Biossíntese de DNA e RNA
(Replicação e Transcrição)
Técnicas de análise e manipulação
de ácidos nucleicos
O dogma central da Biologia Molecular
Replicação e Reparo
Reverse
Transcription
Transcrição e Processamento
Tradução, endereçamento
e modificação de Proteínas
Controle do fluxo da informação:
regulação da expressão gênica
Replicação do DNA
Características da replicação
Reação catalisada pelas DNA polimerases
Vários tipos de DNA polimerases
Direção da síntese das cadeias
Síntese contínua e descontínua
Fatores envolvidos na replicação
Inibidores da replicação
Replicação do DNA
Características da replicação:
Semi-conservativa Bi-direcional
Replicação do DNA: mecanismos
DNA polimerases:
adição de dNTPs à extremidade 3´OH
- requer uma cadeia pré-formada (primer)
- requer molde
- síntese ocorre na direção 5’ 3’
5’
fita molde
3’ 5’
Os vários tipos de DNA polimerases
DNA polimerases bacterianas:
DNA pol I
DNA pol II
DNA pol III
Etapas na replicação do DNA
1- Síntese dos primers
2- Polimerização da fita líder
3- Polimerização da fita atrasada
(fragmentos de Okasaki)
4- Retirada dos primers
5- Preenchimento das lacunas
6- Ligação dos fragmentos de Okasaki
Os componentes da maquinaria de replicação
1- Reconhecimento da ori e abertura
das fitas Helicase
2- Síntese dos primers Primase
3- Polimerização da fita líder
DNA Ligase
4- Polimerização da fita atrasada
(fragmentos de Okasaki) DNA pol I
5- Retirada dos primers DNA pol III
6- Preenchimento das lacunas
7- Ligação dos fragmentos de Okasaki
Videos 1201, 1202 DNA ligase
Drogas inibidoras da replicação
di-deoxi NTP
AZT
Reparo do DNA
- reparo direto da lesão
- reparo de erros de pareamento (MMR)
- reparo por excisão de bases (BER)
- reparo por excisão de nucleotídeos (NER)
- reparo por recombinação
Transcrição do RNA
• Diferenças na estrutura e organização dos
genes em procariotos e eucariotos
• Reação catalisada pela RNA polimerase
• Os vários tipos de RNA polimerases
• Estrutura dos promotores
• Fatores de transcrição eucarióticos
• Eventos pós-transcricionais em eucariotos:
- processamento
- adição de CAP
- adição de cauda poli-A
• Estrutura e papel da cromatina na transcrição
Sequência nucleotídica e de aminoácidos
ATGagtggccgctcccgcgtctctctctctctctctctcttttttttt
tttgtttgttcttgattgattgatttctcttttgtgtgtttccccgcg
gagccagcgcggcaaatagggaagaaggaagggacgggcgtttaacat
seq. de bases
no DNA e RNA
seq de cadeia
laterais de aa
estrutura
primaria
secundaria
e terciaria
na proteina
Expressão gênica
DNA RNA protein
Transcrição Tradução
Procariotos x Eucariotos
Expressão gênica em eucariotos e em procariotos
Eventos pós-transcricionais
em bactérias
Estrutura do genoma em
procariotos e eucariotos
Presença de íntrons no genoma eucariótico
em eucariotos
pre-mRNA
mRNA
Transcrição do RNA
5’ 3’
RNA Polimerases RNA polimerase bacteriana
(adição de NTPs a extremidade 3’ OH de uma cadeia ribonucleotica
requer molde
não requer iniciador
reconhecem uma sequência “promotora” no início do gene
Etapas da transcrição
1- Reconhecimento do promotor e abertura das fitas
2- Iniciação da cadeia
3- Elongação da cadeia
4- Terminação da cadeia
Etapas na transcrição do mRNA
Em procariotos Em eucariotos
Reconhecimento do promotor Reconhecimento do promotor
Iniciação Iniciação
Elongação Elongação
Terminação Terminação
Processamento do pré-mRNA
Transporte nucleocitoplasma
A maquinaria de transcrição em
eucariotos
3 RNA polimerases:
- RNA pol I: rRNA
- RNA polI: mRNA
- RNA pol III: tRNA
RNA pol II +
- Fatores de transcrição basais
- Ativadores e inibidores da transcrição
O pré-mRNA eucarioto sofre 3
etapas de processamento
acopladas a transcrição
adição de CAP
retirada dos introns
A transcrição e o processamento
do mRNA eucarioto são eventos
simultâneos
adição de poli A
Etapas do processamento pós-transcricional
e estrutura do mRNA eucariótico maduro
Adição do CAP no 5´
Adição da cauda poli A no 3´
Retirada dos introns (cis-aplicing)
estrutura do mRNA eucariótico
5´CAP
região codificadora (A)n
5´UTR 3´UTR
Retirada dos introns (cis-splicing)
pre-mRNA
Spliceossomo:
snRNA
mRNA proteínas
Splicing alternativo e geração de diversidade
no conjunto de proteínas
Adição da cauda poliA
Poliadenilação
Fatores de clivagem
(CPSF e CFI e CFII)
Poli A polimerase
(sinal para adição de poliA
presente no pre-mRNA: AAUAAA)
Proteina de Ligação ao poliA (PABP)
AAAAAAAAAA
Estrutura do mRNA eucariótico
5’ UTR
Região codificadora
3’ UTR
Estrutura da cromatina em eucariotos
Empacotamento dos nucleossomas
octâmero de histonas:
H2A H3
H2B H4
Histona H1 entre os nucleossomos
Papel estrutural e regulatório da cromatina
Papel estrutural: empacotamento do DNA no núcleo
papel regulatório: controle do acesso da maquinaria de transcrição:
histonas acetilases
histonas desacetilases
Acetilação de histonas
desempacotamento
da cromatina
ativação da expressão
gênica
Diminuição das cargas positivas das
histonas por acetilação de Lys
Menor interação DNA-histona
Ativação do gene
Fatores envolvidos no controle da transcrição
em eucariotos:
- Sequencias na região 5’ do gene
- Fatores de transcrição gerais, reguladores e co-reguladores
Regulatory transcription factors