Dogma 

Central da Genética e
A Base Molecular da  Biologia Molecular
Hereditariedade
Replicação Replicação

Transcrição Tradução

E
Estrutura e Replicação do 
R li ã d DNA RNA Proteína
.
DNA Transcriptase
Reversa

Os Maiores
Os Maiores Eventos da Genética
da Genética Os maiores
Os maiores eventos da Genética
da Genética
1800 ‐‐ 1900
1800 
1800 ‐‐ 1870
1800 
•1865 Gregor Mendel descobre as regras •1879‐1885 W. Flemming
W. Flemming
básicas da hereditariedade através do  descreveu os cromossomos
cultivo de ervilhas
– Dominãncia e recessividade
– Segregação aleatória •1875 O. Hertwig descreveu a 
– Distribuição independente
fusão do espermatozóide
p e do 
•1869 Johann Friedrich Miescher descobriu Mendel: O pai da genética óvulo para formar o zigoto
o DNA e o nomeou nucleina
•1911 Thomas Morgan 
•1881 Edward Zacharias mostrou que os
cromossomos são formados de nucleina descreveu a herança ligada aos 
cromossomos sexuais (ligada 
•1899 Richard Altmann renomeu o  ao X) em Drosophila
nucleina por ácidos nucleicos
Thomas Morgan
Johann Miescher

Momentos Históricos Material Genético

Ácido Nucléico ou Proteína?
Ácido Nucléico ou Proteína?
• Início do século 20
• a estrutura química de todos os 20  • Se o DNA era uma estrutura formado por 4 
aminoácidos já haviam sido nucleotídoes convalentemente ligados então eles 
identificadas. 
não poderia codificar nenhuma informação
• As proteínas, por outro lado, eram compostas de 20 
• 1900‐1930 Phoebus Levene aminoácidos diferentes com grande variação de 
Identificou dois tipos de ácido função
nucléicos (DNA e RNA) e que o DNA 
contém adenina, citosina, guanina,  • A maioria dos geneticistas focados na “trasmissão 
timina e grupos fosfatos genética” aceitaram passivamente que as proteínas  
como o provável material genético

1
 Propriedades Necessárias de um  Material Genético
Material Genético Ácido Nucléico ou Proteína?
Ácido Nucléico ou Proteína?

• Deve carregar a informação para controlar a síntese 
• A procura pelo material genético involveu 
de enzimas e proteínas dentro de uma célula ou  uma série de experiementos ao longo de 25 
organismo anos:
– Experimento
Experimento de Transformação de  F. Griffith 
de Transformação de F Griffith
• Deve se autorreplicar com alto grau de fidelidade e  (1928) 
com baixo nível de mutação – Experimento de Transformação de O. Avery, C.M. 
MacLeod e M. McCarty (1944)
• Deve estar localizado nos cromossomos – Experimento com o bacteriófago de A. Hersheye 
M. Chase (1953)

A Descoberta do Princípio Transformante O Princípio Transformante é o DNA
Frederic Griffith (1928) O. Avery, C.M. MacLeod e M. McCarty (1944)

Griffith utilizou duas cepas de Streptococcus pneumoniae

1 2 3 4

O Material Genético é Realmente o DNA Experimento de Hershey
Experimento de  Hershey‐‐Chase
A. Hershey e M. Chase (1953)

• Os experimentos feitos por Avery e colegas não 
foram muito aceitos na época
• Somente em 1953, com evidências adicionais obtidas 
por Alfred Hershey e Martha Chase
lf d h h h trabalhando com 
b lh d
o bacteriófago T2, é que a comunidade científica 
realmente aceitou que o DNA é o material genético.

