Índice

Sumário..............................................................................................................................i
Abstract............................................................................................................................iv
Metodologia.....................................................................................................................vi
Agradecimentos..............................................................................................................vii
Índice de figuras..............................................................................................................ix
Índice de tabelas.............................................................................................................xi
Abreviaturas...................................................................................................................xii
1. Introdução.................................................................................................................1
1.1. História dos Vírus...............................................................................................2
1.2. Os Vírus..............................................................................................................3
1.3. Nomenclatura Viral..........................................................................................11
2. Evolução..................................................................................................................13
2.1. A Coevolução do Vírus e o Hospedeiro...........................................................16
2.2. Importância das Vias de Transmissão..............................................................18
2.3. Os vírus e a Evolução das Espécies..................................................................20
3. Vírus como Vetores na Tecnologia do DNA Recombinante..............................28
3.1. Terapia Genética...............................................................................................30
4. Conclusão................................................................................................................38
5. Bibliografia.............................................................................................................40

i
Índice de figuras
Figura 1. John Franklin Enders, Thomas H. Weller e Frederick Chapman
Robbins, prémio Nobel da medicina em 1954.
Figura 2. Esquema comparativo dos tamanhos de diversos vírus. (Adaptado
de Lopes e Rosso, 2010).
Figura 3. Diferentes tipos de cápsides víricas: a) Cápside do bacteriófago T-
even virus (Myoviridae) com cabeça poligonal e cauda em forma de espiral,
b) Vírus Herpes simplex (Herpesviridae) com cápside poligonal e membrana
externa, c) Adenovírus humano 2 (Adenoviridae) com cápside poligonal sem
membrana. d) Síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA)
(Retroviridae). e) Vírus do mosaico do tabaco (Tobamovirus) com cápside
em espiral.
Figura 4. Estrutura geral de um vírus com invólucro e sem invólucro.
Figura 5. Esquema de penetração de vírus com invólucro: (a) endocitose e
lise da vesícula; (b) fusão entre o cápside viral e a membrana plasmática
para a libertação do material genético viral.

Figura 6. Esquema da transcrição do genoma viral dos sete grupos segundo

a classificação de Baltimore.

Figura 7. Esquema simplificado da transferência de informação genética

nos organismos celulares.
Figura 8. Vírus da família Herpesvíridae.
Figura 9. Representação esquemática do processo de multiplicação dos três
diferentes tipos de vírus de RNA de cadeia simples: vírus de cadeia + (A),
vírus de cadeia - (B) e o retrovírus (C).
Figura 10. Esquema representativo do processo de coevolução do vírus no
hospedeiro.
Figura 11. Sincício-fusão de várias células infetadas por um vírus.

Figura 12. Principais vírus usados como vetores na terapia genética.

Figura 13. Etapas envolvidas na terapia genética com um vetor viral.

Figura 14. Estratégias usadas na terapia genética in vivo e em ex vivo.

ii
Figura 15. Distribuição dos protocolos clínicos por tipo de vetor (A) e
segundo as patologias (B).

Índice de tabelas

Tabela 1. Regras de nomenclatura para a classificação dos vírus.

Tabela 2. Métodos Biológicos utilizados na introdução de genes em

células de mamíferos.

iii
Abreviaturas

AAV - Vírus adenoassociados

cDNA – DNA Complementar

DNA - Ácido

desoxirribonucleico

dsDNA - Vírus de DNA cadeia dupla

dsRNA - Vírus RNA cadeia dupla

ssDNA - Vírus de DNA cadeia simples

ssRNA - Vírus RNA cadeia simples

ICNV - Internacional Committee on Nomenclature of Viruses

ICTV - Internacional Committee on Taxonomy of Viruses

MoMuLV - Vírus da leucemia murina de Moloney

RNA - Ácido ribonucleico

mRNA – RNA

mensageiro

S3H - Helicases da superfamília

3 SV40 - Simian vírus 40

VIH - Vírus da imunodeficiência humana

iv
 1. Introdução
Os vírus são muitas vezes considerados como fragmentos de DNA ou RNA celular que
escaparam há muito tempo de cromossomas celulares e que evoluíram mais tarde
através da captura de genes adicionais dos genomas dos seus hospedeiros. No entanto,
essa visão agora tem sido desafiada pela descoberta de uma surpreendente homologia
entre os vírus e os hospedeiros distantemente relacionados, e através análises
filogenéticas que sugerem a transferência de genes de vírus para as células (Filée et
al.,2003).
Existem muitas razões para acreditar agora que os vírus são mais antigos do que as
células modernas e sempre foram mais abundantes e diversos do que os seus alvos
celulares (Forterre e Prangishvilia, 2009).
Os avanços na genómica dos vírus e as formas de vida celulares têm grandemente
estimulado o interesse nas origens e evolução. Os vírus são companheiros ubíquos das
formas de vida celulares, parece que cada organismo celular estudado tem o seu próprio
vírus ou, pelo menos, elementos genéticos egoístas semelhantes a vírus (Koonin et
al.,2006).
De acordo com estas novas hipóteses, vírus desempenharam um papel crítico nas
transições evolutivas principais, tais como a invenção de DNA e mecanismos de
replicação de DNA, a formação dos três domínios da vida, ou ainda, a origem do núcleo
eucariótico (Forterre, 2006).
“Os cientistas atualmente são capazes de isolar os vírus que infetaram animais
ancestrais e que contribuíram para o aparecimento dos animais placentários, inclusive o
próprio homem. O nosso DNA contém as suas pegadas. Identificamos as infeções que
acometeram desde hominídeos ancestrais até o homem moderno, desde a nossa
separação dos macacos até às doenças adquiridas em África, inclusive a tuberculose,
companheira eterna do homem”.

A História da Humanidade Contada pelos Vírus

Stefan Cunha Ujvari

1
 1.1. História dos Vírus

Os vírus foram descobertos em 1892 pelo biólogo Russo-Ucraniano Dmitri Iwanowski e

em 1898 Martinus Beijerinck, demonstrando, que o agente causador da doença do fumo,
chamada de doença do mosaico do tabaco, era um agente infinitamente microscópico capaz
de penetrar filtros de porcelana, algo que não era possível nas bactérias.

Em 1898 foi descoberto o primeiro vírus animal por Friedrich Loeffler e Paul Frosch
responsável pela febre aftosa. Trabalhando juntos com Kock, filtraram o líquido contendo o
agente causador da doença e observaram que esse líquido ainda permanecia infecioso
mesmo depois do processo de filtração. Substituindo a membrana filtrante por outra com
poros de menores dimensões, conseguiram filtrar o agente patológico e comprovar que este
era constituído por partículas e não por um líquido. Também provaram que algumas formas
dessas partículas possuíam a capacidade de se replicar. A partir desta data a virologia torna-
se uma disciplina científica. Contudo, só na década de 1940 e devido ao avanço das
técnicas microscópicas, nomeadamente, a microscopia eletrónica é que os vírus foram
observados.

No início do século XX, em 1915, Frederick Twort e em 1917, Félix d'Herelle, descobriam
que as bactérias poderiam ser infetadas por vírus. No ano de 1935, Wendell Stanley
cristalizou o vírus do mosaico do fumo e descobriu que eram compostos, na sua maioria por
proteínas. Em 1949, John Franklin Enders, Thomas H. Weller e Frederick Chapman
Robbins, (figura 1), desenvolveram, em conjunto, uma técnica para reproduzir o vírus da
poliomielite em culturas de células vivas de animais. Com este trabalho estes três cientistas
receberam, em 1954, o prémio Nobel da medicina.

Apesar dos primeiros estudos das viroses surgissem no início do século, foi a partir de
1931, com o aparecimento do microscópio eletrónico, que a composição química e
estrutura dos vírus foram conhecidas.

Em 1966, foi criado o Internacional Committee on Nomenclature of Viruses (ICNV) que

agrupou os vírus num único sistema, independente das outras formas biológicas até

2
então conhecidas. Em 1973, este comité altera o nome do comité para Internacional
Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV), como é atualmente conhecido. Nesse mesmo
ano os virologistas organizaram os vírus em níveis hierárquicos de ordem, família,
subfamília, género e espécie, além de níveis mais baixos de hierarquia (Santos, N. S. O. et
al. 2008).

Figura 1. John Franklin Enders, Thomas H. Weller e Frederick Chapman Robbins,

prémio Nobel da medicina em 1954. ([Link]

1.2. Os Vírus
Os Vírus, do latim virus, "veneno" ou "toxina", são pequenos agentes infeciosos (20- 400
ηm de diâmetro), (figura 2), que na sua maioria só são visíveis a microscópio eletrónico e
apresentam o genoma constituído por uma ou várias moléculas de ácido nucleico, o ácido
desoxirribonucleico (DNA) ou ácido ribonucleico (RNA), as quais podem ser formadas por
cadeias simples ou duplas.

O material genético ou genoma dos vírus pode ser organizado de diversas formas, uma
característica dos vírus diferente de qualquer outro organismo. Os restantes organismos
utilizam apenas o DNA para armazenar a informação genética, no entanto, os vírus podem
utilizar o DNA ou RNA, estando o material genético do vírus protegido por um involucro
proteico, a cápside.

