ENQUALAB-2008 – Congresso da Qualidade em Metrologia
Rede Metrológica do Estado de São Paulo - REMESP
09 a 12 de junho de 2008, São Paulo, Brasil
DESEMPENHO DE ESPECTROFOTÔMETROS UV/VIS/IVP:
EMPREGO DOS MATERIAIS DE REFERÊNCIA
Juliana F. Santos Gomes1, Marcelo B. Guedes1, Iakyra B. Couceiro2, Hans Peter Grieneisen2
Instituto Nacional de Metrologia, Normalização e Qualidade Industrial - Inmetro
Diretoria de Metrologia Científica e Industrial - Dimci
2
Divisão de Metrologia Óptica – Diopt – 55 21 2679 9026 – diopt@[Link]
1
Laboratório de Colorimetria e Espectrofotometria – Lacoe – 55 21 2679 9026 – lacoe@[Link]
Resumo: O Espectrofotômetro é um instrumento de grande Na verificação periódica da desempenho de
importância e aplicação em diversos setores industriais, tais espectrofotômetros, assim como na calibração destes
como petroquímico, químico, ambiental, farmacêutico, instrumentos faz-se necessário a determinação de erros
análise clínica, controle de qualidade, etc. Portanto, é resultantes de parâmetros como velocidade de varredura,
fundamental mensurar fatores que influenciam na medição largura da fenda, luz espalhada, linearidade, ruído
com esses instrumentos e verificar periodicamente sua fotométrico, entre outros, originados muitas vezes por
desempenho e manter a rastreabilidade de suas medidas desgaste físico de alguns componentes ópticos do
utilizando materiais de referência padrão. Estes materiais de instrumento. Para tal objetivo, são usualmente empregados
referência padrão dividem-se em duas categorias principais: materiais de referência padrão para espectrofotometria, em
materiais usados na verificação e calibração da escala de cuja verificação podem ser usadas as normas ASTM E275,
comprimento de onda e materiais de referência empregados ASTM 387, ASTM E925, ASTM E958 e ASTM 1866.
na verificação e calibração da escala fotométrica de
espectrofotômetros. O envelhecimento desses materiais de
referência, assim como a degradação das superfícies 2 – AS ESCALAS DE INFLUÊNCIA NA MEDIDA
metálicas, principalmente filtros de densidade neutra, podem
resultar na alteração dos valores de transmitância A avaliação da desempenho dos espectrofotômetros deve ser
(absorbância) e de comprimento de onda, sendo assim realizada através da análise de parâmetros que influenciam
necessária sua verificação periódica. A verificação e as medições nas duas escalas de influência, a escala
calibração periódica também faz-se necessária devido ao fotométrica e a escala de comprimento de onda.
desgaste físico de alguns componentes ópticos do
instrumento e algumas normas orientam esta verificação, Na escala de comprimento de onda, são utilizados padrões
tais como ASTM E275, ASTM 387, ASTM E925, ASTM de referência específicos, com bandas de absorção em
E958 e ASTM E1866. Na escala fotométrica, em geral, a diferentes intervalos de comprimento de onda. Nesta escala
análise da escala de transmitância (absorbância) do são analisados os fatores de maior influência que afetam os
instrumento, é realizada levando-se em consideração as resultados das medições no espectrofotômetro: a largura de
variações com respeito aos valores padronizados dos banda espectral, a velocidade de varredura e a exatidão do
materiais de referência. Na escala de comprimento de onda, comprimento de onda.
são utilizados padrões de referência específicos, com bandas
de absorção em diferentes intervalos de comprimento de Na escala fotométrica, transmitância (ou absorbância), a
onda. análise é realizada levando-se em consideração as variações
com respeito aos valores padronizados dos materiais de
Palavras Chave: Espectrofotômetro UV/VIS/IVP, referência, filtros neutros e filtros de corte. Para isto, são
Materiais de Referência, Filtro óptico, Calibração analisados os seguintes fatores: linearidade de resposta,
ruído fotométrico, estabilidade fotométrica, correção da
linha de base, exatidão, repetitividade fotométrica e luz
1 – INTRODUÇÃO espalhada.
