BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Jeruk Lemon

1. Klasifikasi jeruk lemon

Menurut Nurlaely (2016), Klasifikasi botani tanaman jeruk lemon sebagai

berikut :

Regnum : Plantae

Divisio : Spermathophyta

Subdivisio : Angiospermae

Classis : Dicotylodeneae

Subclassis : Dialypetalae

Ordo : Rutales

Familia : Rutaceae

Genus : Citrus

Species : Citrus Limon (L.) Burm. f.

Gambar 1. Jeruk Lemon

(Sumber : Dokumentasi Pribadi)

Jeruk lemon merupakan pohon perdu, batang berduri panjang tetapi tidak

rapat, tegak, percabangan simpodial. Daun berwarna hijau dengan tepi rata,

tunggal, berseling, lonjong, ujung dan pangkal meruncing, panjang 7 – 8 cm, lebar

4 – 5 cm, tangkai silindris, permukaan licin. Kelopak bunga berbentuk bintang

dan berwarna hijau. Benang sari panjang sekitar 1,5 cm, kepala sari bentuk ginjal

berwarna kuning, tangkai putik silindris, panjang kurang lebih 1 cm, kepala putik

bulat berwarna kuning, mahkota lima helai yang berbentuk bintang, dan berwarna

putih keuningan (Indriani, Mulqie, dan Hazar, 2015). Buah jeruk lemon berkulit

kasar, berwarna kuning, berbentuk bulat telur dengan panjang 5 - 8 cm dan

dasarnya menonjol, tebal kulitnya 0,5 - 0,7 cm, bijinya kecil dengan bentuk

ovoid, dan banyaknya rata – rata 10 - 15 dan permukaan biji halus (Nurlaely,

2016).

3. Kandungan jeruk lemon

Buah jeruk lemon dikenal sebagai sumber vitamin C. Satu cangkir jus

lemon terdapat 55 g vitamin C atau lebih dari 70% dari kecukupan gizi yang

dianjurkan untuk wanita. Selain itu jeruk lemon mengandung potassium dan

beberapa jumlah kalsium dan zat besi. Selain itu juga mengandung protein, lemak,

fosfor, niasin, kalium, dan pektin (Susanto, 2016).

Setiap 100 g yang setara dengan dua buah jeruk lemon ukuran sedang

terdapat 29 kalori, 1,1 g protein, 0,3 g lemak, 2,9 g gula alami, dan 2,8 g serat.

Jeruk lemon memiliki kandungan utama gula dan asam sitrat. Kandungan jeruk

antara lain asam folat, vitamin (C, A, B1, dan P), dan mineral (kalium,

magnesium). Jeruk lemon juga mengandung bioflavonoid, asam dan minyak -

7
minyak volatil pada kulitnya, α-terpinen, α-pinen, β-pinen dan citral (Indriani,

Mulqie, dan Hazar, 2015). Perasan buah jeruk lemon mengandung banyak

senyawa bioaktif seperti asam sitrat, flavonoid, saponin, limonoid, tanin, dan

terpenoid. Senyawa bioaktif yang terkandung dalam jeruk lemon masing – masing

memiliki sifat antibakteri (Handayani, 2009).

a. Flavonoid

Flavonoid merupakan salah satu kelompok senyawa metabolit sekunder

yang paling banyak ditemukan di dalam jaringan tanaman. Kandungan flavonoid

pada sitrus memiliki aktivitas biologis yang luas,termasuk sebagai antibakteri,

antijamur, antidiabetes, antikanker, dan aktivitas antivirus. Flavonoid dapat

berfungsi sebagai antioksidan langsung dan menangkap radikal bebas, serta

memiliki kapasitas dalam memodulasi aktivitas enzim dan menghambat

proliferasi sel (Batubara, 2017). Flavonoid menyebabkan terganggunya fungsi

dinding sel bakteri sebagai pemberi bentuk sel dan melindungi sel dari lisis.

Senyawa ini merupakan antimikroba karena membentuk senyawa kompleks

dengan protein ekstraseluler, mengubah sifat fisik dan kimiawi sitoplasma, dan

mendenaturasi dinding sel bakteri dengan cara melalui ikatan hidrogen. Aktivitas

ini akan mengganggu fungsi permeabilitas selektif, fungsi pengangkutan aktif, dan

pengendalian susunan protein sehingga menyebabkan kematian pada bakteri.

