Espectrometria de Massas

Profa. Dra. Patrícia Bulegon Brondani

(@patyqmc)
 Conceitos prévios necessários

✓ Mecanismos de reações orgânicas;

✓ Interações intermoleculares;

✓ Ionização;

✓ Rearranjos moleculares;

✓ Cromatografia Gasosa e Líquida.

2
 Espectrometria de Massas
é ?
que
O
Identificação, quantificação e caracterização molecular e
estrutural de amostras com base na sua composição elementar

Para
✓ Identificar compostos desconhecidos; que ser
ve?
✓ Quantificar materiais conhecidos;
✓ Elucidar as propriedades químicas e estruturais das moléculas;
✓ Determinar a massa molecular de alguns compostos;
✓ Análise de sequenciamento proteínas, peptídeos…;

✓ Indústria farmacêutica em diversas etapas;

✓ Aplicabilidade clínica: análise de hemoglobina, teste de drogas...

3
 Espectrometria de Massas

Compartimento Fonte Analisador Detector Sistema

de entrada de íon de massas de íons de dados
da amostra
Alto vácuo
Interface
atmosfera/vácuo

Espectro de Massas
4
 Espectrometria de Massas

+ -- Campo
Magnético

Aceleração
Ionização
(voltagem aplicada)
Detector

Na maioria dos experimentos de E.M.

z = +1, logo
m/z = m/1 = m
ou seja: m/z = massa do íon
5
Espectrometria de Massas: Injeção da Amostra

Equipa
mento
Massa de
s acop
com C l ado
Amostras: romat
ógrafo
Gasosas, o Gasoso
ra s s ã (CG) o
m o s t u
líquidas ou A s n a Líquid
ri z a d a o (LC)
va p o são mu
sólidas r a d e ito úte
c â m a is
i z a ç ã o
va p o r

6
 Espectrometria de Massas: Ionização
Ionização por Impacto de Elétrons (EI)
Prato de Pratos de
repulsão aceleração
+ Filamento - -
Para o campo
magnético
Após injeção e
vaporização Feixe de
elétrons
+. +. +. +. +. +. +. +. +.

+
Ânodo

Bomba Cátion Radical

Íon Molecular (M+.)
Mesma massa da molécula 7
 Espectrometria de Massas: Ionização
e-
e-
e-
Potencial de e- e-
ionização e-
e-
e-
(8-15 eV)
e-
Feixe e-
possui e-
50-75 e-
+.
eV +.
+. +.
Amostra +.
+. +.

Fragmentos que aparecem

no espectro

8
 Espectrometria de Massas: Ionização

Vantagens Desvantagens

Bom para análise de rotina de Muita fragmentação → íon molecular

pequenas moléculas orgânicas pode não ser detectável

Barato e robusto Amostra deve ser relativamente

volátil

Bastante fragmentação → estrutura Ruim para análise de moléculas com

alto peso molecular e biomoléculas

Espectros reprodutíveis – Grande

banco de dados de EI-MS disponível

9
 Espectrometria de Massas: combinações
LC-MS
Fase móvel
(solvente)

Coluna
Espectrômetro
de massas

Compartimento
Bomba de injeção

t a m b é m
CG
p o de s e r
a d o ( fa s e
c o m b i n
é g á s )
móvel Cromatograma 10
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

Pico
base
M+ = Íon
l ec u l a r = c á t i o n
mo
M+
radical
PM = 98 [Link]-1
(Mesmo PM da
amostra)

Pico base
pico mais alto
(100%);
íon com maior meia-
Eixo Y –
Abundância do íon vida; mais estável;
Eixo X – razão m/z

Pico do íon molecular (M+): pico com maior m/z (exceto picos dos isótopos).
Algumas vezes não aparece ou aparece em baixa abundância!!!! 11
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

1) Observação dos fragmentos

✓ M - 15: perda de CH3

✓ M - 18: perda de H2O

✓ M - 31: perda de OCH3 (ésteres ou éteres)

✓ Perda de M - 3 a M - 14: Contaminantes ou o pico é proveniente de

uma fragmentação e não do M+;

