GALERIE API 20E : semina,

lettura e interpretazione
 La galleria API 20 E

1- Presentazione della galleria

Galleria di 20 microtubi pronti all'uso per effettuare 23 test biochimici al fine di
di identificare bacilli Gram - appartenenti alla famiglia degli ENTEROBACTERIACEAE.

Cupule

Microtubo contenente il mezzo disidratato

1- GALERIE API 20E :
son semina
 La galleria API 20 E

1- Presentazione della galleria

Galleria di 20 microtubi pronti all'uso per eseguire 23 test biochimici al fine di
d’identificare bacilli Gram – appartenenti alla famiglia degli ENTEROBACTERIACEAE.

Cupole

Microtubo contenente il mezzo disidratato

La sospensione batterica introdotta nel tubo dissolve i substrati disidratati.

 Preparazione dell'inoculo per seminare la
galleria API 20 E
2- Preparazione dell'inoculo

1 sola colonia
su GO

isolamento Prelievo
di una stirpe pura
sul GNI
5 mL
5mL di acqua
di acqua distillata sterile
distillata sterile

Souche pura su GNI

 Insemina della galleria API
20E
3- Inoculazione della galleria API 20 E
Introdurre la sospensione batterica in ogni tubo con l'aiuto di una pipetta Pasteur.
sterile aperto, punta appoggiata all'interno e sul lato per evitare la formazione di
bolle

Per alcuni caratteri:

Riempire il tubo di sospensione poiRicoprire

Riempi di sospensione il tubo e la coppa olio di paraffina
Per i test : Per i test: ADH, LDC, ODC, H2S
CIT VPGEL URE
2- API GALLERIE 20E :
la lettura
2-1- I reattivi da aggiungere per la
lezione
 Dopo 24 ore di incubazione a 37°C, cupole nelle quali si
deve aggiungere dei reagenti
4- Lettura della galleria API 20 E

Cloruro
de fer III
Nafte-1-olo Naftil-1-
ammina
2-2- Aspetto dei risultati positivi e
negativi
 I primi 10 test
Test negativi
4- Lettura della galleria API 20 E

+ Reattivo + Réactif + Réactifs

TDA Kovacs VP 1 e 2
Test positivi dopo l'aggiunta dei reattivi utili

+ Reattivo + Reattivo + Reattivi

TDA Kovacs VP 1 e 2
 Gli ultimi 10 test

Test negativi

Test positivi

Après ajout des réactifs Nit 1 et Nit 2 : lecture de la NR (ici NR +)

2-3- Spiegazione dei risultati positivi
ONPG

Messa in evidenza
de labéta-galattosidasi

Substrat:ONPG

Reazione: ONPG + acqua

Galattosio + ortonitrofenolo
giallo
ADH, LDC, ODC
Messa in evidenza di:
l'arginina desaminasi
lisina decarbossilasi
ornitina decarbossilasi

Substrats:
- arginina (nella ADH),
- lisina (nell'LDC)
- ornitina (in ODC)

Reazioni: degradazioni che liberano

Rouge/Rose = +
Jaune/Orangé = - prodotti di base

Rivelatore: rosso di fenolo

Rosso/Arancione = +
Jaune = -
Citrato

Messa in evidenza della

degradazione del citrato come
unica fonte di carbonio.

Reazione: degradazione
consumando H+, quindi
responsabile di un'alcalinizzazione.

substrato: citrato

Rivelatore: BBT
H2S

Messa in evidenza della produzione

desolforare

sostratto: tiosolfato di sodio

Révélateur:Fe3+

Risultato positivo: presenza di un

precipitato nero di sulfuro di ferro
Urea

Messa in evidenza della presenza di una

ureasi

Substrato: urea

Reazione:urea + acqua CO2 + 2 NH3

dove alcalinizzazione.