Terganggunya dinding sel akan menyebabkan lisis pada sel (Ramadhinta, Nahzi,

dan Budiarti, 2016).

Selain itu, flavonoid memiliki aktivitas antibakteri melalui hambatan

fungsi DNA gyrase sehingga kemampuan replikasi bakteri dihambat. Senyawa ini

akan melakukan kontak dengan DNA pada inti sel bakteri. Adanya perbedaan

8
kepolaran antara lipid penyusun DNA dengan gugus alkohol pada senyawa

flavonoid menyebabkan kerusakan struktur lipid DNA bakteri sehingga bakteri

akan lisis dan mati (Aida, Suswati, dan Misnawi, 2016).

b. Tanin

Tanin merupakan senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri

dengan cara menghambat enzim reverse transkriptase dan DNA topoisomerase

yang berfungsi pada proses transkripsi dan replikasi, sehingga sel bakteri tidak

dapat terbentuk. Tanin juga memiliki aktivitas antibakteri yang berhubungan

dengan kemampuannya untuk menginaktifkan adhesin sel mikrobia,

menginaktifkan enzim, dan menggangu transport protein pada lapisan dalam sel

bakteri. Tanin juga mempunyai target pada polipeptida dinding sel sehingga

pembentukan dinding sel menjadi kurang sempurna. Hal ini menyebabkan sel

bakteri menjadi lisis karena tekanan osmotik maupun fisik sehingga sel bakteri

akan mati (Ngajow, Abidjulu, dan Kamu, 2013).

c. Terpenoid

Terpenoid merupakan turunan terpena atau senyawa-senyawa yang

strukturnya mirip terpena. Molekul terpenoid dapat mengandung gugus karboksil,

hidrosil, formil, atau gugus yang lain. Aktivitas antibakteri terpenoid diduga

melibatkan pemecahan membran oleh komponen – komponen lipofilik. Selain itu,

senyawa fenolik dan terpenoid memiliki target utama yaitu membran sitoplasma

yang mengacu pada sifat alamnya yang hidrofobik (Ngajow, Abidjulu, dan Kamu,

2013).

9
d. Saponin

Saponin adalah sekelompok glikosida tanaman yang dapat larut dalam air

dan dapat menempel pada steroid lipofilik (C27) atau triterpenoid (C30). Senyawa

ini memiliki struktur asimetri hidrofobikidrofi, yang menyebabkan senyawa ini

memiliki kemampuan untuk menurunkan tegangan permukaan dan bersifat seperti

sabun. Saponin ada pada seluruh tanaman dan ditemukan dengan konsentrasi

tinggi pada bagian-bagian tertentu yang dipengaruhi oleh varietas tanaman dan

pertumbuhan (Illing, Safitri dan Erfiana, 2017).

Mekanisme kerja saponin sebagai antibakteri adalah menurunkan tegangan

permukaan sel bakteri sehingga terjadi kebocoran sel bakteri dan mengakibatkan

keluarnya senyawa intraseluler. Saponin akan berdifusi melalui membran luar dan

dinding sel yang rentan, lalu mengikat membran sitoplasma dan mengganggu dan

mengurangi kestabilan sel bakteri. Hal ini menyebabkan sitoplasma bocor keluar

dari sel yang mengakibatkan kematian bakteri (Ngajow, Abidjulu, dan Kamu,

2013).

e. Minyak Atsiri

Minyak atsiri yang aktif sebagai antibakteri pada umumnya mengandung

gugus fungsi hidroksil (-OH) dan karbonil (Parwata dan Dewi, 2008). Minyak

atsiri terdiri atas berbagai senyawa yang mudah menguap. Salah satu komponen

minyak atsiri yang banyak dalam jeruk lemon yaitu limonene (±70%) (Indriani,

Mulqie, dan Hazar, 2015). Adanya limonoid pada spesies sitrus, yang dianggap

mampu melawan bakteri yang terisolasi secara klinis (Batubara, 2017).

