Prof Dr Mariana Donato
MICROSCOPIAS
POR QUE?
Desenvolvimento da Biologia Celular
• Aumento do Poder de Resolução da
Análise instrumental:
• recursos para a microscopia
de luz
• Microscopia Eletrônica
• Difração de Raios X
• Convergência da antiga Citologia com
outros ramos da pesquisa biológica:
• Genética - Citogenética
• Fisiologia - Fisiologia Celular
• Bioquímica - Citoquímica
• Imunologia -
Imunocitoquímica
• Ultra-estrutura
• Biologia Molecular
Ampliar cada vez mais…
Histórico
• Zacharias Jansen – 1595
– Duas lentes simples convergentes – objetiva e ocular
• Anton van Leeuwenhoek – século 17
• Robert Hooke – 1650
– Primeiras observações sobre “células” na cortiça
Tipos de Microscópios
Microscopia eletrônica
Microscopia de Luz Transmissão
Convencional Alta Voltagem
Contraste de Fase Varredura
Contraste Interferencial
Campo Escuro
Polarização
Fluorescência
Confocal a Laser
Outros tipos de microscópio
Tunelamento Quântico
Força Atômica
Microespectrofotometria
Diferenças de
Sem
índices de
coloração
refração
Cores de
Com coloração interferência
Com coloração Campo
fluorescente escuro
Componentes de
um microscópio
• Componentes ópticos:
• Fonte de luz
• Sistema de lentes
(condensador, objetiva,
ocular)
• Componentes Mecânicos:
• Base ou pé
• Canhão
• Revólver
• Platina
• Parafusos macro e
micrométricos
• Charriot
Componentes de
um microscópio
1. Base ou pé
2. Fonte de luz
3. Parafusos de foco
4. Braço ou haste
5. Condensador
6. Platina
7. Charriot
8. Objetivas
9. Revólver
10. Canhão
11. Ocular
Os modelos microscópicos variam na forma e no desenho
• Microscópio
óptico
Partes mecânicas
• Base
• Braço/coluna
• Corpo binocular
• Revolver
• Platina
– Parafusos:
• Do charriot
• Macrométrico
• Micrométrico
Partes mecânicas
• Base
• Braço/coluna
• Corpo binocular
• Revolver
• Platina
– Parafusos:
• Do charriot
• Macrométrico
• Micrométrico
Partes ópticas – formação da imagem
• Objetivas
– Cores X aumentos
• Oculares
Partes ópticas – sistema de iluminação
• Luz incidente
• Condensador
– Diafragma
– Filtros
• Poder de resolução: • Limite de resolução:
– Capacidade de uma – Menor distância entre
lente (ou do dois pontos que poderão
microscópio) formar ser individualizados na
imagens com detalhes imagem final
mínimos
– Depende do
comprimento de onda e
da abertura numérica
• AN: sen do angulo
captado pela lente
ML:
Ê 1.000x
Ê 0,2 µm
MET:
Ê 500.000x
Ê 0,0002 µm
MEV:
Ê 10 a 150.000x
Ê 0,02 µm
WD – working distance
• WD
– Distância de trabalho
Como manipular?
• [Link]
hSE
• Microscópio óptico
– Comum
– Luz polarizada
• Permite visualizar de acordo com a refringência
– Contraste de fase
• Transforma as diferenças de fases dos raios
luminosos em diferenças de intensidade – fase
positiva e fase negativa
Histórico
• 1925 – Louis de Broglie
– Elétrons com propriedades ondulatórias
– Comprimento de onda à 0,005 nm
• 100x menor! à aumento do poder de resolução
– 1930 – primeiros microscópios eletrônicos
• Década de 1970 à época áurea da microscopia
descritiva
– Técnicas de processamento e ultramicrotomia:
mais atrasadas
Epitélio da mucosa intestinal
Filamento
Atividade assíncrona
• Papercraft do microscópio
– Identificação das estruturas