De um modo generalizado os vírus são extremamente pequenos, sendo a maior parte menor
que as bactérias. No entanto, alguns vírus podem ser maiores que as bactérias como é o
acaso do Ebolavirus, figura 2 (Lopes e Rosso, 2010).

3
Figura 2. Esquema comparativo dos tamanhos de diversos vírus. (Adaptado de Lopes e
Rosso, 2010).

As cápsides podem apresentar diversas formas, algumas são estruturas geométricas

regulares, outras apresentam uma forma em espiral e as restantes são mais complexas,
sendo constituídas por uma cabeça e uma cauda, figura 3.

Figura 3. Diferentes tipos de cápsides víricas: a) Cápside do bacteriófago T-even virus

4
(Myoviridae) com cabeça poligonal e cauda em forma de espiral, b) Vírus Herpes
simplex (Herpesviridae) com cápside poligonal e membrana externa, c) Adenovírus
humano 2 (Adenoviridae) com cápside poligonal sem membrana. d) O vírus da
imunodeficiência humana (VIH) (Retroviridae). e) Vírus do mosaico do tabaco
(Tobamovirus) com cápside em espiral. (McKenna e Faulkner, 2001).

Alguns vírus também possuem um involucro externo á cápside, composto por uma
bicamada fosfolipídica e por proteínas imersas nessa bicamada designada de invólucro,
que lhes conferem uma proteção extra e facilita entrada do vírus nas células. Um
exemplo de vírus que possui invólucro é o vírus da imunodeficiência humana (VIH),
figura 4 (McKenna e Faulkner, 2001).

Figura 4. Estrutura geral de um vírus com invólucro e sem invólucro

([Link]

A infeção de uma célula por parte de um vírus com membrana pode ocorrer através da
fusão com a membrana celular introduzindo a cápside no interior das células, que
posteriormente libertará o material genético. Nos vírus sem membrana existe a hipótese
da infeção poder ser desencadeada através de proteínas especializadas para introduzir o
material genético nas células, figura 5. Após as moléculas de DNA ou RNA viral se
instalarem no citoplasma das células hospedeiras, apropriam-se da maquinaria
metabólica da célula para produzir réplicas do seu genoma bem como das proteínas
necessárias à formação dos novos viriões (McKenna e Faulkner, 2001).

(a) endocitose e lise da vesícula

(b) fusão de membranas

5
Figura 5. Esquema de penetração do vírus (a) endocitose e lise da vesícula; (b) fusão
entre o cápside viral e a membrana plasmática para a libertação do material genético
viral ([Link]

Os genomas de vírus são extremamente reduzidos, os vírus não apresentam organização

celular nem organelos ou ribossomas e não produzem a sua própria energia metabólica,
contrariamente aos organismos celulares, os vírus não são capazes de crescer em
tamanho e de se dividirem autonomamente.

Assim sendo, necessitam de invadir células tornando-as em hospedeiros para se

poderem replicar e reproduzir. Por estes motivos, são considerados parasitas
intracelulares obrigatórios que obtêm a partir do hospedeiro, os aminoácidos, os
nucleotídeos, os ribossomas e a energia metabólica.

A classificação baseada na síntese viral de RNA mensageiro (mRNA), genoma viral e

replicação do DNA (Classificação de Baltimore) agrupam os vírus em sete classes
distintas, figura 6 (Madigan, et al., 2004).

Figura 6. Esquema da transcrição do genoma viral dos sete grupos segundo a

classificação de Baltimore (Madigan, et al., 2004).

Classe I: Vírus de DNA cadeia dupla (dsDNA). Os vírus desta classe conseguem
construir diretamente o RNAm. Exemplo: Adenovirus, Herpesvirus, Poxvirus.

Classe II: Vírus de DNA de cadeia simples (ssDNA). Esta classe pode ser subdividida
em duas classes: vírus de DNA de cadeia simples positiva e vírus de DNA de cadeia
simples negativa, contudo, ambos utilizam um intermediário de dsDNA para sintetizar o
mRNA. Exemplo: Parvovirus.

Classe III: Vírus RNA cadeia dupla (dsRNA). Esta classe produz o mRNA
6
diretamente. Exemplo: Reovirus.

Classe IV: Vírus RNA cadeia simples positivo [(+)ssRNA]. Exemplo: Picornavirus,
Togavirus.

Classe V: Vírus RNA cadeia simples negativo [(-)ssRNA]. Nesta classe o RNA é o
mRNA. Nesta classe o RNA é complementar ao mRNA, servindo para a síntese das
várias moléculas de RNA (+) necessárias para tomar o controle da célula hospedeira.
Exemplo: Orthomyxovirus, Rhabdovirus.

Classe VI: Vírus RNA cadeia simples (ssRNA) com intermediário dsDNA. A
transcriptase reversa viral forma uma molécula de DNA que então sofre o processo de
transcrição por ação das enzimas do hospedeiro. Exemplo: Retrovirus.

Em termos de morfologia, os genomas virais podem estar organizados em círculos

como é o caso do vírus da hepatite B, também podem ser lineares como o VIH ou até
mesmo ser compostos de diversos pequenos fragmentos lineares como o vírus da gripe.
Estas características servem para classificar os vírus em diferentes grupos. O genoma
viral pode adquirir essas formas independentemente do tipo de ácido nucleico utilizado.
O genoma viral pode ainda estar organizado como uma cadeia simples ou uma cadeia
dupla, também independentemente do ácido nucleico ou do formato (Madigan, et al.,
2004).

Em termos gerais, a transferência de informação genética nos organismos celulares dos

domínios da Eukarya, da Bacteria e da Archaea, pode ser representado, em termos
gerais segundo a figura 7.

Figura 7. Esquema simplificado da transferência de informação genética nos

organismos celulares ([Link]

Nestes organismos toda a informação genética necessária para a vida encontra-se

primariamente nas moléculas de DNA, para posterior transcrição para as moléculas de
RNA. Contudo, nos vírus, essa generalização não se aplica em todos os casos, ou seja o

7
material genético primário dos vírus pode estar no DNA como no RNA, destacando-se
assim três tipos de vírus: o vírus do DNA, o vírus do RNA não retrovírus e o vírus do
RNA retrovírus.

Nos vírus de DNA, o material genético encontra-se no DNA e a transferência da

informação genética ocorre do DNA para o RNA e seguidamente para as proteínas. Um
exemplo desse grupo de vírus são os vírus da família Herpesvíridae, na qual os vírus
apresentam morfologia esférica, com invólucro e medem entre 150 a 200 nm de
diâmetro, (figura 8). Os vírus desta família podem provocar herpes mas também
provocam varicela, encefalites, danos em fetos e recém nascidos, mononucleose
infeciosa, entre outras. Outros exemplos de vírus de DNA são os vírus do género
Orthohepadnavírus, pertencentes à família Hepadnaviridae. Estes são vírus esféricos
com invólucro de aproximadamente 42 nm de diâmetro responsáveis por hepatites
agudas, fulminantes e crónicas que podem evoluir para cirrose ou carcinomas
hepatocelulares. Um exemplo de espécie de vírus pertencentes a este género é o vírus
hepatitis B, é transmitido através do contacto com o sangue ou outros fluidos corporais
provenientes de uma pessoa infetada, é uma infeção viral que ataca o fígado e podendo
resultar em patologias agudas e crónica, podendo ser prevenida através da vacinação,
método mais segura e eficaz atualmente disponível (Lopes e Rosso, 2010).

Figura 8. Vírus da família Herpesvíridae ([Link]

Nos vírus de RNA que não são retrovírus o material genético encontra-se no RNA e não
possuem a enzima transcriptase reversa podendo ser divididos em três tipos: os vírus de
cadeia positiva, vírus de cadeia negativa ver (figura 9), e vírus de cadeia dupla.

8
Figura 9. Representação esquemática do processo de multiplicação dos três diferentes
tipos de vírus de RNA de cadeia simples: vírus de cadeia + (A), vírus de cadeia - (B) e o
retrovírus (C) (Amabis e Martho 2009).

Os vírus de cadeia positiva são aqueles cujo RNA do genoma apresenta a mesma
sequência de bases azotadas que os mRNA por eles produzidos. Na célula hospedeira, a
molécula de RNA viral chamada cadeia positiva funciona como modelo para a síntese
de moléculas de RNA complementares ou cadeia negativa que, por sua vez, atuam
como modelo para a produção de cadeias complementares ou seja a cadeia positiva.
Algumas dessas cadeias positivas são utilizadas como mRNA e permitem a síntese das
proteínas virais e as outras cadeias positivas fazem parte do genoma dos novos vírus
formados na célula infetada. São exemplos destes vírus o vírus da rubéola e o vírus do
dengue.

O vírus de cadeia negativa são aqueles cujo RNA genómico apresenta uma sequência de
bases nitrogenadas complementares às dos do mRNA formados. Na célula hospedeira, a
molécula de RNA viral também chamada de cadeia negativa serve de modelo para a
síntese de moléculas de RNA complementares de cadeia positiva. Algumas dessas
moléculas de cadeia positiva atuam diretamente como mRNA na síntese de proteínas
virais e outras moléculas que funcionam como modelo na síntese de cadeia negativa, as
quais constituirão o genoma dos novos vírus formados na célula infetada. Exemplos
9
deste tipo de vírus são os hantavírus, que causam febre hemorrágica, e o vírus da gripe.
Estes vírus são arredondados, mas podem ser filamentosos, com invólucro e têm cerca
de 80 a 120 nm de diâmetro (Lopes e Rosso, 2010).