Mekanisme kerja minyak atsiri dalam membunuh bakteri adalah dengan cara

mengubah permeabilitas membran sel, menghilangkan ion-ion dalam sel,

10
menghalangi proton-pump, dan menurunkan produksi ATP. Minyak atsiri bersifat

lipofilik yang dapat melewati dinding bakteri karena dinding bakteri terdiri atas

polisakarida, asam lemak, dan fosfolipid. Hal ini dapat mengakibatkan kerusakan

dinding sel sehingga dapat membunuh bakteri (Dewi, 2015).

f. Asam Organik

Kandungan utama perasan buah jeruk lemon adalah asam sitrat. Asam

sitrat merupakan asam organik yang terkandung paling banyak pada perasan buah

jeruk lemon yang mempunyai aktivitas antibakteri. Kandungan vitamin C dan

asam sitrat membuat derajat keasaman (pH) perasan buah jeruk lemon menjadi

asam. pH asam dapat mengakibatkan pH internal sel bakteri menurun sehingga

dapat mengganggu aktivitas sel bakteri dan pertumbuhan bakteri menjadi

terhambat (Berti, 2015). Asam sitrat sebesar 7-7,6% yang dapat mendenaturasi

protein sel bakteri dengan cara mengacaukan jembatan garam dengan adanya

muatan isotonik. Mekanisme kerja dari senyawa tersebut yaitu dengan merusak

dinding sel bakteri dan masuk ke dalam inti sel bakteri, mengganggu proses

respirasi sel menghambat aktivitas enzim bakteri, dan menekan terjemahan dari

regulasi produk gen tertentu (Batubara, 2017).

4. Manfaat jeruk lemon

Jeruk lemon merupakan sumber vitamin C dan kalsium yang sangat baik.

Fungsi utama Vitamin C adalah berperan dalam sintesis kolagen, proteoglikan,

dan zat organik lainnya misalnya pada tulang, gigi, dan endotel kapiler. Selain itu,

jeruk lemon juga bisa digunakan sebagai cooling drink jika mengalami demam.

Jeruk lemon juga merupakan astringent yang bagus dan bisa digunakan untuk

lotion dalam kasus sunburn. Selain digunakan untuk kesehatan, minyak dari kulit

11
jeruk lemon dapat digunakan untuk perasa dan aroma, seperti pada deterjen,

shampoo, sabun, dan parfum. Jeruk lemon juga dapat mengubah warna gigi

menjadi lebih putih karena mengandung asam malat. Asam malat adalah

dikarboksilat yang mempunyai kemampuan memutihkan gigi dengan cara

mengoksidasi permukaan email gigi (Wijaya, 2008). Di Afrika Selatan, jus lemon

telah digunakan dalam pengobatan oral thrush pada pasien HIV/AIDS

(Damayanti, 2014).

Jeruk lemon juga bermanfaat dalam kesehatan seperti sebagai antikanker

karena mengandung antioksidan, mengatasi masalah pencernaan dan membantu

memperbaiki saluran pencernaan, mampu mencegah infeksi, pembersih racun

alami, menurunkan berat badan, baik bagi jantung sehat dan mencegah terjadinya

penyakit jantung, dan baik untuk kecantikan (Susanto, 2016). Selain itu, jeruk

lemon dapat berfungsi sebagai pembersih racun alami, memperindah kulit,

mencegah sepsis, dan membantu menangkal radikal bebas (Nuraini, 2017).

Masyarakat Mesir kuno percaya bahwa mengonsumsi lemon sangat

penting untuk melindungi mereka dari racun dan dalam buku “You Are What You

Eat”, Dr. Gillian McKeith juga menjelaskan, segelas air hangat dengan perasan

lemon di pagi hari setelah bangun tidur dapat membersihkan berbagai lendir tidak

berguna dalam tubuh sehari sebelumnya (Susanto, 2016). Jeruk lemon juga

digunakan sebagai salah satu bahan dari produk kecantikan wajah khusus untuk

kulit berminyak dan berjerawat seperti pembersih wajah antiacne, penyegar,

bahan facial untuk wajah, facial wash maupun yang lainnya. Hal tersebut

dikarenakan jeruk lemon mempunyai khasiat sebagai antioksidan, mencegah

penuaan dini, anti jerawat, mencerahkan wajah, dan menghilangkan minyak di

12
wajah (Hasan, Rasyid, dan Ririn, 2017). Sebagai obat jerawat alami, jeruk lemon

bisa membantu mengurangi iritasi dan pembengkakan kulit dan menetralisir rasa

sakit akibat jerawat sehingga membantu menyembuhkan sekaligus memperhalus

kulit (Mayuna, 2013).