1969: Alfred Hershey
“ Pelas suas descobertas sobre o mecanismo de replicação e a estrutura genética dos vírus”

2
 A Estrutura dos Ácidos Nucléicos Estruturas das Bases Nitrogenadas
• O ácido nucléico composto de nucleotídeos
• Nucleotídoes possuem uma base nitrogenada, uma 
pentose, e um grupo fosfato
Base Nitrogenada
Purina 
Pirimidina

Ribose
Desoxiribose

Desoxiribonucleotídeos Ribonucleotídeos

• Importante definição:
– Nucleosídeo: formado pela pentose + base nitrogenada
– Nucleotídeo: formado pela pentose + base nitrogenada + grupo 
fosfato

Abreviações dos Nucleotídeos Estrutura dos Ácidos Nucleicos
Estrutura dos Ácidos  Nucleicos

Nucleotídeos são ligados 
sucessivamente através de 
ligações fosfodiéster. 

A ligação fosfodiéster
ocorre entre a hidroxila OH 
do carbono 3 da pentose de 
um nucleotídeo com o 
grupo fosfato do carbono 5 
do próximo nucleotídeo. 

3
 Ligações Fosfodiéster
Ligações Fosfodiéster Formam as Cadeias de DNA e RNA
A Primeira
A Primeira Estrutura do DNA
5’ end

O esqueleto do DNA e RNA  1910 Phoebus Levene
é altamente polar. • Os componentes do 
DNA já eram 
Na sua estrutura alterna‐se 
uma unidade de pentose e  conhecidos 
um grupo fosfato.
um grupo fosfato. (
(nucleotídeos) 
)
5’ • A proposta era de uma 
As extremidades das  estrutura de 
cadeias são denominadas 5’ 
caracterizada por um grupo  tetranucleotídeos
fosfato e 3’ que possui o 
grupo OH do carbono 3 da  • O tetranucleotídeo era uma repetição de ATCG
3’ pentosse livre.  • Apesar da estrutura proposta, Levene não encontrou 
uma razão 1:1:1:1 dos nucleotídeos atribuida a erros 
3’ end de amostragem

A Descoberta da Dupla Hélice de DNA
• Erwin Chargaff (1940)
– Composição de bases do DNA varia de uma 
Estrutura e  espécie para a outra
– DNA isolado de diferentes tecidos da mesma 
Propriedades do DNA
Propriedades do DNA
Propriedades  do DNA espécie possuem a mesma composição de bases
espécie possuem a mesma composição de bases
– Composição de bases de DNA de uma dada 
espécie não se altera com a idade, estado 
nutricional e alteração ambiental
– Timina = adenina
citosina = guanina
(A + G) = (T + C)

A Descoberta da Dupla Hélice de DNA A Descoberta da Dupla Hélice de DNA
•Rosalin Franklin e Maurice Wilkins (anos 50) James Watson e Francis Crick (1953)
Padrão de difração do raio X do DNA mostrou que 
o DNA é formado por 2 fitas helicoidais com 
periodicidade de 0.34 nm e 3,4 nm Propuseram um 
modelo tridimensional 
do DNA sem 
executarem um único 
experimento em 
laboratório!!!!

4
A Descoberta da Dupla Hélice de DNA O Modelo de Watson e Crick
• Duas cadeias polinucleotídicas estão 
enroladas em torno de um eixo comum em 
sentidos opostos
• As bases estão do lado de dentro e a 
desoxiribose e o fosfato estão do lado de 
fora
James D. Francis H. Maurice H. F.
• Diâmetro da hélice é de 20A. Bases 
Rosalind Franklin adjacentes estão separadas por 0,34 nm 
Watson Crick Wilkins falecida com uma rotação de 36 graus
• As duas cadeias são mantidas juntas por 
Prêmio Nobel de Medicina e Fisiologia pontes de hidrogênio entre as bases
"for their discoveries concerning the molecular 
structure of nucleic acids and its significance for 
• As fitas são complementares e 
information transfer in living material". antiparalelas
1962 • A sequência exata das bases carrega a 
informação genética