O Espectrofotômetro é um instrumento fundamental para a Escala de comprimento de onda
análise de diversos parâmetros em áreas como petroquímica,
química, ambiental, farmacêutica, análise clínica, controle A verificação da escala de comprimento de onda de um
de qualidade, etc tornando-se, portanto, fundamental espectrofotômetro é normalmente realizada utilizando
mensurar os fatores que influenciam nos resultados obtidos padrões físicos absolutos, lâmpadas de descarga, tais como,
a partir destes equipamentos, além de verificar de mercúrio e de deutério. A verificação também pode ser
periodicamente sua desempenho e manter a rastreabilidade realizada, empregando materiais de referência padrão
de suas medidas. apropriados que apresentam bandas de absorção estreitas,
em diferentes intervalos nas faixas espectrais do UV e do
VIS, que serão apresentadas posteriormente.
O número de bandas espectrais identificáveis e materiais de referência padrão com densidade neutra, isto é,
espectralmente resolvidas pode ficar severamente com percentuais de transmitância (ou absorbância) pouco
comprometido pelo aumento da largura da fenda. Isto ocorre variáveis em função do comprimento de onda, e filtros de
devido ao aumento da banda passante espectral que produz o cortes em diferentes comprimentos de onda. Entretanto, a
alargamento espectral de cada banda individual, dificultando calibração da escala fotométrica sofre influências
a localização dos picos. dependentes diretamente do instrumento, tais como luz
espalhada, ruído fotométrico, estabilidade, linearidade e
O aumento da velocidade de varredura também afeta as reprodutibilidade fotométrica.
medidas de comprimento de onda, resultando num desvio na
posição da banda espectral no comprimento de onda da A luz espalhada constitui a parte da radiação indesejada
banda de absorção na direção do deslocamento. Sendo transmitida em outros comprimentos de onda fora da banda
assim, as medições de comprimento de onda devem ser de passagem nominal do monocromador e medida pelo
realizadas em função desses dois parâmetros que mais sistema de detecção (ASTM 387). Entretanto, depende
afetam o resultado das medições como pode ser verificado, a também da distribuição espectral da fonte de radiação e da
seguir, nos exemplos apresentados nas figuras 1 e 2. sensibilidade do detector. A quantidade de luz espalhada
pode ser estimada usando substâncias com bandas de
0,20 absorção intensas e estreitas, tais como filtros de corte cut
0,15 off, certos líquidos e cristais.
0,10
Desvio (NIST - Larad)
0,05
0,00
O ruído fotométrico é causado pelas flutuações na
-0,05 velocidade que os fótons da radiação incidente atingem à
-0,10 0,1 nm
0,25 nm
superfície do detector, e a linearidade é a relação linear entre
-0,15
0,5 nm a potência radiante incidente no seu detector e alguma
-0,20 1 nm
-0,25 2 nm quantidade medida proveniente do sistema.
3 nm
-0,30
-0,35 A estabilidade a curto e longo prazo de um
espectrofotômetro está relacionada principalmente à
01
86
10
19
42
51
26
65
33
28
88
28
74
65
1,
9,
8,
7,
3,
5,
1,
5,
6,
1,
7,
5,
6,
0,
24
24
27
28
33
34
36
38
41
45
46
48
53
64
Com prim ento de Onda (nm )
qualidade na construção do equipamento, ou seja, dos
elementos ópticos e mecânicos. A estabilidade a curto e
Figura 1 - Desvios apresentados em diferentes larguras de banda longo prazo da fonte de radiação e do sistema de detecção
para velocidade de varredura de 30nm/min, empregando o filtro de também afeta o resultado de uma medição. A verificação da
solução de óxido de hólmio SRM 2034 NIST. estabilidade do equipamento, assim como seu
monitoramento, podem ser efetuados empregando filtros
0,10
120 nm /m in
ópticos apropriados. A estabilidade também pode ser
0,08 60 nm /m in verificada sem o uso de filtros ópticos, mantendo o
0,06 30 nm /m in compartimento de amostra vazio, sendo analisada a variação
15 nm /m in do valor fotométrico em função do tempo. Na Figura 3, é
Desvio (NIST-Larad)
0,04
0,02
apresentado um exemplo da análise de estabilidade
fotométrica.