B. Bakteri Propionibacterium acnes

1. Klasifikasi bakteri Propionibacterium acnes

Menurut Putri (2010), bakteri Propionibacterium acnes memiliki

klasifikasi sebagai berikut :

Kingdom : Bacteria

Phylum : Actinobacteria

Class : Actinobacteridae

Order : Actinomycetales

Family : Propionibacteriaceae

Genus : Propionibacterium

Spesies : Propionibacterium acnes

Gambar 2. Morfologi Bakteri Propionibacterium acnes

(Sumber : Abate, 2013)

13
2. Morfologi dan fisiologi bakteri Propionibacterium acnes

Propionibacterium acnes adalah flora normal kulit terutama di wajah yang

tergolong dalam kelompok bakteri Corynebacteri. Propionibacterium acnes

merupakan bakteri anaerob yang tumbuh dengan lambat dan bersifat gram positif

(Radji, 2010). Bakteri ini berperan pada patogenesis jerawat yang dapat

menyebabkan inflamasi. Inflamasi timbul karena perusakan stratum corneum dan

stratum germinativum dengan mensekresikan bahan kimia yang menghancurkan

dinding pori (Saraswati, 2015).

Bentuk selnya batang dan non motil. Bakteri ini memiliki ukuran yang

kecil dngan lebar 0,5 µm dan panjang 1,5 µm. Pada pewarnaan gram, spesies ini

sangat pleomorfik, menunjukkan ujung yang melengkung, berbentuk runcing,

bentuk panjang dengan pewarnaan yang tidak rata seperti manik – manik dan

terkadang berbentuk kokoid atau sferis. Bakteri ini dapat tumbuh di udara dan

tidak menghasilkan endospora serta bakteri ini tipikal bakteri anaerob gram positif

yang toleran terhadap udara (Indriani, Mulqie, dan Hazar, 2015).

Meskipun organisme ini termasuk ke dalam organisme anaerob,

Propionibacterium acnes dapat mentoleransi saturasi oksigen hingga saturasinya

mencapai 100% dengan laju pertumbuhan organisme yang menurun. Pada in

vitro, organisme ini mampu bertahan selama 8 bulan dalam keadaan anaerob

tanpa subkultur, menunjukkan bahwa Propionibacterium acnes juga dapat

bertahan pada jaringan – jaringan tubuh manusiadalam keadaan oksidasi yang

rendah. Propionibacterium acnes memiliki kemampuan resistensi terhadap

fagositosis dan dapat bertahan di dalam makrofag. Resisten terhadap fagositosis

14
disebabkan struktur dinding sel organisme yang kompleks dan memiliki lapisan

fibrilar pada permukaannya (Oktavia, 2014).

3. Patogenesis bakteri Propionibacterium acnes

Patogenesis Propionibacterium acnes yang utama terfokus pada

kemampuan organisme ini untuk memproduksi produk eksoseluler bioaktif dan

interaksinya dengan system imun. Propionibacterium acnes memiliki komponen

yang bersifat kemoatraktan (penarikan leukosit oleh suatu kemotaktik factor) dan

organisme ini sendiri dapat mengaktifkan komplemen melalui pathway klasik

maupun alternatif yang menyebabkan pembentukan factor kemotaktin C5-

dependen (Beylot dkk, 2013).

Propionibacterium acnes ialah bakteri agen utama etiologi inflamasi

jerawat. Ia merangsang pelepasan IL-1, IL-8, TNF-α dan mengaktifkan sistem

komplemen. Propionibacterium acnes merusak stratum corneum dan germinat

pada kulit. Bakteri Propionibacterium acnes menggunakan sebum yang

diproduksi di folikel sebagai sumber utama makanan. Dengan menggunakan

enzim khusus, bakteri ini menghasilkan asam lemak bebas melalui hidrolisis

trigliserida kelenjar sebasea oleh lipasenya. Asam lemak ini dapat mengakibatkan

inflamasi jaringan ketika berhubungan dengan sistem imun dan mendukung

terjadinya jerawat (Khan, Assi, dan Moore, 2009). Selain itu, Propionibacterium

acnes menghasilkan enzim ekstraseluler, seperti protease, yang dapat

berpartisipasi dalam inflamasi oleh kerusakan matriks dan pelepasan proteolitik

oleh keratinosit folikel. Bakteri ini dapat juga menyebabkan blepharitis dan

endophthalmitis kronis bahkan sering sekali diikuti dengan operasi atau

pembedahan intraokular. Genom dari bakteri ini dirangkai dan penelitian dari

15
genom bakteri ini menunjukkan beberapa gen yang dapat menghasilkan enzim-

enzim untuk menurunkan kondisi kulit dan proteinprotein yang mungkin

immunogenik (sistem kekebalan aktif) (Rosyad, 2009).