Pareamento Entre as Bases

2 pontes de hidrogênio
Sulco maior

Sulco menor

3 pontes de hidrogênio

Desnaturação dos Ácidos Nucléicos Efeito Hipercrômico
• As duplas hélices de DNA e RNA 
podem ser desnaturadas através do 
calor e valores extremos de pH que  • A luz absorvida (absorbância) 
unifilamentar
rompem as pontes de hidrogênio  de uma solução de DNA no 
entre as bases nitrogenadas comprimento de onda de 260 
nm AUMENTA quando a 
Absorbânccia

•A
A renaturação de duas fitas 
renaturação de duas fitas d l héli é d f i
dupla hélice é desfeita em 
completamente separadas é um 
processo em duas etapas: filamentos isolados
– 1ª mais devagar que envolve o  • As bases nitrogenadas livres 
encontro das duas fitas 
complementares através de colisões  Dupla hélice absorvem mais luz (efeito 
randomicas 260 hipercrômico)
– 2ª mais rápida onde o pareamento 
das duas fitas ocorre como o  Comprimento de onda (nm)
fechamento de um ziper

5
 Curva de Desnaturação do DNA é 
Curva de Desnaturação do DNA é 
Diferente Para Cada Espécie A Estabilidade do DNA
Algumas propriedades das bases nitrogenadas livres refletem na 
estrutura tridimensional do ácidos nucléicos. 
– O anel nitrogenados das purinas e pirimidinas sofrem 
ressonância o que dá um caráter de dupla ligação para todo o 
anel Esta propiedade resulta nos anéis serem planares
anel. Esta propiedade resulta nos anéis serem planares. 
– Nas condições de pH neutra nas células, as purinas e 
pirimidinas são hidrofóbicas e relativamente insolúvel em 
água. 
– Portanto, as bases nitrogenadas por serem planares e 
hidrofóbicas em pH neutro tendem as se empilharem através 
Tm (melting point) – temperatura na qual metade do DNA se  de interações hidrofóbicas para minimizar o contato com a 
encontra desnaturado água.

A Estabilidade do DNA RNA tem capacidade de hidrólise em pH alto 
por causa do grupo 2’‐
por causa do grupo 2’‐OH
• A estabilidade e regularidade estrutural da molécula de DNA, 
deve‐se principalmente ao fato dos anéis de desoxirribose não 
possuirem grupos hidroxila no C 2’
• Os grupos hidroxila tanto do C2' como C3' são muito reativos 
– Podem participar de uma série de ligações pouco usuais 
permitindo uma variedade enorme de conformações para a  2’, 3’‐fosfodiéster 
molécula de ácido nucléico cíclica
– Isto não seria uma característica desejável para uma  básico OH 5’‐OH livre 
molécula que tem armazenado e transmitido a informação 
genética durante estes milhões de anos de evolução
– O exercício de tal função exige estabilidade e regularidade

RNA é instável em pH alto

Dogma Central da Genética e
Biologia Molecular

?
Replicação do DNA
DNA RNA Proteína
.
? ?

6
 A Replicação do DNA A Descoberta da Replicação do DNA
M. Meselson e F. Stahl (1958)
“Não nos passou  • Meselson e Stahl realizaram um experimento usando 
despercebido que o  a centrifugação em gradiente de cloreto de Césio 
pareamento específico que  para separar moléculas de DNA com diferentes 
postulamos sugere  densidades
imediatamente um possível 
mecanismo de cópia do 
material genético”

Watson e Crick, 1953

Experimento de Meselson‐
Experimento de Meselson‐Stahl ETAPAS DA REPLICAÇÃO

• INICIAÇÃO
• ALONGAMENTO
• TERMINAÇÃO

Iniciação A Origem de Replicação
• A replicação começa com a desnaturação do DNA em fita simples 
• A origem da replicação sempre se inicia em  expondo as bases nitrogenadas
• Os procariotos possuem uma única origem de replicação
uma sequência de DNA específica chamada 
• Obs:  E. coli possui 5 Mb e ela se replica em 40 min, ou seja, o 
origem de replicação (oriC) DNA da E. coli é copiado em uma velociade de 2 kb/sec
• A oriC é reconhecida pela proteína DnaA
A oriC é reconhecida pela proteína DnaA

