Protokol Validasi

Metode Analisis Serbuk

Ekstrak Panax ginseng
dengan Metode KCKT

PKPA UNIVERSITAS SURABAYA

Bimbingan: Lettu CKM Elni Fitri, [Link]., [Link]., Apt
[Kelompok 6] :
Azfan Nahiyyah - 114221531
Deny Wilson Amanda Sitorus - 114221532
Tasya Agustina L - 114221565
Rani Febriyanti Fajri - 114221566
Aulia Rahmatilah - 114221537
Devon Ezra Lee - 114221604

Start?
Serbuk Ekstrak Panax ginseng

Dibuat dari Ginseng Asia yang melalui

maserasi, perkolasi, atau kedua proses yang
dilakukan pada suhu kamar dengan pelarut
yang sesuai. Rasio bahan tanaman mentah
awal untuk Ekstrak Ginseng Asia Serbuk
adalah antara 3:1 dan 7:1. Ini mengandung
tidak kurang dari 3,0% dari ginsenosides
Rg1, Re, Rb1, Rc, Rb2, dan Rd.
 Validasi
Validasi merupakan suatu program terdokumentasi yang memberikan
suatu kepastian tingkat tinggi bahwa suatu proses, metode atau
sistem tertentu secara konsisten akan memberikan suatu hasil yang
memenuhi kriteria keberterimaan yang telah ditentukan sebelumnya.
 Validasi Metode Analisa
Suatu tindakan penilaian terhadap parameter tertentu,
berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan bahwa
parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya.

Tujuan :
Untuk menjamin bahwa metode analisis yang digunakan mampu
memberikan hasil yang cermat dan handal hingga dapat dipercaya.
Parameter Validasi

Sumber: Farmakope Indonesia VI

Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi
Fase gerak Larutan Uji

Tekanan tinggi Injeksi

Kolom (Fase Diam)

Kepolaran

Pemisahan
Mekanisme KCKT
 Tahapan Penyusunan
Protokol Validasi Metode Analisa

1. Kebijakan validasi;
2. Struktur organisasi kegiatan validasi;
3. Ringkasan fasilitas, sistem, peralatan dan proses yang akan divalidasi;
4. Format dokumen: format protokol dan laporan validasi,
5. Perencanaan dan jadwal pelaksanaan;
6. Pengendalian perubahan; dan
7. Acuan dokumen yang digunakan.
 Protokol Validasi Metode Analisis
Serbuk Ekstrak Ginseng Panax dengan Metode KCKT

Protokol : panduan untuk melakukan validasi proses yang meliputi pengawasan parameter kritis
pembuatan, pengambilan sampel yang tepat dan pengujian selama pengolahan
 Parameter Pengujian
SPESIFITIAS AKURASI

UJI KESESUAIAN
PRESISI
SISTEM

LINEARITAS DAN
ROBUSTNESS RENTANG
 Alat dan Bahan
ALAT BAHAN

HPLC Mikropipet 0,1 mL dan 0,2 Reference Standart

Kolom penjaga: L1; mL Ekstrak Panax ginseng
4.6-mm × 2.0-cm Timbangan Analitik Bahan baku Ekstrak
Kolom analitik: L1; 4.6 Botol timbang Panax Ginseng
mm × 15 cm; 3-µm Corong kaca Fase gerak yaitu air dan
Detektor lampu UV Batang pengaduk acetonitril-air (4:1)
203 nm Gelas ukur 10 ml Diluen alkohol-air (4:6)
Sonikator Labu Ukur 10 ml Membrane filter 0,45 µm
Kertas saring Pipet volume 0,5 mL dan 1 Minisart Syringe filter
mL 0,45 µm
 Tahap Awal

Lakukan Lakukan
Lakukan verifikasi status verifikasi
verifikasi kualifikasi dan pelatihan
dokumen yang kalibrasi dari personel yang
terkait dengan semua peralatan terkait dengan
validasi yang dipakai pelaksanaan
validasi
 Preparasi Kerja

Fasa Diam : Kolom L1, C18, 4.6

01 mm × 15 cm; 3-µm
Fasa Gerak : air dan asetonitril:air
02 (4:1)

Kecepatan Aliran : 1,5 ml/menit

03
Detektor : UV λ 203 nm
04
Volume yang diinjeksikan : 20 µl
05
PEMBUATAN FASE GERAK

Buat campuran
A B
asetonitril-air
Purified water
(4:1) sebanyak
500 ml

Disaring Disaring
menggunakan menggunakan
membran filter membran filter
PTFE 0,45 µm RC selulosa 0,45
µm
 Pembuatan larutan standart induk