Os vírus de RNA que são retrovírus contêm uma cadeia simples de RNA associada à
enzima transcriptase reversa. A enzima transcriptase reversa é uma enzima que produz
DNA tendo como modelo o RNA viral. Esta enzima faz a transcrição reversa,
contrariamente ao que normalmente acontece nas células, onde o RNA é produzido a
partir de um DNA que lhe serve de modelo. À medida que sintetiza o DNA, a
transcriptase reversa degrada o RNA modelo. Em seguida, a enzima produz uma cadeia
de DNA complementar à que foi copiada da RNA viral, originando uma molécula de
DNA de cadeia dupla. Esse DNA será utilizado para transcrever moléculas de RNA que
atuam como mensageiras na síntese das proteínas virais. O DNA produzido pela
transcriptase reversa sintetiza também o RNA que constituirá o genoma dos novos vírus
formados na célula infetada.

Esta família de vírus inclui os seguintes géneros: Alpharetovirus, Betaretrovirus,

Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Epsilonretrovirus, Lentivirus (como por exemplo o
HIV) e Spumavirus. Nas últimas décadas, a família dos retrovírus têm sido um dos
principais alvos de estudo dos cientistas por serem a causa de doenças graves em
humanos, tais como, a síndrome da imunodeficiência adquirida. (Tenório et al., 2008).

1.3. Nomenclatura Viral

As regras de nomenclatura viral são ditadas pelo International Committee on Taxonomy
of Viruses (ICTV) e não segue a taxonómica binominal de Lineu. A classificação viral
inicia-se por ordem e os nomes de ordens, famílias, subfamílias, géneros e espécies são escritos
em itálico e com a primeira letra maiúscula. Os nomes ainda não reconhecidos aparecem entre
aspa, em tipo comum, tabela 1.

O ICTV reconhece sete ordens, nomeadamente, Caudovirales, Herpesvirales,

Ligamenvirales, Mononegavirales, Nidovirales, Picornavirales e a Tymovirales

De um modo geral, a ordem Caudovirales inclui os bacteriófagos, Herpesvirales é uma

ordem de vírus em que todos partilham a mesma morfologia geral, na ordem
Ligamenvirales incluem-se vírus lineares que infetam Archaea do Reino Crenarchaeota
a ordem Mononegavirales inclui os vírus que infetam plantas e animais, a ordem
Nidovirales inclui os vírus hospedeiros de vertebrados, na ordem Picornavirales os
vírus tem como hospedeiros vertebrados, insetos e plantas e a ordem Tymovirales

10
 consiste me vírus com genoma formado por RNA de cadeia simples positiva sem
intermediários de DNA e o seu material genético esta protegido por uma proteína
especial de revestimento.

Segundo o ICTV atualmente são reconhecidas 104 famílias, 23 subfamílias, 505

géneros e 3186 espécies (ICTV).
Tabela 1. Regras de nomenclatura para a classificação dos vírus.
Classificação Sufixo Exemplo
Ordem -virales Nidovirales
Família -viradae Retroviridae
Subfamília -inae Orthoretrovirinae
Género -virus Lentivirus
Espécie vírus Human Immunodeficiency virus 1
Acrónimo HIV-1
Nome comum Vírus da SIDA

Os critérios utilizados para a classificação dos vírus são respetivamente: o hospedeiro

parasitado, a morfologia do vírus e o tipo de ácido nucleico que estes têm. Também podem
ser usados outros critérios na classificação viral, tais como: as características físico-
químicas, as proteínas virais, as propriedades antigénicas, as propriedades biológicas, entre
outras. A morfologia da partícula viral inclui o estudo do tamanho, da forma, do tipo de
simetria, da presença o ou ausência de espículas e a presença ou ausência de invólucro. As
propriedades do genoma incluem o estudo do tipo de ácido nucleico, do tamanho do
genoma, do número de cadeias (simples ou dupla), linear ou circular, sentido/polaridade
(positivo, negativo, ou com ambos os sentidos), dos segmentos (número e tamanho), da
sequência de nucleotídeos e conteúdo de guanina e citosina. As propriedades físico-
químicas incluem o estudo da massa molecular, da densidade de flutuação, da estabilidade
em pH, da termoestabilidade e da suscetibilidade a agentes químicos e físicos. As
propriedades das proteínas inclui o estudo do número, do tamanho e das atividades
funcionais das proteínas estruturais e não estruturais, da sequência de nucleotídeos,
modificações (glicosilação, fosforilação, miristilação) e as atividades funcionais especiais,
como transcriptase, a transcriptase reversa, a neurominidase e a atividades de fusão. A
organização e replicação do genoma incluí o estudo da ordem do genoma, do número e
posição das estruturas de leitura abertas, das estratégias de replicação, dos locais celulares
de acumulação das proteínas e da organização e liberação do virião. Já as propriedades
biológicas incluem o estudo da variedade de hospedeiros naturais, do modo de transmissão,
da relação com vetores, patogenicidade, do tropismo tecidual e da patologia.
11
Cada um destes critérios contêm informações diferenciadas para os diversos vírus o que
facilita a identificação do vírus (Lopes e Rosso, 2010).

2. Evolução
A alimentação, as espécies predadoras e os agentes infeciosos desempenham funções
importantes na evolução das espécies, nomeadamente a humana. Os vírus ocupam uma
posição estratégica na evolução dos seus hospedeiros devido á sua capacidade de atuar
como parasitas genéticos moleculares. A luta contra as doenças infeciosas tem sido
considerada um importante processo evolutivo. Se um parasita provoca a mortalidade
do hospedeiro ou diminui a sua fertilidade pode ser considerado um agente seletivo. A
maioria das espécies apresenta diversidade genética na produção de anticorpos que
atuam na resistência às doenças. Considerando-se que em geral os agentes patogénicos
se desenvolvem mais rapidamente que as defesas do hospedeiro, é interessante que o
hospedeiro possua diversidade genética e elevada taxa de mutação nos genes
relacionados à resistência a doenças (Van Blerkon, 2003).

Os vírus podem afetar a evolução dos seus hospedeiros, interagindo diretamente com o
DNA do hospedeiro. Devido a sua simplicidade estrutural e sua dependência da
maquinaria de replicação e transcrição da célula hospedeira, os vírus atuam como
parasitas genéticos moleculares, podendo alterar o genoma do hospedeiro. O genoma de
quase todos os vírus de DNA é constituído por DNA semelhante ao genoma das células
do hospedeiro. Esta similaridade a nível da estrutura e da replicação favorece a
integração do vírus com o genoma do hospedeiro, podendo esta integração ser feita a
nível dos gametas e assim o novo código genético ser passado à próxima geração como
se fosse uma característica mendeliana.

Comparados com os vírus de RNA, os vírus de DNA tendem a infetar tipos específicos
de células de uma única espécie hospedeira. Muitos vírus de DNA provocam infeções
crónicas e latentes no hospedeiros por longos período de inatividade do vírus mantendo-
se no hospedeiro em pequenas populações por períodos prolongados. Os vírus de DNA
tendem, portanto, a ser mais estáveis que os vírus de RNA. Provavelmente os primeiros
hominídeos transportaram vários tipos de vírus de DNA, que se diversificaram e
migraram com a população humana. As filogenias desses grupos de vírus coincidem
com as relações evolutivas dos seus hospedeiros primatas, ind icando um padrão de
coevolução (Van Blerkon, 2003; Villarreal, 2007).

12
O genoma de aproximadamente 70% dos vírus que infetam animais apresenta-se na
forma de RNA. O processo de replicação desses vírus apresenta em relação aos virus
de DNA erros maiores, com elevadas taxas de substituição de nucleotídeos. Assim
sendo, os vírus de RNA possuem uma taxa de mutação maior, o que lhes confere a
capacidade de se adaptar a novos hospedeiros e de aumentar a sua virulência.
Geralmente, os vírus de RNA são menos específicos em relação ao hospedeiro que os
vírus de DNA e podem transmitir-se facilmente entre diferentes espécies animais.
Apesar de alguns vírus de RNA causarem infeções inaparentes nos hospedeiros os seus
reservatórios naturais, a maioria realiza ciclos contínuos de replicação e produção de
novos vírus, que afetam o hospedeiro (Van Blerkon, 2003).

Considerando o seu potencial para a transmissão entre espécies e evolução rápida,

muitos vírus de RNA humanos foram adquiridos a partir de outras espécies,
especialmente animais domesticados e roedores transportadores de doenças atraídos
pela adoção do estilo vida nómada, desde o Neolítico, embora seja necessário ter
cuidado concluindo este argumento, uma vez que a transmissão interespécies tem
ocorrido frequentemente na direção inversa. (Van Blerkon, 2003).

Uma vez que o processo transcrição reversa carece da fase de revisão da replicação do
DNA, um retrovírus sofre mutações muito frequentemente. Após integração no genoma
hospedeiro, estes vírus escapam à deteção pelo sistema imunológico, tornando-se
semelhantes aos vírus de DNA. O vírus da imunodeficiência humana apresenta
populações geneticamente diversas com taxas de mutação mais rápidas.