5’

7
 Origem de Replicação em Eucariotos
Replicação do Genoma Eucariótico
• Cada cromossomo eucariótico é formada por um 
DNA dupla fita linear

• O tamanho médio é de ~108 pb de comprimento

• Se a taxa de replicação é de 2 kb/sec, a replicação de 
um cromossomo humano levaria ~35 dias
• Os eucariotos possuem múltiplas origem de replicação
• As forquilhas de replicação é bidirecional
• Para acelerar o processo, a replicação é iniciada em 
vários locais simultaneamente • No homem, as origens de replicação são espaçadas em 
intervalos de aproximadamente 50.000‐100.000 pb

Iniciação Deselicoidaizando o DNA

• Após o reconhecimento da oriC, o DNA é 
desenrolado pela proteína DnaB ou Helicase

Helicase

• Como o DNA é desenrolado sem causar uma maior 
helicoidização do DNA anterior à forquilha?
• Duas enzimas HELICASE e TOPOISOMERASE abrem a hélice e 
evitam a superelicoidização respectivamente

Iniciação O Início da Replicação
• DNA helicase se liga ao DNA na forquilha de replicação e desenrola 
• A DNA pol. catalisa a extensão do DNA  o DNA com o gasto de energia do ATP 
5'  3‘ mas não é capaz de iniciar a  • DNA Girase (um tipo de topoisomerase) relaxa o DNA 
adição do primeiro nucleotídeo superelicoidizado
• Quem adiciona os primeiros  • O DNA aberto de fita simples é estabilizado por proteínas que se 
nucleotídeos (primer ou iniciador) um  ligam a DNA fita simples (Single‐stranded DNA‐binding protein –
conjunto de proteínas chamado  SSB ))
primossomo DNA girase
• O componente central do primossomo 
é a enzima primase ou iniciase (uma 
RNA polimerase) que sintetiza o  primer
iniciador (primer) de 8‐12 pb

8
 Alongamento O Mecanismo de Síntese de DNA
• Em 1955  Arthur Kornberg descobriu os componentes 
necessários para a síntese de DNA na E. coli
1. Desoxiribunucleotídeos trifosfatados
(dNMP)n + dNTP  (dNMP)n+1 + PPi dNTPs: dATP, dTTP, dGTP, dCTP
DNA DNA 2 Molde de DNA
2. Molde de DNA
alongado 3. Iniciador (primer)
4. DNA polymerase
5. Mg 2+ (otimiza a atividade da DNA polimerase)

1959: Arthur Kornberg (Stanford University) & Severo Ochoa (NYU)

Existe mais de uma DNA polimerase Elongação do DNA
Pol. I Pol. II Pol. III
5’  3’ polimerase  Sim Sim Sim
Subunidades 1 7 >10
Taxa de polimerisação 16‐20
16 20 40 250‐1000
250 1000
(nucleotídeos/sec)

Processividade
(nucleotídeos adicionados antes da  3‐200 1.500 >500.000
polimerase se dissociar)

3’  5’ exonuclease Sim Sim Sim

5’  3’ exonuclease Sim Não Não
DNA polimerase III é a principal enzima da replicação do DNA na E. coli

Elongação do DNA Elongação do DNA

9
 Elongação do DNA As Principais Características da 
Reação de Síntese do DNA
• DNA polimerase I catalisa a formação da ligação 
fosfodiéster entre 3’‐OH de um desoxiribose (o último 
nucleotídeo) com a 5’‐P de um dNTP a ser adicionado

• A energia para esta reação é derivada da hidrólise do PPi 
g p ç
liberado do dNTP

• DNA polimerase I seleciona o dNTP complementar a fita 
molde em cada etapa de elongamento da síntese do DNA

• A taxa de incorporação é de  ≤ 800 dNTPs/segundo

• Direção da síntese é de 5’  3’