✓ Perda de M - 19 a M - 25: incomuns, exceto: M - 19 (F) e M - 20 (HF);

✓ Perda de 16 (O), 17 (OH) ou 18 (H2O): compostos oxigenados

12
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

Pico Base 58 - 43 = 15
43
Fragmentos Metila (CH3)

Íon Molecular
58

M+1

13
[Link]
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

2) Regra do Nitrogênio:

✓ íon molecular com m/z ímpar = número ímpar de nitrogênios

✓ íon molecular com m/z par = número par de nitrogênios

(incluindo zero)
p lo s
Exe m
Etilamina (CH3CH2NH2) M+ m/z = 45
Etilenodiamina (NH2CH2CH2NH2) M+ m/z = 60
Metano (CH4) M+ m/z = 16

14
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

3) Variação da energia do feixe de elétrons (EI): diminui fragmentação

do M+ = aumento da intensidade do pico M+ e diminuição dos picos dos
fragmentos ! gera um espectro com menos sinais

4) Utilização de ionização química (CI): fornece íon (M+H)+ intenso e

pouca fragmentação ! gera um espectro com menos sinais

Em reações químicas há uma previsão de produtos possíveis e isso

ajuda a saber se é o íon molecular ou outro fragmento.

15
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

Ordem decrescente de estabilidade do íon molecular:

Aromáticos > alquenos conjugados > compostos

cíclicos > alcanos normais de cadeias curtas

Frequentemente não aparecem:

Álcoois alifáticos, nitritos, nitratos, nitrocompostos,

nitrilas, compostos muito ramificados

16
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

Maior intensidade Compostos aromático

Alquenos conjugados
Sulfetos Orgânicos
Hidrocarbonetos não ramificados
Mercaptanas
Cetonas
Aminas
Ésteres
Éteres
Ácidos Carboxílicos
Hidrocarbonetos ramificados
Álcoois

17
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

Identificando o íon molecular e picos de isótopos

Apenas considera a massa do isótopo mais abundante de cada átomo
Ex.: C7H7NO: Massa unitária do íon molecular, m/z = 121.
(7.12) + (7.1) + (1.14) + (1.16) = 121

Elemento Isótopo Abundância Isótopo Abundância Isótopo Abundância

Relativa Relativa Relativa
Carbono 12C 100 13C 1,11
Hidrogênio 1H 100 1H 0,016
Nitrogênio 14N 100 15N 0,38
Oxigênio 16O 100 17O 0,04 18O 0,2
Flúor 19F 100
Silício 28Si 100 29Si 5,1 30Si 3,35
Fósforo 31P 100
Enxofre 32S 100 33S 0,78 34S 4,4
Cloro 35Cl 100 37Cl 32,5
Bromo 79Br 100 81Br 98
Iodo 127I 100
18
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

Presença de diferentes isótopos gera picos diferentes: M + 1,

M + 2,… com intensidade proporcional a sua abudância
isotópica natural.

12
Íon Molecular C= 100
58
13
C=1,13 %
% (M
+ 1)
M+
1:
Pouc
o int
enso

M+1
19
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

35C
l = 100%
37C
l = 32,5%
(M + 2)
M + 2 = 1/
3 M+

Abundância
relativa

3:1

m/z 20
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

1 0 0 %
79 Br =
( M + 2 )
81 Br = 9
8 %
+
+ 2 = M
M
Abundância
relativa

m/z
21
 O Espectro de Massas e o Íon Molecular

✓ Isótopos mais pesados com abundância muito baixa não aparecem no EM:

1H = 100% 16O = 100%

2H = 0,016% ! não aparece 18O = 0,2% ! não aparece

✓ Se C, H, O, N, F, P e I estiverem presentes, as intensidades aproximadas

para os picos M + 1 e M + 2 (em % relativa ao pico M+):

CnHmXxNyOz
% (M + 1) = (1,1 . n) + (0,36 . x)
% (M + 2) = [(1,1 . n)2/ 200] + (0,2 . y)