Os provírus integrados ao genoma do hospedeiro, conhecidos como retrovírus

endógenos e que perderam a capacidade de produzir partículas infeciosas têm as
sequências nucleotídicas multiplicadas e inseridas em vários pontos do genoma do
hospedeiro. Estima-se que 8% do genoma humano seja constituído por sequências de
retrovírus endógenos. Assim sendo, os retrovírus endógenos humanos podem ter
contribuído diretamente na expressão génica do hospedeiro e participado do processo
evolutivo humano (Van Blerkon, 2003).

2.1. A Coevolução do Vírus e o Hospedeiro

Durante a evolução, os vírus e os respetivos hospedeiros desenvolveram mecanismos
complementares quer de ataque por parte do vírus quer de defesa por parte do
hospedeiro. Assim sendo, o fenótipo de resistência ou de suscetibilidade dos
hospedeiros à infeção viral depende do equilíbrio entre estes mecanismos. Ou seja, os
vírus ao invadirem um organismo/hospedeiro desencadeiam pressões seletivas no
13
 hospedeiro, moldando as características da célula hospedeira, favorecendo a replicação
viral e alterando as funções celulares normais. Em contrapartida o processo de
adaptação do hospedeiro à entrada do vírus também exerce uma pressão seletiva sobre o
vírus que desencadeia um processo de contra-adaptação. Assim, ao longo da evolução
do vírus e do hospedeiro, estes procuram o equilíbrio da relação hospede/hospedeiro
(Villarreal, 2007).

Quando o sistema entra em desequilíbrio, a célula hospedeira pode sofrer alterações nas
suas funções celulares ou ocorrer a morte celular, provocando o desenvolvimento da
doença associada ao vírus, figura 10.

Figura 10. Esquema representativo do processo de coevolução do vírus no hospedeiro.

(Adaptado de Lopes e Rosso, 2010).
Atualmente considera-se que a coevolução de parasitas e hospedeiros resulta da atenuação
da virulência dos parasitas e do comensalismo. Os hospedeiros e os parasitas no curso da
evolução adaptam-se uns aos outros, chegando a um estado de equilíbrio, de tolerância
mútua, quase perfeita. A associação parasita-hospedeiro deve permitir que ambos vivam e
propaguem a espécie. Quando tal não acontece ocorre um parasitismo mal ajustado
(Martins, 1982). Por outro lado, o parasita não pode existir sem o seu hospedeiro, assim
sendo, não há vantagens para o parasita em destruir o seu hospedeiro. Estes mecanismos de
simbiose podem ser vistos como o resultado evolutivo das associações parasitárias (Trager,
1988). As espécies interdependentes podem sofrer coevolução e coadaptação com a
redução da virulência. Considera-se que a virulência é um sinal de falta de adaptação do
parasita e os parasitas pouco virulentos são um indicativo da prolongada associação ao
hospedeiro, que resultou na redução gradual da virulência (Dobzansky, 1973).

A mixomatose é uma doença vírica que ocorre naturalmente em coelhos (Sylvilagus

brasiliensis) na América do Sul, provocando uma infeção benigna (pequenos tumores e
mortalidade muito baixa). Já nos coelhos europeus e australianos esse vírus provoca doença
14
letal com lesões graves. Na década de cinquenta a população de coelhos na Austrália
(Orytolagus cuniculusera) rondava as centenas de milhões. Assim, como medida de
controlo populacional introduziu-se o vírus da mixomatose no país. Após a dispersão do
vírus a população de coelhos foi reduzida em cerca de l % da população inicial. Este
exemplo sugere que nas associações mais antigas os parasitas sofrem pressão seletiva
resultando em virulência atenuada (Ebert, 1994).

Apesar de esta doença ser a responsável pela diminuição drástica da população de coelhos
na Austrália, surgiram formas menos virulentas do vírus e os coelhos apresentam maior
resistência à infeção (Fenner e Ratcliffe, 1966).

Estudos laboratoriais com linhagens de coelhos de laboratório mostraram que após a

introdução do vírus com grau I de virulência (altamente virulento), formas menos
virulentas surgiram com a predominância de vírus com grau médio de patogenicidade (III-
IV). Em relação ao grau de resistência da população de coelhos à infeção verificou- se a
presença de vários graus de resistência predominando a virulência intermedia. Face a estes
resultados pode-se inferir que no caso do vírus da mixomatose na Austrália, a virulência
intermediária pode resultar da coevolução entre parasita e hospedeiro (Fenner e Ratcliffe,
1966; Trager, 1986).

Esta conceção apesar de genericamente estar correta, os vírus podem evoluir no sentido de
aumentar a virulência se isso lhes trouxer vantagens de sobrevivência e transmissão, pelo
que contradizendo esta visão tradicional, os resultados obtidos para a infeção de crustáceos
Daphnia magna na Inglaterra, Alemanha e Rússia com o protozoário da estirpe da
Inglaterra mostraram que o crustáceo da Inglaterra era o que apresentava maior número de
esporos ou seja maior infeção em comparação com as populações de hospedeiros das outras
regiões da Europa. Este resultado confirma que a hipótese de que o grau de virulência é
determinado pela seleção natural para maximizar a transmissão do parasita e não um
indicativo da antiguidade da relação parasita- hospedeiro (Fenner e Ratcliffe, 1966; Trager,
1986).

2.2. Importância das Vias de Transmissão

Alguns autores interpretaram os dados epidemiológicos das diferentes doenças
comparando-os com as vias de transmissão, as taxas de virulência e o comportamento do
hospedeiro. Da análise desses estudos concluíram que a virulência de parasitas transmitidos
por vetores artrópodes é maior que aquela de parasitas transmitidos por outras vias, de
ressaltar que doenças como tuberculose, raiva e SIDA, não transmitidas por vetores

15
artrópodes, não foram alvo de estudo, pois a inclusão destas pode alterar os resultados e as
conclusões dos autores (Ewald, 1983; Ewald, 1987; Ewald. e Schubert, 1989; Ewald,
1993).

Segundo os estudos, a gravidade das doenças associadas com transmissão por vetores
resulta em parte da adaptação do parasita ao hospedeiro. Os agentes infeciosos transmitidos
por vetores biológicos, tais como, insetos hematófagos, com virulência relativamente alta e
que se disseminem pelos vários tecidos do hospedeiro terão uma probabilidade maior de se
multiplicar. Isso aconteceria porque o hospedeiro debilitado e imóvel tem maior
probabilidade de ser picado pelos insetos, facilitando a transmissão do parasita para outros
indivíduos. A gravidade de doenças tais como a febre-amarela, tripanossomíase africana e
malária poderia ser explicada como uma consequência evolucionária da transmissão de
parasitas por vetores b iológicos (Ewald, 1983).

Um exemplo da relação entre virulência, comportamento do hospedeiro e transmissão

direta é o comportamento do rinovírus causador da constipação que infecta as células das
vias respiratórias superiores. Estes vírus são libertados em aerossóis, quer por espirros quer
por expetoração, podendo o vírus ser transmitido a outros indivíduos. No entanto, se,
devido a doença, o hospedeiro ficar imóvel, milhares de vírus libertados diariamente
ficarão sem contaminar outros indivíduos. Portanto, há vantagens evolutivas para o
rinovírus manter o seu hospedeiro em movimento, e para tal, é necessário não o debilitar ao
extremo, isto é, não ser altamente virulento (Ewald, 1993; Giorgio, 1994).

As doenças transmitidas através da água, refletem o comportamento do hospedeiro e as

condições ambientais e preveem que os parasitas sejam mais virulentos que aqueles
transmitidos pelo contato direto. Uma população grande e altamente virulenta de vírus terá
maior facilidade em ultrapassar o efeito da diluição na água e tal como os parasitas
transmitidos por insetos terão "vantagens evolutivas na imobilização de seus hospedeiros.
A gravidade das doenças como a febre tifoide, a cólera e outras formas de disenteria,
podem ser explicadas como resultado da transmissão do parasita através da água. Durante
os surtos diarreicos provocados por bactérias patogénicas, os indivíduos podem contaminar
as roupas, assim, se as condições sanitárias forem precárias, a água utilizada para lavagens
dessas roupas pode entrar em contato com outros indivíduos transmitindo o parasita. Nesse
caso, um doente imobilizado terá mais facilidade de infetar mais hospedeiros. Os vírus
entéricos humanos são importantes causas de enfermidades veiculadas através da água.
Esses patógenos, que são eliminados em grandes quantidades pelas fezes de indivíduos

16
infetados, podem permanecer viáveis e infeciosos durante vários meses no ambiente e,
assim, contaminar águas destinadas ao consumo humano, além de resistirem aos atuais
processos de tratamento da água (Ewald, 1993; Tavares, 2005).

A introdução de mecanismos de tratamento de água e de instalações sanitárias reduziria a

virulência dos parasitas transmitidos pela água, pois estes não teriam vantagens evolutivas
em se reproduzirem. Os dados obtidos na Índia, nas décadas de cinquenta e sessenta, após
medidas de saneamento básico em áreas endémicas de cólera, demonstram esta hipótese,
pois o agente da cólera com virulência mais atenuada (Vibrio cholerae, El Tor) predominou
em relação à forma mais virulenta, provavelmente devido a sua menor patogenicidade e
também a sua capacidade maior de sobrevivência. Em vários países a bactéria Shigella
dysenteriae (a mais virulenta do seu género) foi praticamente eliminada após tratamento de
água, e a espécie predominante tornou-se a [Link] (com virulência moderada) (Ewald,
1993; Tavares, 2005).