Replicação é Bidirecional
Replicação é Bidirecional

Desenrolamento do DNA

Primase síntese do iniciador

5’ 
5’ 

DNA polimerase III síntese da fita líder (ou contínua) do DNA

PPi  2 Pi

Replicação é 
Replicação é Bidirecional
Bidirecional

iniciador

Primase síntese do iniciador

5’  5’ 

DNA polimerase III síntese da fita atrasada (ou descontínua) do DNA

5’ 
5’ 
A síntese da nova cadeia de DNA ocorre no sentido 5’ 3’

10
 Ligação dos Fragmentos de Okazaki
Ligação dos Fragmentos de  Okazaki Remoção das Falhas da Fita Descontínua

• Ao completar a síntese de um fragmento de Okazaki, a DNA polimerase
não faz a ligação com o fragmento seguinte.
• Ainda é necessário:
– Remover o iniciador de RNA
– Ligar os dois fragmentos

DNA polimerase
DNA polimerase I I remove o iniciador
remove o iniciador

atividade exonuclease 5´3´

Ligação dos fragmentos –– DNA 
Ligação dos fragmentos  DNA ligase
ligase Uma visão geral

primase

DNA polimerase

11
 Uma visão geral Apesar da replicação ser bidirecional, as duas DNA 
polimerases da forquilha de replicação se movem 
na mesma direção!!!! 

O replissomo
O replissomo O replissomo
O replissomo

primase
Helicase

DNA polimerase III
• As duas DNA polimerases são conectadas com a 
helicase e  primase através de uma subunidade 
proteica τ

12
 O Mecanismo de Replicação Terminação da Replicação

• DNA Polimerase III adiciona nucleotídeos 5’  3’ em  • DNA circular:

ambas as fitas de DNA (contínua e descontínua)  • Encontro das forquilhas nas seqüências de 
assim que o primer é sintetizado  terminação.
• DNA Polimerase I remove o primer (atividade 5’  3’ 
exonucleásica) e o substitui (atividade 5’ 3’  • DNA linear:
polimerase) por DNA 
• Mecanismo de replicação no final dos 
• DNA Polimerase I  também preenche todas as 
cromossomos (telômeros).
lacunas na fita descontínua 
• Finalmente, a DNA ligase liga todos os fragmentos

Terminação  Terminação da Replicação

• No final da replicação do  • DNA circular:
DNA circular, eles ficam  • Encontro das forquilhas nas seqüências de 
ligados ou concatenados 
terminação.
• A separação deles ocorre 
através da ação de uma 
ç
topoisomerase específica
• DNA linear:
• Mecanismo de replicação no final dos 
cromossomos (telômeros).

A replição
A replição na extremidade do DNA 
do DNA eucariótico
eucariótico Os Telômeros
Os Telômeros

Os telômeros
são estruturas constituídas por 
sequências repetitivas 
de proteínas e DNA que formam as 
extremidades dos cromossomos.

• A DNA polimerase não consegue preencher o segmento de DNA depois que 
o primer é removido. 
• Se este segmento não for preenchido, os cromossomos encurtaram a cada  Os telômeros são sintetizados no final da replicação 
rodada de replicação  do DNA pela enzima telomerase, que é uma 
transcriptase reversa, pois sintetiza DNA tendo por 
molde uma molécula de RNA.

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Os telômeros
Os telômeros encurtam com a divisão 
celular
A Descoberta da Telomerase

• As células tronco embrionárias 
expressam a telomerase, o que lhes 
permite dividir repetidamente e 
formar o indivíduo. 

• Em adultos, a telomerase é 
altamente expressa em células que 
precisam dividir regularmente (por 
Elizabeth Blackburn Carol Greider  Jack Szostak
exemplo, no sistema imune), 
enquanto que a maioria das células 
somáticas expressá‐la apenas em  2009 Prêmio Nobel de Medicina e Fisiologia
níveis muito baixos de acordo com  "for the discovery of how chromosomes are protected by telomeres 
a divisão celular and the enzyme telomerase".

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