C. Antimikroba dan Mekanisme Kerja Antimikroba

1. Definisi antimikroba

Antimikroba adalah obat pembasmi mikroba khususnya mikroba yang

merugikan manusia. Obat antimikroba yang ideal memperlihatkan toksisitas

selektif artinya obat atau zat tersebut harus bersifat toksik terhadap

mikroorganisme penyebab penyakit tetapi tidak toksik terhadap jasad inang

atau hospes. Berdasarkan jenis mikroorganisme yang dimatikan atau dihambat

pertumbuhannya, antimikroba terbagi menjadi antibakteri, antifungi, antivirus,

dan antiprotozoa (Aziz, 2010). Obat - obat atau bahan yang digunakan untuk

memberantas infeksi mikroba pada manusia termasuk diantaranya antibiotika,

antiseptik, disenfektasia, dan preservatif (Hidayah, 2016).

2. Sifat antimikroba

Menurut Damayanti (2014) sifat antimikroba terdiri dari :

a. Bakteriostatik yaitu menghambat atau menghentikan pertumbuhan bakteri

sehingga bakteri yang bersangkutan menjadi stationer dan tidak terjadi

multiplikasi atau perkembangbiakan. Antimikroba yang termasuk dalam

kelompok ini adalah sulfonamida, tetrasiklin, kloramfenikol, enteromisin,

novobiosin, para amino salisilat, linkomisin, kindamisin, dan nitrofuratoin

(dalam suasana basa dengan konsentrasi rendah).

b. Bakterisida yaitu membunuh bakteri. Antimikroba yang masuk kedalam

kelompok ini adalah penisilin, sefalosporin, streptomisin, eritromisin,

16
 neomisin, kanamisin, gentamisin, novobiosin, polimiksin, kolistin,

kotrimokazol, isoniasid, vankomisin, basitrasin, dan nitrofurantoin (dalam

suasana asam dengan konsentrasi tinggi).

3. Mekanisme kerja antimikroba

Menurut Damayanti (2014) berdasarkan mekanisme kerjanya, antimikroba

dibagi dalam lima kelompok yaitu :

a. Menghambat metabolisme sel

Asam folat dibutuhkan oleh bakteri untuk kelangsungan hidupnya. Asam

folat tersebut didapatkan dari asam para amino benzoat (PABA) yang kemudian

disintesis sendiri oleh bakteri untuk kebutuhan hidupnya. Untuk mengganggu

kehidupan dari bakteri, sulfonamid yang memiliki kemiripan struktur dengan

PABA akan berkompetisi untuk ikut dalam pembentukan asam folat, sehingga

terbentuk analog asam folat yang non fungsional. Akibatnya, kehidupan bakteri

akan terganggu. Antibakteri yang termasuk dalam kelompok ini adalah

sulfonamid, trimetoprim, asam p-aminosalisilat (PAS), dan sulfon. Dari

mekanisme kerja ini diperoleh efek bakteriostatik.

b. Menghambat sintesis dinding sel

Dinding sel bakteri memiliki tekanan osmotik internal yang tinggi dan

berfungsi untuk mempertahankan bantuk dan ukuran sel. Maka ketika terjadi

kerusakan pada dinding sel, ini akan menyebabkan terjadinya lisis. Mekanisme

kerja ini diperoleh efek bakterisidal. Obat yang termasuk dalam kelompok ini

adalah penisilin, sefalosporin, bacitrasin, vankomisin, dan sikloserin.

17
c. Mengganggu keutuhan membran sel

Membran sitoplasma memiliki peranan yang penting bagi sel, karena

berfungsi sebagai sawar permeabilitas yang selektif, melakukan transport aktif,

dan mengontrol komposisi dalam sel. Ketika membrane sitoplasma sel mengalami

kerusakan, maka menyebabkan keluarnya makromolekul seperti protein, asam

nukleat, nukleotida, dan ion – ion penting lain. Mekanisme kerja ini diperoleh

efek bakterisidal. Obat yang termasuk kelompok ini adalah polimiksin, golongan

polien serta berbagai antibakteri kemoteraupetik, seperti antiseptik surface active

agents.

d. Menghambat sintesis protein sel

Bakteri membutuhkan protein untuk kelangsungan hidupnya. Sintesis

protein sel berlangsung di dalam ribosom dengan bantuan mRNA dan tRNA.