2.3. Os vírus e a Evolução das Espécies

As três grandes classes de hipóteses para a origem dos vírus são defendidas na literatura
(Claverie, 2006; Forterre, 2006; Wessner, 2010):

i. A hipótese do vírus primeiro foi revivida na última década por Wolfram Zillig
que sugeriu que os vírus foram originados no mundo pré-biotico, usando a sopa
primitiva como hospedeiro. Tal hipótese está em linha com a visão, adotada por
vários biólogos moleculares, em que a formação das células ocorreu
relativamente tarde na evolução da vida.
ii. A hipótese do escape é uma hipótese tradicional que vê os vírus como elementos
do genoma de uma célula que escaparam do seu ambiente celular,
transformando-se em elementos genéticos autónomos e invejosos infeciosos, é
uma hipótese mais fácil de defender num cenário pré LUCA para a origem dos
vírus. Estes genomas podem ter sido constituídos por cromossomas
semiautónomos (possivelmente formados por uma pequena quantidade de genes
de RNA) que foram replicados independentemente e transferidos aleatoriamente
entre as células. Alguns cromossomas de RNA poderiam codificar proteínas de
revestimento que ajudariam o proto vírus no processo de transferência,
finalmente tornando-se infecioso.

iii. A hipótese da redução sugere que a transformação de um organismo celular num

vírus pode ter sido muito mais fácil num mundo de células de RNA, uma vez
17
 que estas células eram muito mais simples que as células modernas. Tal como
um parasita moderno pode perder parte dos seus canais metabólicos, uma célula
de RNA vivendo como um parasita endosimbionte em outra célula de RNA
pode ter perdido a sua própria maquinaria para a síntese proteica e produção de
energia, usando em vez destes, a maquinaria do hospedeiro.

Segundo Forterre (2006) os vírus de RNA tiveram origem no Mundo das

nucleoproteínas a partir da fuga ou redução de organismos celulares. Enquanto os vírus
de DNA eram originados diretamente de vírus de RNA. Este autor descarta a hipótese
da coevolução uma vez que os vírus atuais, incluindo viroides (moléculas infeciosas de
RNA sem cápside), são parasitas intracelulares. Por outro lado os vírus são dependentes
de ribossomas para se reproduzirem já os viroides necessitam de um ambiente que
forneça os nucleotídeos. Na opinião do autor, tais condições dificilmente ocorreriam
num ambiente com moléculas livres na solução. Mas os vírus seriam de origem antiga e
não resultado de reduções mais recentes pelo fato de as proteínas de transcrição,
replicação, recombinação e reparo (proteínas informacionais) serem diferentes na
sequência em relação às proteínas que desempenham o mesmo papel nos seus
hospedeiros (Forterre, 2006).

Koonin et al. (2006) defendem a hipótese do vírus primeiro. Segundo os autores, os

diferentes grupos de vírus compartilham um conjunto de genes que sugerem o
monofiletismo e apenas distantemente relacionados com genes presentes nos
organismos celulares, os "genes de marca virótica" (viral hallmark genes). Existem duas
proteínas virais, não compartilhadas com organismos celulares, que estão presentes nos
diferentes grupos de vírus (embora não em todos os membros de cada grupo): a proteína
de topologia de rocambole, "jelly-roll protein" e as helicases da superfamília 3 (S3H). O
fato de esses genes de origem vírica serem em número reduzido, estando presentes entre
os membros dos diferentes grupos de vírus indicaria que os vírus não seriam um grupo
monofilético; por outro lado, estes não são originários de compartilhamento por
transferência horizontal face à grande divergência na sequência dos genes entre os
diferentes grupos de vírus. Assim, seriam originários diretamente da mistura de genes
que antecedessem a emergência das células (Koonin et al.,2006).

Normalmente é considerado que o RNA foi “logicamente” substituído pelo DNA no

decorrer da evolução por duas razões: primeira é mais estável, graças à remoção do
oxigénio reativo na posição 2´ da ribose, e segunda a modificação na mensagem

18
genética produzida por desaminação da citosina em uracilo (uma reação química
espontânea comum) pode ser reconhecida e reparada no DNA ao contrario do RNA.
Como consequência desta estabilidade, e mais fiável replicação, a substituição do RNA
pelo DNA como material genético celular permitiu um aumento no tamanho do
genoma, células com genomas maiores de DNA tornaram-se mais complexas,
ultrapassando os seus ancestrais com genoma baseado em RNA (Lazcano et al.,1988).
No entanto, estas argumentações não podem explicar totalmente a origem do DNA,
desde a evolução do sistema de reparação do DNA removendo uracilo do DNA, e, de
um modo mais geral, a vantagem de ter uma genoma maior pode ter sido um fator
determinante no processo de evolução apenas depois da população de células de DNA
estar estabelecida. E se em vez disso, a substituição do RNA por DNA ocorreu primeiro
nos vírus, a modificação do seu genoma de RNA em DNA teria produzido um beneficio
imediato para os vírus (um pré-requisito para a seleção darwinista). Nos sabemos que
alguns vírus modernos alteram de fato quimicamente o seu genoma de DNA para se
tornarem resistentes ás nucleasses do seu hospedeiro (por exemplo por via de metilação,
hidroximetilação ou processos químicos mais complexos de modificação)( Forterre,
2006). Como primeiro passo, o surgimento ou recrutamento da redutase ribinucleotida
activa ancestral no vírus, iria modificar o genoma de RNA em genoma de DNA
contendo uracilo (U-DNA). Este passo intermedio na transição de RNA para DNA é
inferido da síntese de dTMP a partir de dUMP em células modernas. Alguns vírus de
bactérias que têm genomas de U-DNA podem ser relíquias desta primeira transição
(Forterre, 2006). Vírus que que conservaram um genoma de RNA evoluíram
mecanismos alternativos para proteger o seu material genético contra a degradação do
RNA ou modificando enzimas, sendo que alguns deles mantêm o seu genoma de RNA
nas suas capsides durante todo o processo de infeção, enquanto outros conseguem
codificar proteínas que inibem a degradação celular do RNA ou modificam mecanismos
responsáveis pela degradação do RNA (ex: desmetilases). No segundo passo, o
surgimento de atividade de timidilato sintase em alguns vírus de linhagem U-DNA terá
produzido vírus com a forma moderna de DNA contendo timidina T-DNA. Este passo
terá ocorrido de forma independente pelo menos duas vezes de modo a explicar a
existência de duas timidilato sintase não homologas, ThyA e ThyX (Myllykallio et
al.,2002). Em concordância com a ideia que a ribonucleótido redutase e a timidilato
sintase foram inventadas na virosfera , é importante notar que muitos vírus de DNA são
capazes de codificar o seu próprio ribonucleótido redutase ou a sua timidilato sintase.

19
Além disso, estas proteínas estão normalmente apenas relacionadas distantemente com
aquelas codificas pelos seus hospedeiros na arvore filogenética(Myllykallio et al.,2002;
Filée et al.,2003;Miller et al.,2003;Forterre et al.,2004).

No entanto em conformidade com Koonin et al. (2006) a hipótese do ancestral celular

com genoma de RNA não seria possível pelo fato de o conjunto mínimo de genes
necessários para uma célula funcional ser relativamente grande da ordem de algumas
centenas. A instabilidade das moléculas de RNA exigiria que tal genoma consistisse em
moléculas distintas de RNA e que fossem o suficiente pequenas para garantir uma
replicação. Isso, porém, levantaria a uma questão de como as células filhas receberiam
pelo menos uma cópia de cada molécula, para tal, seria necessário um sistema altamente
aperfeiçoado de segregação de moléculas de RNA. Além disso, se o sistema de
produção do DNA das células tivesse sido recrutado a partir dos vírus, seria de se
esperar que os genes de origem vírica essenciais à replicação do DNA como os S3H e a
primase do tipo vírico estivessem presentes. Para os autores, tanto as células quanto os
vírus de DNA seriam descendentes de um mundo de DNA que sucedeu o mundo de
RNA em etapas intermediárias. Para este autor, o modelo da evolução dos sistemas
genéticos envolve a replicação e a competição de moléculas em soluções contidas em
compartimentos inorgânicos intercomunicantes (como poros de uma rocha), assim:

a) do Mundo de RN A teriam surgido as enzimas do RNA, as ribozimas egoístas

que dariam origem aos intrões do tipo I;

b) do Mundo de RN A- surgiriam as proteínas dos vírus de RNA de cadeia dupla;

c) do Mundo de RN A-DNA- os retrotranscriptase, os exões, e os intrões do tipo II;
d) do Mundo de DNA, as células bacterianas, a Arquea e os vírus de DN A.
A evolução dos cápsides teria ocorrido já nas fases pré-celulares promovendo, o
transporte entre os compartimentos e a proteção do material genético dos ancestrais dos
vírus. Durante a evolução até à célula o sistema genético teria características virais, cada
molécula de RNA e DNA atuariam como elementos genéticos egoístas, não havendo
distinção entre elementos parasitas daqueles que dariam origem aos genomas das
formas celulares. Essa distinção ocorreria com o desenvolvimento de cooperativas
egoístas, conjunto relativamente estável de ele mentos genéticos co-herdados. Num
estágio posterior, os genes codificadores de elementos de replicação e os genes de
funções acessórias passariam a ficar fisicamente ligados; enquanto genes solitários
ocupariam o nicho parasítico. Os vírus eucarióticos surgiriam da mistura de vírus
bacterianos com vírus de Arquea enquanto a célula eucariótica surgiria da fusão de uma
20
bactéria com Arquea. A hipótese da fusão é defendida por Koonin et al. (2006) pelo fato
de o genoma eucariótico apresentar similaridades com genoma Arquea e de bactérias.