Révélateur: Rosso di fenolo

Lezione:
attenzione un arancione chiaro sarà -
un arancione scuro sarà considerato come +
TDA

Mise en évidenced'unetryptophane
désaminasi

Sostrato: Triptofano

Prodotto ottenuto: Acido indol

piruvico

Rivelatore: -

Réactif ajouté: Cloride di ferro III

dando un prodotto marrone scuro in
presenza di acido indolpiruvico
Indole

Messa in evidenza di una

triptofanoasi

Substrat:Tryptophane

Produit:Indole

Rivelatore: -

Reattivo aggiunto:
Kovacs (o James)
Voges Proskauer

Messa in evidenza della produzione

d'acétoïne, di 2,3 butandiolo e
de butano dione

Sustrato: Piruvato

Rivelatore: -

Reagenti aggiunti:
VP1 e VP2
(1-naphtolo e KOH)
TAVOLO DI LETTURA DELLA GALLERIA MINIATURIZZATA API 20E
Lectura diretta o indiretta Risultato
Microtubo Substrat : Carattere ricercato Rivelatore Risultato +
Test (se necessario) -

ONPG = Ortho-
ONPG Nitro-Fenil- Beta Lezione diretta
galattosidasi
Galattoside
ADH Arginina Dihidrolasi dell'arginina
Lisine Decarbossilasi Rosso di Lezione diretta
LDC Lisina Ornitina Decarbossilasi
ODC Ornitina
fenolo

CIT Citrato Utilizzo del Lezione diretta

citrato BBT

Tiosolfato di
H2S Produzione di H2S Fe III Lezione diretta
sodio

Ureasi Rosso di Lezione diretta

URÉ Urea Fenolo
Lezione indiretta
Triptofano Aggiungere una goccia di reagente
TDA Triptofano désaminase cloruro di ferro III
Lezione indiretta
Tryptofananasi o Aggiungere una goccia di reattivo
IND Triptofano produzione di indolo Kovacs
produzione di acetoino Lezione indiretta
Piruvato de Aggiungere 1 goccia di VP1 e
VP (3-idrossibutanone
sodio VP2 Aspetta 10 minuti

gelatinasi Particelle di
Lezione diretta
GEL Gelatina
carbone

GLU a Substrato
ARA
Utilizzo di substrati
carbonio carboidrati (glucidi) BBT Lezione diretta
= BBT
zinogramma
(glucidi)
Lecture indiretta
NO2- / N2 Nitrati (NO3-) Nitrato riduttasi Aggiungi 1 goccia di NIT1 e
NIT2 e zinco eventualmente
 3- GALLERIE API 20E :
la sua interpretazione (identificazione della
souche)
Validazione e possibilità di interpretazione se:

– Cupule Glu +

– Ou 3 altre cupole almeno positive

Procedura di identificazione :
fornire la prova che il batterio
appartiene bene alla famiglia dei
Enterobacteriaceae (mostra che ha i)
7 caratteri che definiscono la famiglia
- identificare il genere, o addirittura la specie :
* approccio dicotomico, o utilizzo
di tabelle dei caratteri
* codifica API
* approccio probabilistico utilizzando un
software informatico
5- Identificazione del ceppo
Lettura dei risultati della galleria :

- + + + +

5 2 1 5 7 7 3 5 5
Risultati riportati sulla scheda di identificazione

Codice n°: 5 215 773 (55)

Fare riferimento al catalogo per identificare la ceppaia utilizzando il codice

5- Identificazione della ceppo (continuazione)
 Metodologia di identificazione probabilistica
(p340 DTK)
• Il nome del micro-organismo è ottenuto tramite un
calcolo della probabilità
• A ogni carattere di un micro-organismo dato
fa riferimento a una probabilità di essere + o -
• La probabilità che sia un taxon dato
corrisponde ai prodotti delle probabilità
attribuito a ciascun carattere (se + = % di
positività o se - =100%- % di positività)
Il software classifica tutti i risultati per dare
il o i taxon più probabili.
 tipicità

Indice di tipicità: confronto tra il profilo trovato e il profilo reale della

souche