22
 Peso Molecular x Massa exata

u l ar
s o m olec Para o Íon CH3+
Pe
P M )
(
é d i a s Elemento Massa atômica (média)
Us a m s
t o d o
d a s d e H 1,00794 u
d e r a
pon p o s d o C 12,0107 u
i s ó t o
o s .
e n t o
e l e m
Peso molecular (PM)
1x12,0107 + 3x1,00794 = 15,03452 u

23
 Peso Molecular x Massa exata

Para o Íon CH3+

Isótopo Abund. Massa atômica

1H 99,98% 1.00783 u
2H 0,02% 2.01410 u
12C 98,9% 12.0000 u Massa
13C 1,1% 13,00336 u exata:
Soma d
Algumas massas possíveis desse íon as mas
cada á sas de
tomo e
12C e 1H massa = 15,02349 determ m um
inado í
13C atinge on que
e 1H massa = 16,02685 o detec
tor

Massa nominal:
Massa inteira do íon considerando somente os isótopos
mais abundantes. Ex. CH3+ m/z = 15
24
 Espectrometria de massas de alta resolução HRMS
Espectrômetro de Massa de Alta resolução: determina a massa exata do
íon molecular com 4 ou 5 casas decimais

✓ Permite determinação da fórmula molecular – somente uma combinação

de átomos possuirá o valor encontrado.

✓ Pode-se consultar tabelas a procura da fórmula mais próxima!

RSC Adv., 2016, 6, 88426

25
 Espectrometria de massas de alta resolução HRMS

Íon molecular 60 (Massa de Baixa resolução)

Fórmulas com mesma massa molecular:

C2H8N2, C2H4O2, CH4N2O, C3H8O

Alta resolução: 60,0580 [Link]-1 =

Somente uma fórmula.

Pavia, D. L; Lampman, G. M; Kriz, G. S;

Vyvyan, J. Introduction to spectroscopy, 5
ed., 2015, Cengage Learning

26
 Dados de Massas: como reportar?

Baixa resolução:

Método de Ionização Pico Base

Íon Molecular

MS (EI, 75 eV): m/z 102 (M+, 5%), 87 (16), 74 (64), 71 (50), 59 (22), 43 (100) …

Porcentagem relativo ao pico base

Alta resolução:

HRMS (ESI): Calc for C12H18O4Na ([M+Na]+) 249.1097; found 249.1094.

27
 O Espectro de Massas: íon Molecular

✓ Remoção de elétrons não ligantes

A carg
a foi
demon
strada
na for
ma
✓ Remoção de elétrons π localiz
ada

g a fo i
A ca r
a d a n a
o n s t r
d e m z a d a
l o c a l i
a d e s
form o s e s a b e
✓ Remoção de elétrons σ d o n ã
(qua n o
e sa i u
de o n d
t r o n )
elé

28
 O Espectro de Massas: Fragmentação

Íon molecular é fragmentado por clivagem (homolítica ou

heterolítica de UMA ligação) ou quebra de ligações simultâneas
(rearranjos)

✓ A estabilidade do íon formado é importante;

✓ Regra de Stevenson: Se dois fragmentos catiônicos podem ser

formados, o fragmento com menor energia de ionização será formado
mais frequentemente.

✓ A estabilidade do radical formado (maior radical);

✓ A formação de moléculas neutras: H2, CH4, NO, CO2, C3H4, CH3OH, H2O, HCl, CH2=C=O...
29
D. P. Stevenson. Disc. Faraday Soc. 10, 35 (1951)
 O Espectro de Massas: Fragmentação

Um pico de alta intensidade significa que

✓ Um dos fragmentos gerados é bastante estável;
✓ A ligação rompida é fraca .

Aumento de estabilidade do cátion

[Link] 30
 O Espectro de Massas: Fragmentação
Regra do elétron par

✓ Íon com número par de elétrons ou cátion (EE+)

✓ Íon com número ímpar de elétron ou cátion radical (OE+.)

✓ Radical (R.)