Forterre (2006) defende ainda a hipótese da eucariogénese viral, isto é, os vírus seriam
os responsáveis pela emergência do núcleo eucariótico. Os Poxvírus têm um ciclo
reprodutivo reminiscente a características do núcleo eucariótico. A polimerase de DNA
e as enzimas de capping de RNAm do Poxvírus estão evolutivamente relacionadas com
as dos eucariotas (embora formem um grupo monofilético viral). A transcrição inicial
do DNA viral ocorre ainda no núcleo viral e o RNA resultante é passado ao citoplasma
do hospedeiro por meio de poros. Depois da liberação do núcleo viral, o DNA do vírus
organiza-se segundo um mininúcleo, recrutando a membrana do retículo
endoplasmático do hospedeiro. A replicação do DNA do vírus só se realiza após a
formação do mininúcleo que desaparece após término da replicação viral num processo
controlado por proteínas fosforilantes. Embora Poxvírus tenham um genoma pequeno,
os mimivírus têm um genoma (cerca de 1Mb), o que é metade do tamanho dos menores
genomas eucariotas. Assim um vírus de DNA poderia ser um iniciador da eucariogénese
(Forterre, 2006).

A hipótese que o DNA foi transferido dos vírus para as células, juntamente com todo a
maquinaria necessária para a sua replicação, foi originalmente proposta para explicar a
existência de duas combinações de proteínas replicadores do DNA não homologas,
umas no domínio Bacteria, e o outro conjunto em Archaea e Eucarya. Foi então
necessário conceber que ocorreram pelo duas transferências independentes para ter em
conta esta observação. Recentemente Forterre sugeriu que ocorreram três tranferencia
de DNA independentes de vírus para células de RNA , o que levou à formação dos três
domínios Archaea, Bacteria e Eucarya. A hipótese “três vírus três domínios” pode
explicar porque a maioria da maquinaria de replicação em células Eucarya e Archaea,
apesar de similar, exibe diferenças criticas. Consequentemente, as principais
topoisomerases do DNA Eucarya (Topo IB e Topo IIA) não são filogeneticamente
relacionadas com as das Archaea (Topo IA e Topo IIB) (Gadelle et al.,2003; Krogh e
Shuman, 2002). Em adição, Archaea contem DNA polimerases da família D sem
homólogos presentes em Eucarya. (Cann et al.,1998). Alem disso, as DNA polimerases
da família B em células Archaea e Eucarya, apesar de serem homologas, não estão
especificamente relacionadas, mas ambas agrupam com diferentes grupos virais na
filogenia das DNA polimerases B (Filée et al.,2003).

21
Esta hipótese pode também explicar o motivo pelo qual membros de diferentes
domínios são infetados por grupos de vírus específicos. Se um ancestral de todos os
vírus existentes presentemente já prospera-se no tempo de LUCA, membros de uma
determinada família viral (por exemplo Fuselloviridae) deveriam ser capazes de infetar
células dos três domínios celulares. E isto não é aparentemente o caso, uma vez que a
presença de fuselloviridae aparenta ser restrita a células do domínio Archaea. Contudo ,
num cenário três vírus três domínios, seguindo uma diversificação inicial das linhagens
virais paralelamente com a divergência nas linhagens de células de RNA, apenas vírus
de eram capazas de infetar células de RNA no ponto de origem de cada domínio
poderiam ter sobrevivido a massiva eliminação de células de RNA ( e RNA/DNA vírus)
que ocorreu após o surgimento das três linhagens de células de DNA. Isto teria
selecionado em cada domínio uma subpopulação de diferentes famílias virais que
estariam pré adaptadas para infetar as células de DNA recém formadas (Forterre, 2006).

Claverie (2006) também defende a eucario génese viral, ocorrendo por transferência
gradual do genoma de RNA do hospedeiro para o núcleo. Para Witzany, os telómeros
são outra marca do processo de eucariogénese viral. Contudo, não se sabe se os
telómeros nas bactérias com núcleos, os Planctomycetes, são semelhante às dos
eucariotas, apesar de fornecer um importante dado para a hipótese à eucariogénese viral
(Witzany, 2008).

Forterre e Prangishvili (2009) apresentam uma outra hipótese para o envolvimento de

vírus na eucariogénese. Em lugar da ação direta da infeção por um vírus gigante de
DNA, a célula hospedeira de um protoeucariota teria recrutado os mecanismos virais
produzindo a sua própria membrana e poros nucleares. Assim, num primeiro momento,
esta célula teria protegido o seu material genético dos vírus. Por sua vez, a capacidade
de formação do mininúcleo teria surgido quer nos vírus de DN A quer nos vírus de RNA
protegendo-os do sistema de defesa do hospedeiro (Forterre e Prangishvili, 2009).

Assim, a complexa parede celular bacteriana poderia ter origem numa resposta à
pressão seletiva para evitar os ataques virais já que esta é o principal modo de entrada
do vírus por meio da fusão deste com a membrana celular. Isso explica a pequena
diversidade viral entre as bactérias em comparação com os vírus de Arquea e eucariotas
e a predominância de vírus Caudovirales. Uma vez que estes vírus desenvolveram um
sistema de entrada com uma cauda proteica que penetra na parede e na membrana
celulares e injeta o material genético para o interior da célula hospedeira. Por

22
conseguinte, os autores sugerem que os mecanismos nos hospedeiros para evitar a
infeção por parte dos vírus que poderiam ter conduzido à divergência entre os domínios
e entre as espécies dentro de cada domínio, através de um efeito colateral na redução da
transferência lateral de genes (Forterre e Pragishvili, 2009).

De acordo com Forterre (2006), os vírus têm um papel na evolução das mitocôndrias e
dos cloroplastos. As mitocôndrias são derivadas de uma α-proteobactéria
endossimbionte, mas a polimerase de RNA, a polimerase de DNA e a helicase
codificadas no seu genoma são similares aos correspondentes elementos do bacteriófago
T3/T7. As proteínas homólogas são codificadas pelo genoma de provírus crípticos
presentes em proteobactérias. Aparentemente houve uma substituição não homóloga na
evolução do organelo. Já nos cloroplastos, a polimerases de RNA são similares quer às
bacterianas (cianobactérias) quer às virais.

Nos eucariotas, tais como, nos mamíferos aproximadamente 30% do genoma consiste
em sequências intrónicas, e 60% do genoma consiste em regiões intergénicas com
elementos móveis em variados estados de degradação. Segundo Koonin et al. (2006),
estes elementos móveis, são oriundos do “Mundo de Vírus” ancestral. Os vírus
endógenos e retroelementos podem libertar-se de uma porção do genoma e inserirem-se
em outra porção, alterando o padrão de expressão de genes. Por outro lado podem criar
novos genes criando um novo sítio de edição – splicing - alternativo. (Forterre e
Pragishvili, 2009).

Harris sugere que uma infeção viral na linhagem germinativa de um ancestral metatério
pode ter impulsionado o desenvolvimento da placenta o que justificaria a presença de
retrovírus endógenos no citotrofoblasto placentário. Os retrovírus são capazes de induzir
a fusão celular tanto em tecidos cultivados quanto in vivo. Após o parto, com a expulsão
da placenta, o sinciciotrofoblasto exibe sinais de degeneração com aglomeração nuclear
e picnose. Este padrão é idêntico ao sincício formando em células cultivada e infetadas
com retrovírus, bem como em certos tumores e tecidos de organismos com infeção
retroviral, figura 11.

23
Figura 11. Sincício-fusão de várias células infetadas por um vírus ([Link]
[Link]).

Na década de 1970, foram observadas, por microscopia eletrónica, partículas virais no

sinciciotrofoblasto da placenta indicando a presença de um provírus. Os estudos
posteriores confirmaram esta hipótese e foi identificada a sequência intacta de um gene
viral derivado de retrovírus endógenos (HERVs), que produzem uma proteína do
sinciciotrofoblasto, denominada de cincitina. Esta proteína está envolvida na fusão dos
tecidos na interface mãe-feto e na supressão da resposta imunológica, garantindo a
tolerância ao feto pelo sistema imune da mãe o que impede a rejeição do feto
resolvendo o grande dilema da maternidade. A placenta surgiu ao longo da evolução
dos mamíferos e exerce um papel crucial, permitindo a nutrição e a proteção do embrião
nesse período (Sentís, 2002).