Bakteri memiliki ribosom yang terdiri dari 2 subunit, 30S dan 50S. Kemudian

kedua komponen tersebut menyatu pada pangkal rantai mRNA menjadi ribosom

70S agar dapat digunakan untuk sintetis protein. Kerusakan atau penghambatan

pada proses tersebut menyebabkan gangguan pada protein sel. Obat yang

termasuk dalam kelompok ini adalah aminoglikosid, makrolid, linkomisin,

tetrasiklin, dan kloramfenikol.

e. Menghambat sintesis asam nukleat sel

Antibakteri yang termasuk dalam kelompok ini adalah rifampisin dan

golongan kuinolon. Rifampisin berikatan dengan enzim polimerase-RNA

sehingga menghambat sintesis RNA dan DNA oleh enzim tersebut. Golongan

kuinolon menghambat anzim DNA gyrase pada kuman yang fungsinya menata

18
kromosom yang sangat panjang menjadi bentuk spiral sehingga muat dalam sel

kuman yang kecil.

D. Uji Aktivitas Antimikroba

Uji aktivitas antimikroba digunakan untuk mengukur kemampuan zat

antibakteri untuk menghambat pertumbuhan bakteri in vitro. Kemampuan ini

dapat diperkiran melalui metode dilusi atau difusi (Vandepitte dkk, 2010).

Potensi dari suatu antimikroba diperkirakan dengan membandingkan

penghambatan pertumbuhan terhadap mikroorganisme yang sensitif dari hasil

penghambatan suatu konsentrasi antibiotik uji dibandingkan dengan antibiotik

referensi (Aziz, 2010). Meetode uji antimikroba terdiri dari :

1. Metode difusi

Cakram kertas yang telah diresapi sejumlah tertentu antimikroba,

ditempatkan pada media yang telah ditanami organisme yang akan diuji secara

merata. Tingginya konsentrasi dari zat antimikroba yang terbentuk oleh difusi dari

cakram dan pertumbuhan organisme uji dihambat penyebarannya sepanjang difusi

antimikroba (terbentuk zona jernih disekitar cakram), sehingga bakteri tersebut

merupakan bakteri yang sensitif terhadap antimikroba (Vandepitte dkk, 2010).

Media difusi menggunakan kertas disk yang berisi antibiotik dan telah diketahui

konsentrasinya (Aziz, 2010). Pada metode difusi, media yang dipakai adalah

Mueller Hinton Agar. Ada beberapa cara pada metode difusi, yaitu:

a. Disk diffusion (Kirby-Bauer)

Metode ini digunakan untuk menentukan aktivitas agen antimikroba.

Cakram kertas saring yang berisi jumlah obat yang terukur ditempatkan pada

permukaan media padat yang permukaannya telah diinokulasikan organisme uji.

19
Setelah inkubasi, diameter zona hambat yang jelas di sekitar cakram ditentukan

sebagai ukuran daya hambat obat melawan jenis organisme uji tertentu. Metode

ini subjektif pada berbagai faktor fisik dan kimia selain interaksi sederhana antara

obat dan organisme (misalnya sifat medium, diffusibility, ukuran molekul, dan

stabilitas obat) (Jawetz, Melnick dan Adelberg’s, 2013).

Dari metode ini terdapat dua zona yang akan terbentuk. Zona hambat

dibagi menjadi zona radikal dan iradikal. Zona radikal merupakan suatu daerah di

sekitar cakram yang sama sekali tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri.

Potensi antibiotik diukur dengan mengukur diameter zona radikal. Sementara itu,

zona iradikal adalah suatu daerah di sekitar cakram yang menunjukkan

pertumbuhan bakteri dihambat oleh antibiotik tersebut. Di zona iradikal ini akan

terlihat adanya pertumbuhan kurang subur atau lebih jarang dibanding dengan

daerah di luar pengaruh antibiotik tersebut (Aziz, 2010).

b. Sumuran

Serupa dengan disk diffusion, dimana dibuat sumur pada media agar

yang telah ditanami dengan mikroorganisme dan pada sumur tersebut diberi

antimikroba yang akan diuji (Aziz, 2010).

