12/07/2021
Toxicologia Compreender e quantificar a
metemoglobina no sangue, por meio
de espectrofotometria
Metemoglobina no
sangue
Prof. Dr. Carlos Roberto da Silva Júnior
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Conhecimentos prévios Conhecimentos prévios
Intoxicação em cães e gatos: diagnóstico toxicológico
Metemoglobinemia: do Diagnóstico ao Tratamento empregando cromatografia em camada delgada e
cromatografia líquida de alta pressão com detecção
ultravioleta em amostras estomacais
Disponível em: <[Link]
Acesso em: 27 mai. 2021
Disponível em: <[Link]
Acesso em: 27 mai. 2021
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Conhecimentos prévios Convite ao estudo
O que é metemoglobina?
Química Geral, Analítica e Orgânica
O que o resultado de sua determinação indica?
Intoxicação
O que é um método de determinação espectrofotométrica?
Rotinas de laboratório
Quais são os critérios que devem ser observados em uma
Procedimentos operacionais determinação espectrofotométrica?
Diagnósticos clínicos Como a metodologia analítica auxilia nos
Manipulação de produtos químicos diagnósticos de metemoglobina?
Manipulação de amostras biológicas Qual tipo de intoxicação pode ser diagnosticado
por este teste?
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Equipamentos de proteção individual (EPI)
É obrigatório o uso de jaleco de mangas longas, óculos de proteção,
máscara, calças compridas, calçado fechado onde nenhuma parte do Reagentes,
pé fique exposta, cabelo preso, caso possua cabelos compridos e equipamento,
vidrarias e
luvas de procedimento.
materiais
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Reagentes Equipamentos
Amostra de sangue 8 mL para cada 20 alunos Balança analítica 1 por laboratório
Agitador magnético 1 para cada 5 alunos
Fosfato de sódio dibásico PA 9g para cada 20 alunos
Espectrofotômetro 1 por laboratório
Fosfato de potássio monobásico anidro 5,7g para cada 20 alunos
Saponina purificada 1g para cada 20 alunos
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Vidrarias e materiais Vidrarias e materiais
Tubo para coleta EDTA 4 mL 2 para cada 20 alunos Tubos de ensaio sem orla 15x100mm 4 para cada 5 alunos
Luvas descartáveis 1 par para cada aluno Micropipeta multivariável 10 a 100μL 1 para cada 5 alunos Suporte para
micropipetas 1 para cada 5 alunos
Papel alumínio 1 rolo para cada 20 alunos
Ponteiras para micropipeta sem filtro estéril 5-200μL 4 para cada 5 alunos
Espátula chapa inox com colher (15cm) 2 para cada 20 alunos
Pipeta graduada 10 ml 1 para cada 5 alunos
Balão volumétrico 1000mL 2 para cada 20 alunos
Pipeta graduada 5 ml 1 para cada 5 alunos
Barra magnética 0,7x3,0cm 2 por laboratório Fita crepe 1 para 20 alunos
Proveta graduada 250mL 1 por laboratório Caneta para retroprojetor 1 para cada 5 alunos
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Vídeo 01
Procedimento
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Atividade proposta Preparo das soluções
Determinação da metemoglobina no sangue Preparo da solução mãe (Tampão fosfato – solução estoque)
Com o auxílio de uma balança analítica, pesar 9g de fosfato de sódio dibásico e
5,7g de fosfato de potássio monobásico. Para pesar os sais, utilizar pedaços de
papel alumínio (10x10 cm) cortados previamente
Transferir os sais para um balão volumétrico (1000 mL) e completar com água
destilada até o menisco
Inserir a barra magnética no interior da solução
Agitar a solução utilizando agitador magnético, até que
haja a dissolução completa dos sais
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Preparo das soluções
Preparo da solução de trabalho Vídeo 02
Com o auxílio de uma proveta, medir 250 mL da solução mãe e, em seguida,
transferir para um balão volumétrico de 1000 mL
Completar com água destilada até o menisco
Agitar a solução utilizando agitador magnético para
total homogeneização
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Preparo das soluções Procedimentos
Preparo da saponina 1% (m/V) No momento da aula, deverão ser realizados os seguintes procedimentos:
Pesar 1g de saponina PA, em balança analítica Obtenção e identificação das amostras sanguíneas:
Adicionar em 100 mL de água destilada
Agitar a solução utilizando agitador magnético Selecionar dois voluntários, um fumante e outro não fumante
Utilizar barra magnética para a homogeneização Coletar 4 mL de sangue de cada voluntário (utilizar tubo
de coleta EDTA)
Identificar os tubos de coleta (indivíduo fumante e
indivíduo não fumante)
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Procedimentos Procedimentos
Determinação da metemoglobina: Determinação da metemoglobina:
No tubo A:
Para cada voluntário, deverão ser identificados 2 tubos de ensaio Adicionar 100 μL do sangue coletado e 100 μL de saponina 1%
(tubo A e tubo B) Agitar para que ocorra a hemólise
Utilizar fita crepe e caneta para retroprojetor para a identificação Adicionar 6 mL da solução de trabalho e homogeneizar a mistura
Transferir a mistura obtida no tubo A para a cubeta do
espectrofotômetro e realizar a leitura em 630 nm
Utilizar a solução de trabalho como branco
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Procedimentos
No tubo B: Vídeo 03
Adicionar 300 μL da mistura do tubo A
Adicionar 3 mL da solução de trabalho
Homogeneizar a mistura
Transferir a mistura obtida no tubo B para a cubeta do
espectrofotômetro e realizar a leitura em 540 nm
Utilizar a solução de trabalho como branco
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Metemoglobina no sangue
Valores normais de metemoglobina: até 2%
Metemoglobina Índice biológico máximo permitido: 5%
no sangue
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Metemoglobina no sangue
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