A principal diferença entre chimpanzés e o humano são o número, a variedade e, mais

importante, os lócus de integração de elementos de origem viral no genoma humano. A
origem da humanidade poderá ser vista como resultado da criatividade viral (Villarreal,
2004).

3. Vírus como Vetores na Tecnologia do DNA Recombinante

Os eventos de mutação são responsáveis pela geração de variabilidade genética nas
populações, permitindo a ação da seleção natural que favorece os tipos mais adaptados.
A exploração dessa variabilidade pela espécie humana, embora de forma empírica, teve
início há cerca de dez mil anos, quando se deu a domesticação das primeiras culturas
agrícolas.

O melhoramento genético de plantas, animais ou microrganismos só é possível se existir

variabilidade genética, isto é, se, dentro das espécies a serem melhoradas, ocorrerem
indivíduos com diferentes características que podem ser herdadas. Essa variabilidade é
24
facilmente constatada tanto na espécie humana como em qualquer outra. Tem origem,
fundamentalmente, em mutações, que são a base da evolução. Resultam de
modificações que ocorrem nas moléculas do ácido desoxirribonucleico (DNA), que é o
material genético de todos os seres vivos. O mecanismo de recombinação resultante da
hibridação, ou seja, do cruzamento entre tipos portadores de diferentes mutações
promove uma variabilidade adicional nas populações, propiciando a ocorrência do
fenómeno de seleção natural (Azevedo et al., 2000).

Na clonagem molecular, um fragmento do DNA de interesse liga-se a outra molécula de

DNA chamada de vetor para formar um DNA recombinante.

Essa molécula de DNA recombinante é introduzida numa célula hospedeira compatível,

num processo chamado de transformação. Para que possa ser usada como vetor, uma
molécula de DNA deve ser capaz de se replicar dentro da célula hospedeira, além de ter
um tamanho pequeno. É de grande importância a descrição de vetores moleculares para
a propagação das moléculas de DNA inseridas e os vetores comumente empregados são
plasmídeos bacterianos, bacteriófagos ou vírus animais e vegetais.

A palavra vetor, que deriva do Latim vector (aquele que carrega, entrega) define o
agente que constitui ou contém os genes a serem transferidos e expressos em células
recetoras.

A construção de uma molécula de DNA recombinante favorece o estudo da estrutura

dos genes, no diagnóstico clínico, na terapia genética, no melhoramento animal e
vegetal, na obtenção de grandes quantidades de proteínas raras e na construção de
bibliotecas de genes.

O bacteriófago lambda, parasita obrigatório de E. coli, é um dos vetores de clonagem

molecular mais utilizado na tecnologia do DNA recombinante. Durante o ciclo lítico do
fago, os genes envolvidos no ciclo lisogénico, que são dispensáveis no ciclo lítico,
podem ser totalmente substituídos por outro fragmento de DNA, melhorando em 100%
a infeção da E. coli hospedeira.

Hoje há uma enorme quantidade de estudos que descrevem o potencial dos vírus como
vetores de clonagem para células animais, recebendo especial atenção os vírus de
mamíferos tais como Simian vírus 40 (SV40), o Adenovirus e o Baculovirus. O vírus
SV40, isolado de células tumorais de macacos, foi um dos primeiros sistemas virais
utilizados para introduzir genes em células de mamíferos.
25
Vetores virais tem sido usados na terapia genética, a fim de levarem o DNA terapêutico
ao núcleo das células alvo. Atualmente há cinco grupos principais de vetores virais
usados: retrovirais, lentivírus, adenovírus, virais adenoassociados e virais de herpes
simplex.

Todos apresentando vantagens e desvantagens. Um retrovírus murino, o vírus da

leucemia murina de Moloney (MoMuLV), foi o primeiro sistema vetorial desenvolvido
para aplicações clínicas da terapia genética. Os vetores adenovírus são os vetores de
DNA mais utilizados, mas não se integram no genoma e são imunogénicos (de Azevedo
et al., 2000).

3.1. Terapia Genética

Os bacteriófagos foram descobertos na época da Primeira Guerra Mundial e logo se
tornaram uma esperança na prevenção ou cura de doenças infeciosas. A terapia com
recurso a bacteriófagos já era estudada em 1915, como base para o tratamento de
infeções. Mas com o advento dos antibióticos na década de 40, as pesquisas com esses
vírus foram interrompidas, ressurgindo apenas nos últimos anos, decorrente ao
aparecimento de linhagens resistentes aos antibióticos, associadas ao elevado uso destas
moléculas (Menck, e Ventura, 2007).

Em 1944 Avery Oswald e seus colaboradores demonstraram que era possível transferir
genes de uma estirpe bacteriana patogénica para outra não-patogénica, identificando o
DNA como portador da informação genética. Esta descoberta permitiu a James Watson
e Francis Crick em 1953 propor a estrutura da dupla-hélice do DNA. Só no ano de 1964
Edward L. Tatum, Joshua Lederberg e Arthur Kornberg, prémios Nobel da medicina,
especularam a possibilidade transferir genes (Menck, e Ventura, 2007).

O isolamento do primeiro gene ocorre no ano de 1969 por Jon Beckwith e

colaboradores em Harvard reforçando a possibilidade da transferência genética. No
entanto, teve início também a polêmica acerca da segurança da engenharia genética e a
possibilidades da sua utilização para eugenia. Este debate estendeu-se durante a década
de 70 e resultou na criação de legislação em diversos países sobre o assunto (Menck, e
Ventura, 2007).

Em 1977, os pesquisadores Michael Wigler e Richard Axel conseguiram inserir o gene

que codifica a enzima timidina quinase em células portadoras de deficiência nesse gene.
A metodologia utilizada ainda era pouco eficiente e só ganhou força com a proposta de
utilizar vírus não-patogénicos como vetores transportadores de genes. Esta ideia
26
impulsionou os estudos na área e já nos anos de 1983 e 1984 foram propostos os
primeiros sistemas de vetores derivados de três espécies virais, o retrovírus, oadenovírus
e os vírus adenoassociados (AAV), figura 12.

Figura 12. Principais vírus usados como vetores na terapia genética

([Link]

A possibilidade de usar os vírus como veículos para transportar e introduzir genes num
paciente, permitindo a cura de doenças abre enormes perspetivas na área da saúde. Esta
terapia pretende utilizar as estratégias dos vírus, que ao longo da evolução por milhões
de anos aperfeiçoaram a capacidade de transferir material genético para células de um
indivíduo resultando em benefício terapêutico (Menck, e Ventura, 2007).

A capacidade de interferir na constituição genética de um indivíduo, por meio da terapia

génica, surge como uma nova esperança para os problemas relacionados com a saúde
humana, permitindo a cura de doenças genéticas herdadas dos pais, ou mesmo de
doenças que podem ser adquiridas durante a vida, como o cancro, doenças
cardiovasculares e infeções virais.

Mas afinal o que é a terapia génica. A terapia genética envolve qualquer estratégia de
introdução de uma informação genética numa célula com o intuito de modificar o curso
de uma doença.

A teoria por trás da terapia genética é bastante simples, apesar de sua prática ser
bastante mais complexa. O objetivo da terapia genética é proporcionar às células as
ferramentas necessárias para combater uma dada doença. Por exemplo, a hemofilia é
causada por uma mutação genética herdada num gene que regula a coagulação
sanguínea. Através da transferência de uma cópia saudável desse gene para o doente, as
células deste doente podem produzir a proteína que estava ausente e, assim, regular a
coagulação de forma apropriada. Esta terapia funciona de uma forma diferente em
27
relação aos fármacos tradicionais, os quais não corrigem a origem da doença mas
apenas tratam dos sintomas da doença. Com a terap ia genética, em teoria, uma doença
herdada pode ser tratada na sua origem genética e o doente pode ter uma vida normal
sem a necessidade de medicamentos adicionais (Menck, e Ventura, 2007).
Quando falamos de “transferência génica” não estamos a ser precisos no uso do termo
pois o que realmente está a ser transferido é, na maioria das vezes, um cDNA. O cDNA
é um derivado do mRNA e que contém todas as informações necessárias para produzir
uma proteína de uma forma compacta e simplificada. No entanto, a introdução do
cDNA numa célula não garante a produção da proteína são necessárias as informações
que regulam o processo de transcrição e tradução, ou seja, como, onde e quanto de
proteína terá que ser produzida. Assim, o cDNA tem que ser acompanhado de
sequências de DNA extras, ditas sequências regulatórias, que são importantes para
controlar todo o processo (Menck, e Ventura, 2007).

A introdução destes elementos regulatórios junto ao cDNA permite manipular e regular

a produção da proteína de interesse para que esteja disponível na célula certa, no tempo
certo e na quantidade certa.

Isto é feito através da utilização de promotores (sequencia regulatória) que produzem a

expressão do cDNA para tecidos específicos (como por exemplo células tumorais) ou
em condições fisiológicas pré-determinadas (células em divisão acelerada como em
alguns tipos de cancro).

Genericamente e de uma forma simplificada, as etapas envolvidas na de terapia genética

são: o isolamento do gene, a construção de um vetor, a transferência para células no
tecido alvo, e a produção da proteína codificada e expressa pelo gene terapêutico nessas
células, segundo a figura 13.