✓ Molécula neutra (N) OE+•→ E

E+ + R•
ou
OE+•→
OE+•+ N

EE+→ EE+ + N
31
O Espectro de Massas: Mecanismos de Fragmentação

1) Dissociação Direta ou 𝜎:

Fragmentações
na sequência

d e r a r
Consi de
r e g r a s
n s o n e
St e v e
r a d o
reg r
r o n p a
e l é t

32
 O Espectro de Massas: Mecanismos de Fragmentação

2) Dissociação/Clivagem 𝛼: Quebra homolítica da ligação 𝛼

ao elemento eletronegativo ou a uma ligação 𝜋.

Moléculas saturadas

Quebr
a hom
olítica

33
O Espectro de Massas: Fragmentação

2) Dissociação/ clivagem 𝛼

a d o ! Somente o cátion é
d e t e c t
Não é s t o p e l a detectado!
p re v i
s e r
Pode e m a s s a
n ç a d
difere c u l a r e o
n m o l e
e í o
entr r m a d o .
n fo
cátio

34
O Espectro de Massas: Mecanismos de Fragmentação

2) Dissociação 𝛼

Moléculas insaturadas

Alcenos

35
O Espectro de Massas: Mecanismos de Fragmentação

3) Clivagem indutiva (i): Quebra heterolítica

Queb
ra he
terol
ítica

36
 O Espectro de Massas: Fragmentação

3) Clivagem indutiva (i):

Somente o cátion é detectado!

Íons também podem continuar sofrendo fragmentação...

37
O Espectro de Massas: Mecanismos de Fragmentação

Competição: Dissociação 𝛼 x Clivagem indutiva

Dissociação alfa

Br, Cl < R•, ligação 𝜋, S,O < N

Clivagem indutiva

38
O Espectro de Massas: Mecanismos de Fragmentação

4) Segmentação de duas ligações (X = heteroátomo)

39
O Espectro de Massas: Mecanismos de Fragmentação

5) Clivagem por rearranjo

r r a n j o
Rea
de
a f fer t y
McL

40
 O Espectro de Massas: Alcanos

✓ Íon molecular relativamente intenso

✓ Espectro apresenta uma série de picos de fragmentos com M-15 (M-CH3)

e depois ΔM = 14 (CH2).

✓ Para cada pico observam-se M-1 e M-2 (perda de H e H2)

✓ Quanto mais ramificado, menor intensidade do pico do íon molecular

41
 O Espectro de Massas: Alcanos

Alcano não-ramificado e acíclico

- 14

- 14
- 14

Íon
molecular

42
O Espectro de Massas: Alcanos

M-15

43
O Espectro de Massas: Alcanos

M-15

44
O Espectro de Massas: Alcanos

M-15

45
 O Espectro de Massas: Alcanos

M-29

M-57

46
O Espectro de Massas: Alcanos

M-15

47
O Espectro de Massas: Alcanos

M-43

48
O Espectro de Massas: Alcanos

49
 O Espectro de Massas: Alcanos
2-metilpentano
PM = 86

50
 O Espectro de Massas: Alcanos
2-metilpentano
PM = 86

51
 O Espectro de Massas: Alcanos

✓ Tendem a perder uma unidade neutra (eteno)

e um radical metila;
Cicloalcanos

✓ Tendem a perder as cadeias laterais

52
O Espectro de Massas: Alcanos

53
 O Espectro de Massas: Alquenos

✓ Íon molecular relativamente intenso;

✓ Espectro apresenta uma série de picos de fragmentos com M-15 e

depois ΔM = 14 (CH2);

✓ Pico em m/z = 41 importante em alquenos terminais (carbocátion

alílico);

✓ Se a cadeia for longa, ocorre McLafferty;

54
O Espectro de Massas: Alquenos

m/z 42
M-28
m/z 55
M-15 Íon
- 14 molecular

m/z 41
M-29 m/z 70

55
O Espectro de Massas: Alquenos

56
O Espectro de Massas: Alquenos

57
 O Espectro de Massas: Cicloalquenos

Retro Diels-Alder

[Link] 58
 O Espectro de Massas: Alquinos

✓ Fragmentações similares aos alquenos;