Timbang standart Larutkan kedalam campuran

reference ekstrak kering pelarut alkohol-air (4:6) Disonikasi selama 10 menit
Panax Ginseng dengan 4 ml alkohol dan 6 ml ad homogen
air dalam labu ukur 10 ml
sebanyak 2400 mg

Disaring menggunakan
Disapatkan konsentrasi 240
membran RC selulosa 0,45
mg/ml (240.000 ppm)
µm
Pipet 1 ml
larutan Pembuatan Larutan
induk
Standart 100%

Kocok ad Saring
Tambahkan Konsentrasi
homogen dengan filter
pelarut ad didapatkan
di labu RC selulosa
10 ml 24 mg/ml
ukur 0,45 µm
 Pembuatan Larutan Uji Induk

Larutkan kedalam campuran

Timbang bahan baku ekstrak
pelarut alkohol-air (4:6) Disonikasi selama 10 menit
kering Panax Ginseng
dengan 4 ml alkohol dan 6 ml ad homogen
sebanyak 2400 mg
air dalam labu ukur 10 ml

Disaring menggunakan
Disapatkan konsentrasi 240
membran RC selulosa 0,45
mg/ml (240.000 ppm)
µm
 Pipet 1 ml
larutan
Pembuatan Larutan
induk Uji 100%

Kocok ad Saring Konsentrasi

Tambahkan
homogen dengan filter didapatkan
pelarut ad
di labu RC selulosa 24 mg/ml
10 ml
ukur 0,45 µm
 Uji Kesesuaian Sistem

Suntikan larutan standar

Amati respon pada panjang

Hitung RSD dari hasilnya

sebanyak 6 kali gelombang 203 nm

Amati angka lempeng

Amati faktor ikutan Amati waktu retensi relatif
teoritis dari kolom
Kriteria penerimaan ≤ 2 Kriteria penerimaan ≤ 2
Kriteria penerimaan ≥ 1000
 Spesifisitas

Suntikkan larutan standar, larutan sampel, dan Amati pada panjang

larutan blanko ke sistem KCKT gelombang 203nm

Kriteria penerimaan: larutan sampel memberikan waktu retensi yang

sama dengan larutan standar

Akurasi

Buat larutan uji dengan Suntikkan masing-masing Amati pada panjang

kadar 80%, 100%, 120% konsentrasi sebanyak 3x gelombang 203nm

Kriteria penerimaan:
Perolehan kembali : 98-102%
RSD dari semua konsentrasi : ≤2%
 Presisi
Ripitabilitas

Buat 10 sampel masing-masing larutkan dan encerkan dengan Pipet 1ml larutan, tambahkan
dengan menimbang 2400 mg pelarut hingga 10ml, kocok pelarut hingga 10mL, kocok
Panax Ginseng Powdered hingga homogen hingga homogen

Periksa larutan sampel dan larutan Buat larutan Saring larutan dengan
standar pada panjang gelombang 203 nm standar 100% membran filter 0,45 µm

Kriteria penerimaan: RSD ≤ 2%

Presisi Antara

Lakukan pengujian diatas oleh 2 orang analis

yang berbeda dan/atau dihari yang bebeda
Kriteria penerimaan: RSD ≤2%
 Linieritas dan Rentang

Buat seri larutan sampel dengan konsentrasi

Encerkan dengan pelarut
70%, 80%, 90%, 100%, 110 %, 120%, dan 130%
sampai 100mL
dengan memipet sejumlah larutan induk

Buat garis linieritasnya, hitung Ukur 7 seri larutan tersebut dengan

slop dan regresi liniernya KCKT, panjang gelombang 203 nm

Kriteria penerimaan: r2 ≥ 0,999

 Robustness

Lakukan pemeriksaan larutan uji

Suntikkan sebanyak 3 kali,
(100%) dengan mengubah
catat respon pada panjang
kecepatan aliran menjadi 1,47
gelombang 203 nm
ml/menit dan 1,53 ml/menit

Kriteria penerimaan:
Perolehan kembali : 98-102%
RSD dari semua konsentrasi : ≤2%
 Daftar Pustaka:
Farmakope Indonesia VI
POPP Tahun 2013 Jilid 1
USP edisi 43
CPOB 2018