ-PROJETO
Manaus- Am
2024
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO
2 JUSTIFICATIVA
3 OBJETIVOS
4 FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA
5 METODOLOGIA
6 CRONOGRAMA
7 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. INTRODUÇÃO –
A bioprospecção é um modo de explorar sistematicamente à natureza em busca de
materiais genéticos para fins comerciais, e tem se tornado um dos principais focos da
biotecnologia. O termo bioprospecção, pode ser entendido como a busca sistemática por
organismos, genes, enzimas, compostos, processos e partes provenientes de seres vivos,
que tenham potencial econômico e, eventualmente, levam ao desenvolvimento de um
produto (Saccaro Júnior, 2011). A crescente exigência mundial por uma indústria
sustentável tem impulsionado as pesquisas em biotecnologia e Bioprocessos. A
necessidade da produção industrial que provoque pouco ou nenhum dano ambiental e
ainda mantenha sua lucratividade são necessidades atuais e que prometem impulsionar o
mercado e a sociedade de modo geral e particularmente o mercado mundial de enzimas.
Diante a grande diversidade fúngica e o desconhecimento das potencialidades, dentre
elas a atividade enzimática desses microrganismos existentes no Município de
Manicoré-AM, nossa pesquisa propõe uma alternativa a ser utilizada no processo de
degradação de compostos recalcitrantes, futuramente, objetivando avaliar seu potencial
biotecnológico quanto a sua capacidade enzimática oxidativa.
2. JUSTIFICATIVA
O crescente interesse a nível mundial pelas enzimas fúngicas deve-se ao fato do
potencial de usá-las em várias aplicações industriais e tem crescido a demanda por
enzimas mais estáveis, altamente ativas e especificas. O Brasil importa enzimas
celulolíticas, empregadas na desconstrução de biomassa lignocelulósica, sendo a maior
parte dessas enzimas obtida a partir de microrganismos da biodiversidade brasileira
(União Nacional da Bioenergia, 2020). O mercado global de enzimas em 2017 foi
avaliado em US$ 7,1 bilhões e deverá chegar a US$ 10,5 bilhões em 2024, com uma
taxa de crescimento anual de 5,7% de 2018 a 2024, também em 2017 estimou-se que
cerca de 70% da quota de mercado de enzimas era produzida por microrganismos.
(Papadaki et al., 2020). Este cenário mostra que o mercado brasileiro é essencialmente
importador, indicando desvantagens tecnológicas e estratégia em termos de produção e
uso das enzimas no País. Neste contexto, temos possibilidades de pesquisar alternativas
de uso de novos microrganismos para produção de enzimas com grande potencial
industrial, como por exemplo na produção de enzimas fenol oxidases que possuem
aplicações na indústria alimentícia, têxtil, cosmetologia e na área de Biodegradação.
3. OBJETIVOS
3.3. Objetivo Geral
Avaliar preliminarmente o potencial biotecnológico de espécies fúngicas coletadas na
Comunidade do Barro alto, para produção de enzimas oxidativas de interesse Industrial,
utilizando o método de Benvendamm.
3.4. Objetivos Específicos
Coletar e identificar os principais fungos macroscópicos encontrados na
Comunidade do Barro alto, no Município de Manicoré – AM.
Determinar quais cepas possuem melhor atividade frente ao teste de
Benvendamm;
Mensurar a atividade em função do tempo de avaliação de 24;48; e 72h.
Realizar um teste confirmativo para a presença de Lacase Senthivelan et al.
(2019) com os exemplares credenciados na etapa anterior.
4. FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA
4.1 Os fungos
Os fungos são microrganismos de grande importância biotecnológica. Os cogumelos
são conhecidos por suas propriedades nutracêuticas ou medicinais, como efeitos
antivirais, antibacterianos, anti-parasitários, antitumorais, anti-hipertensivos, anti
inflamatórios e moduladores do sistema imune (Philippoussis, 2009). Devido a essa
característica, eles possuem diversidade metabólica e bioquímica, sendo de grande
importância biotecnológica. Portanto, são usados em muitos processos indústriais como
na produção de enzimas, vitaminas, polissacarídeos, pigmentos, lipídios e glicolipídios,
sendo potencialmente valiosos (Lopes, 2011).
4.2 Enzimas Fenol-oxidases
As Fenol-oxidases são enzimas não específicas com relação ao substrato, o que permite
que os microrganismos produtores sejam capazes de oxidar compostos cujas estruturas
sejam semelhantes aos derivados da lignina. As enzimas ligninolíticas podem, portanto,
transformar hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) rompendo o anel aromático
e formando compostos que podem sofrer posterior degradação, sendo mineralizados
(Claus 2004).
