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Entendendo o Nested PCR

O Nested PCR aumenta a especificidade da amplificação do DNA através de duas reações de PCR subsequentes, onde o produto da primeira reação serve como molde para a segunda. Isso reduz a amplificação de regiões não alvo e é útil quando há impurezas ou pouca quantidade de DNA alvo. No entanto, requer mais tempo, reagentes e aumenta o risco de contaminação.

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Entendendo o Nested PCR

O Nested PCR aumenta a especificidade da amplificação do DNA através de duas reações de PCR subsequentes, onde o produto da primeira reação serve como molde para a segunda. Isso reduz a amplificação de regiões não alvo e é útil quando há impurezas ou pouca quantidade de DNA alvo. No entanto, requer mais tempo, reagentes e aumenta o risco de contaminação.

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Nested PCR (nPCR)

Esse PCR aumenta a especificidade da amplificao do DNA por reduo de regies no


especficas de amplificao. A especificidade desse PCR determinada pela especificidade dos
primers.

Essa variao do PCR utiliza dois conjuntos de oligonucleotdeos iniciadores em reaes


subsequentes, cujo produto de amplificao da primeira reao utilizado como molde para a
segunda.

Para melhorar a especificidade e a eficincia da reao, o segmento genmico amplificado


primeiro de forma abrangente, copiando at mesmo sequncias localizadas fora dela, e depois,
utilizando este primeiro produto, a amplificao da real sequncia alvo. Estas duas etapas,
chamadas rounds, podem ser realizadas concomitantemente ou em duas reaes
separadamente, caracterizando o Semi Nested PCR.

til quando impurezas que inibem a amplificao do DNA esto presentes nas amostras ou
quando a quantidade de DNA do agente que se deseja detectar muito pequena.

A lgica por trs dessa estratgia que se o lcus errado foi amplificado erroneamente na
primeira vez, a probabilidade dele ser novamente amplificado na segunda vez extremamente
baixa.

As desvantagens so mais tempo, mais reagentes e maior risco de contaminao.


Fontes:

[Link]
[Link]
[Link]
[Link]
38000297

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