Microscopia
Profa. Dra. Liliane Dantas
Biologia Celular e Molecular
Guia
1) O que são?
– Estruturas
2) Como usar?
3) Variações
4) Como
funcionam
(física)
O que são?
Lentes
• Convergentes x
divergentes
[Link]
Lentes
• Convergentes x
divergentes
– Lupa
– “Fundo de garrafa”
[Link]
[Link]
[Link]
Lentes
• Ampliação x resolução
– Ampliação (aumento)
– Resolução (definição)
• Separar detalhes
• Produzir imagens separadas de partículas muito
próximas
• Limite de resolução (LR) → menor distância entre
dois pontos para que eles apareçam separados
Estereomicroscópio Lupa
Lupa
• Ampliação pequena
• Manipulação das amostras
[Link]
Lupa
• Ampliação pequena
• Manipulação das amostras
• Iluminação superior (episcópica) ou
inferior (diascópica)
[Link]
Microscópio
ótico
Componentes
▪ Mecânicos
▪ Óticos
Microscópio
ótico
Microscópio ótico
• Pequenos objetos
(lâminas)
• Iluminação atravessa
o material a partir de
baixo (exceto
microscópio
invertido)
• Três lentes
– Ocular
Microscópio ótico
• Pequenos objetos
(lâminas)
• Iluminação atravessa
o material a partir de
baixo (exceto
microscópio
invertido)
• Três lentes
– Ocular
– Objetiva
Microscópio ótico
• Pequenos objetos
(lâminas)
• Iluminação atravessa
o material a partir de
baixo (exceto
microscópio
invertido)
• Três lentes
– Ocular
– Objetiva
– Condensador
Poder de resolução 0,2 µm Ampliação até 1.500 x
Microscópio
ótico
• Lentes oculares
e objetivas
– Aumento
– Ocular 10x +
objetiva 40x =
400x
– [Link]
[Link]/primer/virtual/m
agnifying/[Link]
Microscópio
ótico
• Lentes oculares e
objetivas
– Imagem é virtual e
invertida
Microscópio • Lentes oculares e objetivas
ótico
Microscópio • Lentes oculares e objetivas
ótico • Revólver
Microscópio • Lentes oculares e objetivas
ótico – Objetiva de imersão
• Lentes oculares e objetivas
Microscópio – Objetiva de imersão
ótico • SEMPRE limpar
• Se houver óleo na lâmina, partir da menor
objetiva direto para a de 100x
Platina (mesa) Presilhas
Charriot
Microscópio ótico
• Platina
Microscópio (mesa)
ótico – Presilhas
– Charriot
• Macrométrico e micrométrico
Microscópio – Platina
ótico – Localizar (macro) e focalizar (micro)
– [Link]
0zoom12/[Link]
Microscópio
ótico
• Condensador e
diafragma
– Passagem da
luz
Microscópio
ótico
Microscópio
ótico
• Com ou sem
coloração
Como usar?
Como usar um
microscópio?
• Lembretes gerais:
– Checar a voltagem
equipamento/rede
local
– NUNCA mova o
microscópio arrastando
– Checar se o material
está corretamente
preparado (lamínula,
excesso de líquidos,
etc)
Como usar um microscópio?
• [Link]
[Link]/watch?v=Ai
Tn26SchSE
• [Link]
[Link]/watch?v=b
8sKWrWuGuY
Como usar um
microscópio?
• Baixe a platina ao máximo
• Coloque a lâmina a ser
analisada na platina e
prenda-a com as pinças
• Certifique-se de que a
objetiva em uso é a de
menor aumento
• Mova a lâmina com o
auxílio do charriot
(centralizar)
Como usar um
microscópio?
• Ligue a luz do microscópio
em uma intensidade
confortável para você
• Com os olhos na objetiva,
use o macrométrico para
aproximar a lâmina da
objetiva, até que a
preparação apareça com
relativa nitidez para você
– Inicialmente os movimentos
podem ser mais amplos mas,
a medida que a lâmina se
aproxima da objetiva, suba
mais devagar
Como usar um microscópio?
Micrométrico [Link]
Nitidez (foco) ual/smz1500zoom12/[Link]
Como usar um
microscópio?
• Percorra a lâmina (charriot)
• Altere as ampliações
(objetiva)
– Sempre pelo revólver
– Ajuste novamente o foco
(micrométrico)
[Link]
/virtual/magnifying/[Link]
Como usar um
microscópio?
• Ao terminar
– Abaixe a mesa
– Certifique-se que
todo o material foi
retirado
– Limpe as objetivas
com lenço de papel
– Desligue o
microscópio e cubra-o
Variações
Microscópio ótico
• Fluorescente
• Luz de mercúrio
• Filtros que selecionam
comprimentos de onda
específicos
Microscópio
ótico
• Fluorescente
– [Link]
[Link]
/primer/virtual
/fluorescence/i
[Link]
Microscópio
ótico
• Confocal
–Diversos
focos
–Imagem “3D”
• Transmissão
Microscópio • Varredura
eletrônico • Elétrons
– Comprimento
de onda 0,005
nm
• Vácuo
• Transmissão
Microscópio
– Resolução ~3
eletrônico nm
– Ampliação de
400.000 x
• Varredura
Microscópio – Pseudotridimensionais
eletrônico – Delgada camada de
metal
– Elétrons “varrem”
o objeto
• [Link]
[Link]
CARACTERÍSTICAS Mic. Ótico Mic. Eletrônico
Tipo de radiação Luz Elétrons
Tipo de lentes Vidro Eletromagnéticas
Poder de ampliação 1500x 400000x
Limite de resolução ~0,2 um ~0,2 nm
Imagem Colorida Preto e branco
Estado do material Vivo ou morto, Morto, desidratado, em cortes
normalmente em uma finos sob superfície de cobre, no
lâmina de vidro vácuo
Como funcionam
• “Imagem ampliada virtual e
Como invertida”
funcionam • Lentes convergentes
Duas lentes convergentes com Lente convergente simples
eixo principal coincidente
• “Imagem ampliada virtual e
Como invertida”
funcionam • Lentes convergentes
Como funcionam
• Lupa Ampliada
– Convergente simples Virtual → formada
pelos prolongamentos
dos raios
Direita
Como funcionam
• Microscópio
– Duas lentes convergentes Ocular
Objetiva Ampliada
Real → formada pelos
raios
Invertida
Como funcionam
• Microscópio
– Duas lentes convergentes Ocular
Objetiva Ampliada
Virtual → formada
pelos prolongamentos
dos raios
Invertida
Como funcionam
Vídeo sobre construção de imagens com
lente convergente:
• Parte 1:
[Link]
• Parte 2:
[Link]
Vídeo sobre construção de imagens na
Links úteis lupa
• [Link]
Vídeo sobre construção de imagens no
microscópio ótico
• [Link]
Vídeo sobre focos
primários das lentes
[Link]
DqEvFY4q0RM
Links úteis Vídeo sobre
propriedades das lentes
delgadas
[Link]
9sAOSBOKGE0
Microscopia
virtual
[Link]
r/virtual/[Link]
Links úteis
[Link]
[Link]/tutorials/s
mzpaths