5. METODOLOGIA
A pesquisa será desenvolvida em parceria com a Universidade do Estado do
Amazonas (UEA) Núcleo de Ensino Superior de Manicoré – NESMAN e IFAM
Instituto Federal do Amazonas. As coletas dos basidiocarpos serão realizadas durante o
mês de maio de 2024, coletados em sacos de papel, identificadas e depositadas na
coleção de Fungos Macroscópicos do Mestrado em Biotecnologia MBT-UEA.
Será utilizado o meio sintético BDA, será acrescido 2,5 g de ácido tânico em condições
assépticas, posteriormente agitado a mistura para que o ácido tânico se dissolva e forme
uma mistura homogênea. Após o resfriamento do meio de cultura, o conteúdo do
erlenmeyer 125 mL será associado ao de erlenmeyer 500 mL e agitado para que o ácido
se distribua uniformemente. O meio, então vertido em placas de Petri 90x15mm, antes
de ser resfriado, pois não se pode fundi-lo novamente, sob pena de oxidar a ácido e
inutilizar o meio. Esses procedimentos serão executados em ambiente estéril (interior da
câmara de fluxo laminar adaptado) Bononi e Trufem, (1985) e Cornelis, (1987). Após
os procedimentos as amostras inoculadas, seguindo a metodologia proposta por Castro e
Silva (1996), serão colocadas em placas de Petri 90x15mm (meio BDA + ácido tânico).
Posteriormente lacradas com fita plástica e devidamente identificadas. O experimento
será realizado em triplicata sendo as placas de Petri 90x15mm, incubadas em BOD a
30º C ( 2ºC) por um período de 72 horas para avaliar o potencial das cepas quanto à
produção de halos indicadores de enzimas oxidativas. Durante o período de 72h, as
culturas serão monitoradas diariamente para a quantificação do crescimento dos
possíveis halos indicativos para enzimas oxidativas. Os exemplares que indicarem a
presença de enzimas oxidativas, serão credenciados para etapa posterior, que será a para
indicar a presença de lacase, enzima responsável pela biodegradação de compostos
recalcitrantes. Utilizaremos o método proposto por Senthivelan et al. (2019), para o
melhor entendimento de nossos resultados, os dados serão tabulados no software
Bioestat.
6. CRONOGRAMA
ANO 2024
MÊS
ATIVIDAD 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10
ES
Início do
x
Projeto
Desenvolvim
ento do x x x x x x x x x x
projeto e
leituras das
referencias
Início da
x x x
pesquisa
Análise dos
dados x x x x
coletados
Discussão
dos x x x
resultados
Resultados x x x
Finalização
da Produção
x x
Final e
Apresentação
7. REFERÊNCIAS
SACCARO, JR.; NILO, L. Desafios da bioprospecção no Brasil_ Texto para
discussão 1569. Instituto de Pesquisa Econômica Aplicada. Brasília, jan. de
2011. Disponível em:
[Link] Acesso
em fev de 2024.
PHILIPPOUSSIS, A. N. Production of mushrooms using agro-industrial
residues as substrates. Biotechnology for agro-industrial residues utilisation. p.
163-196, 2009.
PHILIPPOUSSIS, A. N. Production of mushrooms using agro-industrial
residues as substrates. Biotechnology for agro-industrial residues utilisation. p.
163-196, 2009.
PAPADAKI, E. et al. Feasibility of multi-hydrolytic enzymes production from
optimized grape pomace residues and wheat bran mixture using Aspergillus
niger in an integrated citric acid-enzymes production process. Bioresource
Technology, v. 309, p.123317, 2020.
SENTHIVELAN, T. et al. Screening and production of a potential extracellular
fungal laccase from Penicillium chrysogenum: Media optimization by response
surface methodology (RSM) and central composite rotatable design (CCRD).
Biotechnology Reports, v. 23, e00344, april 2019.
LOPES, F. C. Produção e análise de metabólitos secundários de fungos
filamentosos. 2011. 130 f. Dissertação (mestrado em ciências) – Programa de
Pós Graduação em Biologia Celuar e Molecular, Universidade Federal do Rio
Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre.
CLAUS, H. Laccases: Structure, reactions, distribution. Micron. 35: 93-96.
Cohen, R.; Persky, L.; Hadar, Y. (2002). Biotechnological applications and
potential of wood-degrading mushrooms of the genus Pleurotus. Appl.
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