0,00
-0,02
0,000154
-0,04 0,00014
-0,06 0,00012
-0,08 0,00010
2
83
30
28
66
31
47
44
18
10
87
13
5
0,00008
0,
6,
5,
7,
1,
6,
5,
1,
5,
3,
7,
8,
9,
1,
64
53
48
46
45
41
38
36
34
33
28
27
24
24
Com prim ento de Onda (nm ) A 0,00006
0,00004
Figura 2 – Desvios apresentados em diferentes velocidades de 0,00002
varredura para largura de fenda de 1nm, empregando o filtro de 0,00000
óxido de hólmio SRM 2034 NIST.
-0,000022
0,0 5 10 15 20 25 30,0
Para uma melhor caracterização desta escala devem também t (min)
ser realizadas análises das linhas de emissão tabeladas das Figura 3. Estabilidade fotométrica do espectrofotômetro.
lâmpadas espectrais, como também medidas experimentais
da largura de banda espectral à meia altura (ASTM 958).
3 – OS PADRÃOS DE REFERÊNCIA EM
Escala Fotométrica: ESPECTROFOTOMETRIA UV/VIS/IVP
A verificação da escala fotométrica, transmitância (ou Materiais de Referência Padrão para Espectrofotometria são
absorbância) do instrumento, pode ser efetuada usando empregados na verificação periódica da desempenho de
espectrofotômetros, assim como na calibração de 80,7
instrumentos e na determinação de erros instrumentais.
70
Os materiais de referência padrão dividem-se em duas 60 333 637
418
categorias principais: materiais usados na verificação e 50
calibração da escala de comprimento de onda de 536
40
espectrofotômetros e materiais de referência empregados na %T
verificação e calibração da escala fotométrica de 30 287
espectrofotômetros. 20 279
361 453
10 460
Comprimento de Onda 445
0,0
Na verificação da escala de comprimento de onda de um 230,0 300 500 400 600 700,0
nm
espectrofotômetro são empregados materiais de referência Figura 5. Espectro do filtro de vidro de óxido de hólmio na região
apropriados que apresentam bandas de absorção estreitas, do ultravioleta e visível.
em diferentes intervalos. A largura de banda espectral e a
velocidade de varredura são selecionadas a fim de melhorar 0,75 247 253
a resolução do espectro e buscar a melhor desempenho do 0,7 241
equipamento.
0,6
259
Dentre os diferentes materiais de referência padrão mais 0,5
236
usualmente empregados destacam-se: filtros de vidro de 0,4
260
didímio e de óxido de hólmio, usados como padrões de A 0,3
comprimento de onda desde 1945 e 1961, respectivamente.
O filtro de didímio apresenta um grande número de bandas 0,2
de absorção nas regiões espectrais do visível e do
infravermelho próximo, enquanto que o filtro de óxido de 0,1
hólmio apresenta linhas de absorção mais estreitas nas 0,00
regiões espectrais do ultravioleta e do visível. Na região 235,0 240 245 250 255 260 265,0
espectral do ultravioleta também pode ser empregado vapor nm
de benzeno como material de referência padrão. Na região
espectral do infravermelho próximo podem ser utilizados o
1, 2, 4-Triclorobenzeno, óxidos de terras raras em vidro Figura 6. Espectro de filtro de vapor de benzeno na região espectral
do ultravioleta.
(SRM2035) e filmes de poliestireno. Esta verificação
também pode ser realizada através do uso de lâmpadas de
descarga, tais como as lâmpadas de mercúrio e deutério.
Exemplos de espectros destes padrões de comprimento de
onda são apresentados nas Figuras 4, 5, 6 e 7. ____ Poliestireno
____ SRM 2035
77,1
Absorbância
70
629
60 624
50 685
40
%T
30
431
472 514
20 441
481 586
10 573
748 cm-1
530 741
0,0 Figura 7. Espectro de filme de poliestireno e óxidos de
400,0 450 500 550 600 650 700 760,0 terras raras SRM 2035 na região espectral do IVP.
nm
Figura 4. Espectro do filtro de vidro de didímio na região do Outros filtros ópticos não exemplificados, tais como filtros
visível. de interferência, são verificados de forma semelhante, sendo
que uma análise preliminar é efetuada caso a caso a fim de
determinar as condições ideais de calibração.