Figura 13. Etapas envolvidas na terapia genética com um vetor viral

28
([Link]

Para introdução de genes nos organismos pode ser executada de duas formas: a
introdução in vivo e a introdução ex vivo, figura 14. Na estratégia ex vivo consiste na
modificação das células de um tecido-alvo retiradas de um paciente e cultivadas in vitro
posteriormente são expandidas e reintroduzidas no paciente onde vão expressar o gene
exógeno desejado. Na estratégia in vivo, os vetores eficientes, como os adenovírus,
podem transportar o transgene (material genético transferido) diretamente ao órgão alvo
(como o fígado) através de uma injeção endovenosa, levando à eficiente expressão do
transgene.

Ex vivo:
Colheita e cultivo in vitro das células do paciente;
Transdução com vetor carregando o gene terapêutico;
Seleção e expansão das células com gene terapêutico;
Reintrodução das células modificadas no paciente.

In vivo:
Formulação apropriada do vetor que carrega o gene terapêutico;
Injeção direta do vetor no tecido-alvo do paciente.

Figura 14. Estratégias usadas na terapia genética in vivo e em ex vivo.

([Link]

29
Os Vírus são vetores génicos por excelência que têm evoluído há milhões de anos na
natureza em associação com todos os organismos desde as bactérias até plantas e
animais. Os sistemas biomoleculares específicos de transferência, recombinação e
expressão génica dos vírus constituem instrumentos poderosos para a construção de
vetores cada vez mais eficientes e seguros.

Na figura 15, pode ver-se representada a distribuição dos diferentes tipos de vetores que
têm sido utilizados em protocolos clínicos. Como pode ser observado, os vetores
derivados de adenovírus e retrovírus são os principais veículos para ensaios em seres
humanos, contribuindo com 50 % de todos os testes. Outros vírus muito utilizados são
os derivados de vírus adenoassociados (AAV), vírus não-patogénicos, que, apesar de
muito limitados no espaço disponível para o transgene, permitem a sua expressão
durante bastante tempo, induzindo fraca resposta imunológica, e os derivados de vírus
da família poxviridae como o vaccinia, empregues em seres humanos durante mais de
dois séculos em processos de imunização contra a varíola (Dani, 2002).

a) b)

Figura 15. Distribuição dos protocolos clínicos por (a) tipo de vetor; (b) segundo as
patologias ([Link]

30
Apesar de ser uma terapia promissora a terapia genética apresenta algumas limitações,
nomeadamente:

 Eficiência da transferência- Nos estudos de terapia genética, a maior parte dos

esforços são concentrados na descoberta de vetores que possam transferir o
DNA de modo eficiente, principalmente para as células desejadas.

 Duração da expressão- A terapia genética é praticamente inútil se a expressão

do gene estranho não for mantida por um período adequado de tempo. As
pesquisas estão orientadas para o desenvolvimento de sistemas com uma
expressão duradoura, de modo a submeter o paciente a um único tratamento, ou
a tratamentos repetidos em períodos maiores (anos).

 Segurança do procedimento - É um problema particularmente para os vetores

virais, pois alguns vetores derivam de vírus perigosos como o VIH, sendo
necessário que estes vetores sejam submetidos a critérios de segurança,
particularmente no que concerne a presença de genes que podem determinar a
patogenicidade do vírus utilizado para transferir o gene desejado para as células
do hospedeiro.

 Reação imunitária - Como toda substância estranha ao organismo, o vetor pode

induzir uma resposta imunitária sob tratamento podendo causar a eliminação das
células modificadas geneticamente, ou a inativação da proteína produzida pelo
gene novo.

Apesar destas limitações espera-se que a terapia genética se torne uma abordagem
básica para a promoção da saúde e tornando-se um método universal na prevenção de
doenças e no desenvolvimento de tratamentos. Os bacteriófagos, baculovirus, retrovirus,
adenovirus e vírus adenoassociados são exemplos de vírus que foram modificados com
sucesso pelas técnicas do DNA recombinante e são aplicados na agricultura e na
medicina. Na tabela 2, apresentam-se os diferentes vírus estudados (Dani, 2002).

31
Tabela 2. Métodos Biológicos utilizados na introdução de genes em células de
mamíferos (Dani, 2002).

Vetores Vantagens Desvantagens

Retrovírus Alta taxa de transdução; amplo Imunogénico; requer células

VIH espectro de células hospedeiro em divisão; risco de
(somente células em divisão); mutagénese risco de reversão
insercional; sistema muito bem para o tipo selvagem;
estudado; integração no genoma inativação pelo complemento;
hospedeiro; proteínas do vetor baixos títulos; baixa taxa de
não expressas no hospedeiro. integração in vivo.
Infetam e transduzem células Sistema pouco conhecido;
mitóticas e pós- mitóticas por eficiência baixa in vivo.
longo prazo.

Adenovírus Amplo espectro de células do Imunogénico; reversão para o

hospedeiro (células mitóticas e tipo selvagem; período curto de
não mitóticas); altos títulos; expressão génica em células
eficiência de transdução;); em divisão (depuração do
genoma viral epissomal; vírus epissoma); vazamento de
selvagem causa doença leve; não proteínas virais.
envelopado.

Adeno-associados Amplo espectro de células do Limite ao empacotamento de

hospedeiro; nenhuma doença DNA; integração não é sempre
humana associada; infecta sítio-dirigida; possivelmente
células em divisão ou paradas; imunogénico.
integração dirigida é
preferencial.

Híbridos; Amplo espectro; altos títulos; Imunogénico.

Adenovírus-AAV alta eficiência de transdução;
integração dirigida.

Herpes simples Epissomal; pode induzir infeção Imunogénico; vírus diferentes

latente por toda a vida têm seletividade diferente;
(especialmente no SNC); EBV é oncogénico; ativação de
acomoda insertos grandes; vírus latente; baixa; eficiência
produção de altos títulos. de transdução; expressão
transitória nos vetores atuais;
sistema em desenvolvimento.

Vaccinia Potencial para desenvolvimento Uso limitado aos indivíduos

de uma grande variedade de não previamente vacinados;
vacinas genéticas. uso não indicado em
imunossuprimidos.

32
4. Conclusão

Uma vez que todos os organismos são infetados por vírus, existe uma grande
possibilidade de infeções e de transferência de genes virais entre os diferentes seres
vivos, confirmando o papel dinâmico dos vírus na circulação dos genes na biosfera.

Durante uma infeção, alguns mutantes do agente infecioso são favoravelmente

selecionados devido à sua eficiência de transmissão e sobrevivência no hospedeiro.
Deste modo, uma doença infeciosa tende a assumir uma condição que garanta, ao
máximo a sobrevivência do agente infecioso, o que garante a sua sobrevivência no
tempo e no espaço.

Por outro lado, este mecanismo evolutivo não é unilateral. O hospedeiro também
evoluiu com as infeções de modo a tornar-se resistente a elas, dando origem a pressões
seletivas que levam à seleção de agente infeciosos capazes de vencer estas barreiras e
reinstalar a infeção. Portanto, as doenças infeciosas evoluem segundo um jogo de
pressões seletivas cujo resultado final será a garantia de existência do hospedeiro e do
agente infecioso.

O papel dos vírus no planeta transcende a visão estreita de que são apenas agentes
causadores de doenças. Nos últimos anos, numerosos estudos sugerem que os vírus de
vários tipos podem ter contribuído para a evolução de importantes características dos
hospedeiros ajudando a construir a teia que forma a árvore da vida.

O genoma humano bem como o da maioria dos organismos eucarióticos contém um

número significativo de HERVs, isto é, sequências resultantes de infeções virais
anteriores inseridas de forma permanente.

Estima-se, que 8,3% do genoma humano seja formado por esses fragmentos genéticos
dos vírus, em consequência de infeções virais ocorridas ao longo de cerca de 3,5
milhões de anos de evolução. Esta percentagem é superior à dos genes funcionais
existentes no nosso genoma (4% a 5%), o que leva a indagar quantas mais sequências
virais têm função no nosso organismo.

A presença no genoma humano de genes originados de um retrovírus e que contêm

informações para a produção desta proteína crucial para a placentação e para a
manutenção do feto na gravidez é um forte indício de que uma infeção por retrovírus
ocorrida há milhões de anos pode ter sido fundamental para a evolução dos mamíferos

33
placentários.

Recentemente foi confirmado a integração de sequências de genes de outros vírus (de

RNA ou de DNA) no genoma dos hospedeiros, o que reforça a ideia de que estas
entidades teriam permitido a evolução de organismos de diversas espécies incluindo a
humana. Embora ainda se desconheça o impacto de sua presença na evolução dos
hospedeiros, há casos documentados de genes de parvovírus, circovírus, filovírus e
bornavírus em genomas de muitos vertebrados.

Por outro lado perspetiva-se que nos próximos 20 anos seja possível com a terapia
génica tornar a medicina mais preventiva, e o diagnóstico e as terapias mais específicos
e efetivos, integrados ao aconselhamento genético dentro do serviço médico apesar das
limitações em relação à eficiência e direcionamento dos vetores de transferência
genética.

No entanto, os vetores virais recombinantes são os veículos mais potentes e promissores

para a transferência genética apesar da resposta imunológica do hospedeiro e as
dificuldades de produção em larga escala e padronização ainda serem grandes barreiras
para seu uso clínico.

34
5. Bibliografia

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