UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA
CAMPUS DE CAPITÃO POÇO
CURSO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
CBCCP235 – BIOLOGIA MOLECULAR
DOGMA CENTRAL DA
BIOLOGIA MOLECULAR
Prof. Dr. Igor Vivian de Almeida
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CBCCP235 – BIOLOGIA MOLECULAR
ESTRUTURA DO DNA
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Desafios a serem superados na proposição de
uma estrutura para o DNA
FUNÇÃO FUNÇÃO FUNÇÃO
GENOTÍPICA FENOTÍPICA EVOLUTIVA
Armazenamento
Expressão
e transmissão da Mutação
gênica
informação
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ESTRUTURA DO DNA ANTES DE
WATSON E CRICK
Descoberta dos Regras de Difração de
nucleo;deos Chargaff raios-X
• Elementos • Composição de • Perfil estrutural
estruturais do bases do DNA
DNA
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ESTRUTURA DO NUCLEOTÍDEO
BASE
FOSFATO PENTOSE NITROGENADA
(5’) (1’)
A, T,
ou C, G,
U
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Bases Nitrogenadas
• Bases Púricas: • Bases Pirimídicas:
• Adenina (A) • Timina (T) – exclusiva DNA
• Guanina (G) • Citosina (C)
• Uracila (U) – exclusiva RNA
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Nomenclatura dos Nucleo/deos
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REGRAS DE CHARGAFF DA
COMPOSIÇÃO DE BASES
T+C = A+G T=A e C=G
• A quan(dade total de • A quan(dade de T é
pirimidinas é sempre sempre igual à de A e a
igual à de purinas de C é sempre igual à
Erwin
de G, mas a quan(dade Chargaff
de A+T não é (1905-2002)
necessariamente igual
à de G+C
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ANÁLISE DO DNA PELA DIFRAÇÃO DE RAIOS-X
• 1951: Rosalind Franklin e Maurice Wilkins
• “Fotografia 51”
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DNA de Watson e
Crick
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Modelo da Dupla Hélice
• 25/04/1953 – Revista
Nature: “Queremos
sugerir uma estrutura
para o sal de ácido
desoxirribonucleico
(D.N.A.). Essa estrutura
tem novas caracterísJcas,
que são de considerável
interesse biológico”.
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Modelo da Dupla Hélice
Duas cadeias ou filamentos de nucleo-deos dispostos lado a lado
O arcabouço é formado por fosfato e desoxirribose alternados,
unidos por ligações fosfodiéster
Os dois filamentos estão em orientação oposta ou polaridade
inversa (antiparalelas)
Os dois filamentos são man8dos juntos por ligações de hidrogênio
O pareamento dos nucleo-deos obedece a complementaridade
de bases 20
Modelo da Dupla Hélice
A interação dos pares de bases permite ao DNA adquirir
automa/camente uma conformação de dupla-hélice
Os pares de bases ficam empilhados uns sobre os outros no
centro da dupla-hélice, aumentando a estabilidade do DNA,
repelindo as moléculas de água
O empilhamento de bases em uma espiral criam o sulco maior e o
sulco menor
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Convenção-chave
A polaridade de uma
cadeia simples de DNA
Uma molécula linear
ou RNA é definida
de DNA ou RNA possui
pelos grupamentos
uma extremidade 5’ e
químicos – o fosfato 5’
uma extremidade 3’
ou a hidroxila 3’ – na
extremidade da cadeia
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Prêmio Nobel de 1962 – Fisiologia ou Medicina
• Franklin morre aos 37 anos de câncer de ovário, em 1958.
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Estruturas Secundárias do DNA
Caracterís5ca B-DNA A-DNA Z-DNA
Sentido da
Dextrógiro Dextrógiro Levógiro
hélice
Diâmetro ~ 20 Å ~ 26 Å ~ 18 Å
pb por volta da
10,4 11 12
hélice
Incremento na
3,4 Å 2,6 Å 3,7 Å
altura por pb
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H-DNA (triple-stranded DNA)
1963: Karst Hoogsteen
DNA reorganizado em 3 fitas (triplex)
Ocorre em longas sequências contendo apenas purinas ou
pirimidinas
Condição de regulação do genoma de mamíferos
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REPLICAÇÃO
DO DNA
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Características da DNA polimerase (DNA pol)
• 1959: Arthur Kornberg - DNA polimerase de E. coli
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Precisa de um
molde para
complementar
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Diferencia dNTPs e rNTPs
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Não sabe começar a replicação
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Primase: sintetiza os iniciadores ou primers
• Primers: 10-12
nucleotídeos de
RNA, que servem de
início para a DNA
pol.
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Polimerase 5´à 3´
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Exonuclease 3´à 5´
remove bases incorretas
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Alta fidelidade de replicação
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Velocidade de Replicação da DNA pol
Um cromossomo
Escherichia coli
humano
• Genoma: 4,7x106 pb • Tamanho médio: 1,5x108 pb
• Polimeriza 250-1000 • Polimeriza 50 pb/segundo
pb/segundo • Uma origem de replicação
• Possui uma origem de demoraria 30 dias, mas
replicação demora 1 hora
• Demora 40min • Cromossomos eucarióLcos
possuem múlLplas origens de
replicação
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Origens de Replicação
Sítios pelos quais a DNA
pol têm grande
afinidade
Levedura (n = 16):
400 origens
Humano (n = 23): 1
a cada 30-300 Kb
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A síntese de DNA na forquilha de replicação é semidescontínua
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Fragmentos de Okazaki
1967: Reiji Okazaki e Tsuneko
Okazaki, estudando a replicação
de bacteriófagos em E. coli
Procariotos: 1000-2000 pb
Eucariotos: 100-400 pb
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REPLISSOMO
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Problemas
1. Se uma fita de DNA tem sequência 5’AGCTACTTG3’, qual
sequência é esperada na fita complementar?
2. O DNA bifilamentar foi isolado da bactéria Mycobacterium
tuberculosis, e a análise química mostrou que 33% das bases no
DNA eram resíduos G. Dada essa informação, é possível
determinar que porcentagem das bases desse DNA
correspondiam a resíduos A?
3. DNA unifilamentar foi isolado do bacteriófago ΦX174, e a
análise química mostrou que 22% das bases no DNA eram C.
Com base nessa informação, é possível determinar que
porcentagem das bases nesse DNA corresponde a A?
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