✓ Alquinos terminais:
Fragmento M-1 muito intenso

✓ m/z = 39 (cátion propargílico)

59
O Espectro de Massas: Alquinos
6 7
/z 1
m - se
M ba
c o
Pi

3 9
/z 9
m -2
M
5 3
/z 5
m -1
M
8 (M )
z 6 r
/ ul a
m ec
ol
n M
Í o

60
 O Espectro de Massas: Aromáticos
✓ Sinal intenso do íon molecular (M+);
✓ Alquilbenzenos: forte sinal M-1 (íon Tropílio);
✓ Substituintes maiores que propila podem gerar rearranjo de McLafferty

m/z 78
Íon molecular

61
O Espectro de Massas: Aromáticos

1
z9
m/

z
m/
92
62
O Espectro de Massas: Aromáticos

1
z9
m/

z
m/
92
63
O Espectro de Massas: Aromáticos
m/z 91
Íon Tropílio
Pico base

m/z 92
McLafferty

m/z 134
Íon Molecular

64
 O Espectro de Massas: Álcoois

✓ Sinal do M+ é fraco ou inexistente (exceto para álcoois benzílicos);

✓ Fragmentações por clivagem alfa;

✓ Desidratação (M-18);

✓ Álcoois com 4 carbonos ou mais: Desidratação + perda de CH2=CH2;

✓ Álcoois cíclicos desidratam por pelo menos três tipos diferentes de
mecanismos;

✓ Álcoois Benzílicos: Formação de hidroxitropílio e posterior fragmentação

até C6H5+.

65
 O Espectro de Massas: Álcoois
Clivagem α

66
 O Espectro de Massas: Álcoois

Desidratação

67
 O Espectro de Massas: Álcoois
m/z 42
Perda de H2O e CH2=CH2

m/z 55
Perda de
H2O e CH3
m/z 70
M-18

m/z 31

Íon
molecular
m/z 88

68
 O Espectro de Massas: Álcoois
m/z 45

Perda de
radical propila

m/z 55
Perda de
H2O e CH3
m/z 73
M-15
m/z 88
M

69
O Espectro de Massas: Álcoois

m/z 57

m/z 82
M-18

m/z 99
M-1
m/z 100
M
70
O Espectro de Massas: Álcoois

m/z 79
m/z 108
M

m/z 107
M-1
m/z 77

71
 ;
O Espectro de Massas: Fenóis
e : M - 1
r t a l
+ Fo s i n
M m ) e
r u 2 8
e c e M – ) .
p a r O ( 2 9
✓ e a C Ξ M -
o d d e la (
P d a m i m/z 94
✓ P e r fo r
c a l M
✓ a di
r

m/z 66 m/z 66
M-29 M-28

m/z 93
M-1

72
 O Espectro de Massas: Tióis
o q u e o
t e n s o d
+ mais i n t e ;
✓ M o n d e n
o r r e s p
c o o l c t e ;
ál g n i f ic a n
2 s i o
M+ m e n t a ç ã
✓ d e f ra g
P a d r ã o o l ;
✓ a o á l co
m i l a r d e
si s u l fe t o
p e r d e r
P o d e - 3 4 ) .
✓ ê n i o ( M
hid r o g m/z 61 m/z 76
M-15 M

m/z 78
m/z 42
M+2
M-34

73
 O Espectro de Massas: éteres

✓ M+ geralmente mais intenso que o álcool correspondente;

✓ Clivagem α de um radical alquila;

✓ Clivagem indutiva com perda de radical alcóxi;

✓ Clivagem 𝛽: Rearranjo com perda de CHR=CHR`.