2. Metode dilusi

Metode dilusi terdiri dari dua teknik pengerjaan, yaitu teknik dilusi

perbenihan cair dan teknik dilusi agar yang bertujuan untuk penentuan aktivitas

antimikroba secara kuantitatif. Antimikroba dilarutkan kedalam media agar atau

kaldu, yang kemudian diinokulasi dengan bakteri yang akan diuji. Setelah

diinkubasi semalam, konsentrasi terendah yang dapat menghambat pertumbuhan

bakteri disebut dengan konsentrasi hambatan minimum / KHM (minimal

20
inhibitory concentration / MIC) zat tersebut. Nilai MIC dapat pula dibandingkan

dengan konsentrasi obat yang diketahui tercapai dalam serum dan cairan tubuh

lainnya (Vandepitte dkk, 2010). Metode dilusi dibedakan menjadi dua yaitu :

a. Metode dilusi cair

Metode ini digunakan untuk mengukur Konsentrasi Hambat Minimum

(KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM). Cara yang dilakukan adalah dengan

membuat seri pengenceran agen antibakteri pada medium cair yang ditambahkan

dengan bakteri uji. Larutan uji agen antibakteri pada kadar terkecil yang terlihat

jernih tanpa adanya pertumbuhan bakteri uji ditetapkan sebagai KHM. Larutan

yang ditetapkan sebagai KHM tersebut selanjutnya dikultur ulang pada media cair

tanpa penambahan bakteri uji ataupun agen antibakteri, dan diinkubasi selama 18

– 24 jam. Media cair yang tetap terlihat jernih setelah diinkubasi ditetapkan

sebagai KBM (Prayoga, 2013).

b. Metode dilusi padat

Metode ini serupa dengan metode dilusi cair namun menggunakan media

padat. Pada dilusi padat tiap konsentrasi obat dicampurkan dengan media agar lalu

ditanami bakteri dan diinkubasi. Keuntungan metode ini adalah satu konsentrasi

agen antibakteri yang diuji dapat digunakan untuk menguji beberapa bakteri uji

(Prayoga, 2013).

Penentuan daya hambat zat antibakteri pada suatu bahan alam dapat

ditentukan dengan cara melihat ukuran dari zona hambat yang dihasilkan dan

dikategorikan pada Tabel 1 berikut ini.

21
 Tabel 1
Kategori Daya Hambat Zat Antibakteri

Diameter Zona Hambat Kategori Daya Hambat

≥ 21 mm Sangat Kuat

11 – 20 mm Kuat

6 – 10 mm Sedang

≤ 5 mm Lemah

Sumber : Yanti dan Mitika (2017)

E. Faktor – Faktor Yang Memengaruhi Aktivitas Antimikroba

Menurut Vandepitte dkk (2010) terdapat beberapa faktor yang

memengaruhi aktivitas antimikroba, berikut merupakan hal – hal yang harus

dipertimbangkan karena akan memengaruhi hasil pemeriksaan yaitu :

1. Kepekatan inokulum

Jika inokulum terlalu encer, zona hambatan akan menjadi lebih lebar

walaupun kepekatan organismenya tidak berubah. Galur yang relatif resisten

mungkin dilaporkan sebagai sensitif. Sebaliknya, jika inokulum terlalu pekat,

ukuran zona akan menyempit dan galur yang sensitif dapat dilaporkan sebagai

resisten. Biasanya hasil optimal didapat dengan ukuran inokulum yang

menghasilkan pertumbuhan yang hampir menyatu (konfluen).

2. Waktu pemasangan cakram

Jika setelah ditanami dengan galur uji, lempeng agar dibiarkan pada suhu

ruang lebih lama dari waktu baku, perkembangbiakan inokulum dapat terjadi

sebelum cakram dipasang. Ini menyebabkan zona diameter mengecil dan dapat

menyebabkan suatu galur sensitif dilaporkan resisten.

22
3. Suhu inkubasi

Uji kepekaan biasanya diinkubasi pada suhu 35oC unruk pertumbuhan

optimal. Jika suhu diturunkan, waktu yang dibutuhkan untuk pertumbuhan efektif

akan memanjang dan dihasilkan zona yang lebih besar. Jika galur Staphylococcus

aureus yang heteroresisten diuji dengan metisilin (oksasilin), bagian yang resisten

dapat dapat dideteksi pada suhu 35oC atau lebih rendah, koloni yang resisten

tumbuh di dalam zona hambatan. Koloni – koloni yang resisten dapat dilihat lebih

mudah bila agar dibiarkan selama beberapa jam pada suhu ruang sebelum

pembacaan hasil. Koloni – koloni tersebut harus selalu diidentifikasi untuk

memeriksa apakaha merupakan pencemar.