Escala Fotométrica 0,85
0,8
A verificação da escala fotométrica é tão importante quanto
à da escala de comprimento de onda. Neste caso, são 0,7
verificadas as escalas de transmitância e absorbância do
aparelho, usando filtros de vidro de densidade neutra, com 0,6
diferentes percentuais de transmitância (absorbância), A
referentes a comprimentos de onda específicos. 0,5
0,4
Vários materiais de referência têm sido empregados na
determinação da exatidão da escala fotométrica de
espectrofotômetros, dentre os quais se destacam: vidros 0,28
inorgânicos e soluções padrão. Filtros de vidro de densidade 230,0 240 260 280 300 320 340 355,0
nm
neutra, tais como Schott NG-4 e NG-5, e filtros com
película metálica em sílica fundida são usados como padrões Figura 10. Espectro de absorção de solução padrão de dicromato de
na verificação da escala fotométrica de espectrofotômetros potássio na região espectral do ultravioleta.
convencionais, nas regiões do ultravioleta e do visível.
Soluções padrão, por exemplo, de dicromato de potássio, 4 - CONCLUSÃO
são usualmente empregadas, sendo normalmente mantidas
em cubetas seladas de quartzo. Exemplos de espectros O conhecimento da exatidão dos resultados das medidas
destes materiais de referência padrão são apresentados nas efetuadas no espectrofotômetro é possibilitado através da
Figuras 8, 9 e 10. sua caracterização periódica (ASTM E925), considerando
100,0 todas as fontes de incertezas e parâmetros de influência no
processo de medição (ASTM E275). A periodicidade desta
80
caracterização deve ser respeitada considerando a existência
de vários fatores que modificam as características do
instrumento e dos materiais de referência ao longo do
60
tempo.
%T 40
30% A verificação da confiabilidade das medições também pode
20% ser garantida através de comparações na área de
20 espectrofotometria, tendo como objetivo fundamentar
10%
tecnicamente a equivalência entre as calibrações realizadas
0,0 em espectrofotômetros comerciais de diferentes laboratórios.
400,0 450 500 550 600 650,0
nm
O envelhecimento dos materiais de referência, sejam de
Figura 8. Transmitância espectral de conjunto de filtros de vidro de
vidro ou filme, assim como a degradação das superfícies
densidade neutra com transmitância nominal de 10, 20 e 30% na
região do visível. metálicas em filtros ópticos, principalmente filtros de
densidade neutra, podem resultar na alteração dos valores de
transmitância e/ou absorbância e de comprimento de onda,
100,0 sendo necessária a verificação periódica e calibração desses
90%
materiais. Filtros com superfície metálica são menos
80 estáveis que os filtros de vidro de densidade neutra e
requerem, portanto, verificações mais freqüentes. Apesar
60 dos materiais de referência tipo solução ou vapor serem
estáveis fotoquimicamente, suas estabilidades também
%T 40 devem ser avaliadas periodicamente.
30%
O Laboratório de Colorimetria e Espectrofotometria do
20 10%
Inmetro (Lacoe) oferece desde 1998 serviços de calibração
de materiais de referência em espectrofotometria,
0,0 possibilitando a rastreabilidade das medidas nacionalmente,
220,0 300 350 400 450 500 550 600 650,0 atendendo à crescente demanda de serviços metrológicos de
nm
aplicação científica e industrial.
Figura 9. Transmitância espectral de conjunto de filtros de vidro de
densidade neutra com transmitância nominal 10, 30 e 90% na
região do ultravioleta e visível. O reconhecimento da competência do Lacoe, através da
participação em diferentes comparações interlaboratoriais,
possibilitou a prestação de serviços de calibração de filtros
ópticos, fazendo parte do banco de dados do Bureau
International des Poids et Mesures (BIPM), a partir do MRA ASTM 387-04, Standard Test Method for Estimating Stray
– Acordo de Reconhecimento Mútuo. Radiant Power of Spectrophotometers by the Opaque Filter
Method
5 – REFERÊNCIAS
ASTM E958-93, Standard Practice for Measuring Practical
Spectral Bandwidth of Ultraviolet-Visible
ASTM E275-01, Standard Practice for Describing and
Spectrophotometers
Measuring Performance of Ultraviolet, Visible and Near
Infrared Spectrophotometers
ASTM 1866 -97, Standard Guide for Establishing
Spectrophotometer Performance Tests
ASTM E925-02, Standard Practice for Periodic Calibration
of Narrow Band-pass Spectrophotometers