74
 O Espectro de Massas: éteres

m/z 59
M-29

m/z 31

m/z 29

m/z 73 m/z 88
m/z 43 M-15 M

75
 O Espectro de Massas: éteres
m/z 45

m/z 57

m/z 101
M-29
m/z 59

m/z 130
M
76
 O Espectro de Massas: éteres
i c o s :
r a r í l
É t e ;
+ fo r t e
M is .
✓ s i n a m/z 108
e n o s M
✓M

m/z 78

m/z 65

m/z 93
M-15

m/z
77

77
 O Espectro de Massas: Aminas

✓ M+ será um número ímpar para monoaminas e pode ser fraco ou ausente;

✓ M-1 é comum;
✓ Clivagem α de um radical alquila;
✓ Rearranjo de McLafferty e perda de NH3 (M-17) não é comum

Aminas cíclicas
✓ M+ forte;
✓ Fragmentação complexa que varia com o tamanho do ciclo
Aminas aromáticas
✓ M+ forte;
✓ Perda de HCN é comum em anilinas
78
O Espectro de Massas: Aminas

79
 O Espectro de Massas: Aminas

m/z 30
Pico base

m/z 44
M-1
m/z 45
M

80
O Espectro de Massas: Aminas

m/z 93
M

m/z 66

m/z 92
m/z 65 M-1

81
 O Espectro de Massas: Haletos Orgânicos

✓ M+ quase sempre é fraco (forte em aromáticos);

✓ Compostos com Cloro e Bromo: M+2;

Cl-M:M+2 3:1
Br-M:M+2 1:1
✓ Perda do halogênio;
✓ Perda de HX ;

✓ Clivagem α é observada algumas vezes.

82
O Espectro de Massas: Haletos Orgânicos

m/z 43
M-Cl

m/z 63 m/z 78
M
m/z 65
m/z 80
M+2

83
O Espectro de Massas: Haletos Orgânicos

m/z 77
Pico base

m/z 157 m/z 159

M M+2

84
O Espectro de Massas: Haletos Orgânicos

m/z 43
Pico base

m/z 165
M
m/z 167
M+2

85
 O Espectro de Massas: Carbonilados

Aldeídos
✓ M+ geralmente observado, pode ser fraco em alifáticos;
✓ Clivagem 𝛼 (íon acílio: ), Clivagem indutiva e McLafferty para mais de 4C;

✓ M-1 é comum (clivagem α);

✓ Aromáticos: M+ intenso e presença de M-1;

Cetonas
✓ M+ geralmente forte;
✓ Fragmentações similares aos aldeídos;
✓ O grupo orgânico maior é liberado como radical preferencialmente.

86
O Espectro de Massas: Carbonilados

87
 O Espectro de Massas: Carbonilados

m/z 44

m/z 29

m/z 43

m/z 85 m/z 86
M-1 M

88
O Espectro de Massas: Carbonilados

m/z 43
Pico base

m/z 58

m/z 85
M-15
m/z 100
M

89
O Espectro de Massas: Carbonilados

m/z 105
M-15

m/z 77

m/z 120
M

90
 O Espectro de Massas: Carbonilados

m/z 55

m/z 98
M

m/z 70

m/z 70

91
 O Espectro de Massas: Carbonilados
Ácidos ✓ M+ fraco em alifáticos e forte em aromáticos;
Carboxílicos ✓ A clivagem α: perda do radical OH (M-17);
✓ Desidratação em ácidos benzóicos orto alquil substituídos (M-18).

m/z 60
Pico Base

m/z 71
M-17

m/z 88
M
92
O Espectro de Massas: Carbonilados

m/z 132
M-18
Pico Base
m/z 150
M

m/z
133
M-17

93
 O Espectro de Massas: Carbonilados
Ésteres ✓ M+ fraco na maioria dos casos;
✓ Clivagem α com perda de RO. é a mais importante;
✓ Perda de radical alquila deixando ROC=O+.

m/z 43
m/z 74
M-28

m/z 71
Clivagem 𝛼
m/z 87
M-15
m/z 59
m/z 102
M
94
 O Espectro de Massas: Carbonilados

Amidas
✓ M+ geralmente observado;
✓ Seguem a regra do Nitrogênio (número ímpar de N, PM ímpar);

✓ Amidas primárias

95
O Espectro de Massas: Carbonilados

m/z 59
Pico Base

m/z 44

m/z 87
M

96