4. Waktu inkubasi

Kebanyakan teknik menerapkan masa inkubasi antara 16 – 18 jam.

Walaupun demikian, pada keadaan darurat, laporan pendahuluan dapat dibuat

setelah 6 jam. Ini tidak dianjurkan secara rutin dan hasil – hasilnya harus selalu

dipastikan setelah masa inkubasi konvensional.

5. Ukuran lempeng, ketebalan media agar, dan pengaturan jarak cakram

Uji kepekaan biasanya dikerjakan menggunakan cawan petri ukuran 9 – 10

cm dan tidak lebih dari 6 atau 7 cakram antimikroba pada tiap lempeng agar. Jika

jumlah antimikroba yang harus diuji lebih banyak, lebih disukai menggunakan

dua lempeng atau satu lempeng agar berdiameter 14 cm. Zona hambatan yang

sangat besar mungkin terbentuk pada media yang sangat tipis, dan sebaliknya

berlaku untuk media yang tebal. Perubahan kecil dalam ketebalan lapisan agar

efeknyadapat diabaikan. Pengaturan jarak cakram yang tepat sangat penting untuk

23
mencegah tumpang tindihnya zona hambatan deformasi di dekat tepi – tepi

lempeng.

6. Potensi cakram antimikroba

Diameter zona hambatan terkait dengan jumlah obat dalam cakram. Jika

potensi obat berkurang akibat rusak selama penyimpanan, zona hambatan akan

menunjukkan pengurangan ukuran yang sesuai.

7. Komposisi media

Media memengaruhi ukuran zona melalui efeknya terhadap kecepatan

pertumbuhan organisme, kecepatan difusi obat antimikroba, dan aktivitas obat.

Penggunaan media harus sesuai dengan metode tersebut.

F. Antibiotik Kloramfenikol

Antibiotik ialah suatu bahan kimia yang dikeluarkan oleh jasad renik atau

hasil sintesis atau semisintesis yang mempunyai struktur yang sama dan zat ini

dapat merintangi atau memusnahkan jasad renik yang lainnya. Antibiotik dibagi

menjadi dua golongan berdasar kegiatannya yaitu antibiotik yang memiliki

kegiatan luas (Broad Spectrum), yaitu antibiotik yang dapat mematikan gram

positif dan bakteri gram negatif. Antibiotik jenis ini diharapkan dapat mematikan

sebagian besar bakteri, termasuk virus tertentu dan protozoa. Tetrasiklin dan

derivatnya, kloramfenikol serta ampisillin merupakan golongan broad spectrum.

Golongan kedua adalah antibiotik yang memiliki kegiatan sempit (Narrow

spectrum). Antibiotik golongan ini hanya aktif terhadap beberapa jenis bakteri.

penicillin, streptomisin, neomisin, basitrasina (Wasitaningrum, 2009).

Antibiotik kloramfenikol atau kloramisetin dihasilkan oleh jamur

Streptomyces venezuelae. Kloramfenikol sukar larut dalam air tetapi mudah larut

24
dalam metanol, etanol, etil asetat, dan aseton; serta tidak larut dalam benzena

(Wasitaningrum, 2009). Kloramfenikol adalah antibiotik bakteriostatik

berspektrum luas yang aktif melawan organisme aerob maupun anaerob gram

positif dan gram negatif. Mekanisme kerja antibiotik ini melalui penghambatan

sintesis protein mikroba. Kloramfenikol berikatan dengan subunit 50S ribosom.

Kloramfenikol menghambat ikatan asam amino baru pada rantai peptide yang

memanjang karena kloramfenikol menghambat enzim peptidil transferase.

Kloramfenikol bersifat bakteriostatik dan bakteri bias tumbuh lagi jika pengaruh

obat dihilangkan. Mikroorganisme resisten terhadap kloramfenikol menghasilkan

enzim kloramfenikol asetil transferase yang merusak aktivitas obat. Produksi

enzim ini biasanya di bawah kontrol plasmid (Jawetz, Melnick dan Adelberg’s,

2013).

25