LA RÉPLICATION
Objectifs
Réplication et réparation du DNA
•Définir les termes : réplication, réparation.
•Décrire les différentes réactions catalysées par
les DNA polymérases.
•Décrire un exemple de mécanisme de réparation
des mésappariements.
• Donner un exemple de réparation du DNA lésé.
Définition
Réplication
Synthèse d’ADN qui reproduit exactement le génome
d’une cellule au cours du cycle cellulaire afin de
préparer la division de cette cellule
Au cours de la vie cellulaire (cycle cellulaire),
le DNA doit être dédoublé pour que chaque cellule
fille reçoive un génome complet dans son noyau.
30h
29h
Phase G2
Mitose Phase G1
20h
Phase S
15h
Synthèse durant à la phase S grâce à la DNA-
polymérase δ et α.
Durant 30h
Phase G1 (génome étant diploïde)
•Chaque gène est représenté en 2 exemplaires.
•Transcription des gènes en ARNm par le RNA polymerase
•Traduction de l’ARNm en protéines
Phase S
•Recopie en double de l’ DNA de chaque chromosome
par le DNA polymerase (pdt 8 heures)
Phase G2
•Chaque gène est représenté en 4 exemplaires.
•Transcription des gènes en ARNm par le RNA polymerase
•Traduction de l’ARNm en protéines
La mitose (Division cellulaire)
•Naissance de deux cellules filles.
Chacune recevra une des copies identiques du DNA de
chaque chromosome et chaque gène y sera représenté
en 2 exemplaires.
Réplication semi-conservative
Les 2 brins du DNA parental
servent de modèle pour la synthèse
d’un nouveau brin (séparation à
chaque cycle)
A la 1ère génération, un brin de
chaque double hélice provient de
la cellule-mère.
A la 2ème génération il n’existe plus que deux brins de
DNA de la cellule-mère pour quatre doubles hélices, etc.
Synthèse et hydrolyse du DNA
(cf cours ADN)
Les enzymes de la replication
•DNA polymérase: Primase, DNA ligase, Hélicase,
transcriptases réverses
•DNA polymérase: Exonucléase 3’ → 5’
•DNA polymérase: Fonction d’édition
•Topoisomérase
•Télomérase
Toutes les DNA polymérases exigent la présence
de l’ion Mg++
DNA polymérases: Primase, DNA ligase, Hélicase,….
•Les DNA-polymérases (enzymes du noyau)
agissent en phase S du cycle pour doubler
systématiquement l’ensemble du génome diploïde.
DNA polymérase: Exonucléase 3’ → 5’ Primase, DNA ligase,
Hélicase (Correction de mésappariement)
DNA Polymérase
Hydrolyse du dernier nucléotide 3’ du brin synthétisé
si celui-ci ne s’apparie pas correctement avec le
nucléotide complémentaire du brin modèle.
DNA polymérase: Fonction d’édition
(Correction des erreurs d’incorporation)
DNA Polymérase
Si hybridation normale, l’activité de polymérase
est plus rapide que celle d’exonucléase et le
nucléotide suivant va être incorporé.
Topoisomérase
Ouverture de l’hélice d’ADN → Accès au brin modèle
(Hélicase)
La séparation des bases complémentaires et les
deux brins sur plusieurs nucléotides
→ Resserrement des tours d’hélice
La topoisomérase va desserrer les tours d’hélice
en coupant un brin ou les deux brins du DNA
La partie déroulée est protégée par des protéines
de stabilisation du DNA simple brin
La protection se fait par enroulement autour de
protéines basiques cationiques du brin non utilisé pour
l’expression des gènes ou la réplication
→ octamères d’histones → collier de perles
1 perle tous les 200 pb
Chaque nucléosome est constitué d’un fragment de
DNA de 145 paires de nucléotides et de 8 molécules
d’histones.
DNA ligase
Enzymes capables de reconstituer la liaison P-diester
entre le carbone 3’-OH et le phosphate-5’ de 2
nucléotides voisins sur un brin de DNA
Interviennent dans les processus de réparation
du DNA génomique
Télomérase
La télomérase (DNA polymérase)
→ Synthèse d’un DNA simple brin
Le télomère ou séquence du DNA à l’extrémité des
chromosomes humains est une séquence
5’-TTAGGG-3’ répétée quelques centaines de fois
avant le 3’OH final.
RÉPARATION
Définition
Correction d’une absence de complémentarité
entre les nucléotides des 2 brins d’un fragment d’ADN
(Correction d’un mésappariement)
Mésappariement entre les nucléotides
(Perte de complémentarité des bases)
La nature chimique des bases azotées est essentielle
pour le message génétique
Les modifications de bases peuvent entraîner des
mutations
DNA endommagé Conservation imparfaite
→ Réplication incorrecte de la structure primaire
du DNA
La réparation vise à remplacer une base azotée, ou un
nucléotide ou un fragment d’acide nucléique
par des nucléotides complémentaires de la séquence
de l’autre brin
Les différentes dommages
Désamination des adénines en hypoxanthines
Complémentaire de C plutôt que T
Méthylation des cytosines en 5-méthyl cytosine
complément de A plutôt que de G
Liaisons anormales entre
bases de nucléotides voisins
Agents chimiques de l’environnement mutagènes
Analogues structuraux des bases
Hydrolyse des bases puriques par la chaleur
→ Sites sans bases ou des sites apuriniques
Réparation par excision de base
Excision de base par une DNA glycosylase
DNA polymérase β:
•Hydrolyse de nucléotide apurinique,
•Remplacement par le nucléotide attendu sur l’extrémité
3’OH libre
DNA ligase:
•Refermeture de la brèche qui reconstitue la liaison
phosphodiester en 3’ du nucléotide ajouté.
Excision par le
DNA Glycosylase
Hydrolyse liaison
Site apurinique
N-glycosidique par le
DNA polymérase β
Refermeture de la brèche
par le DNA ligase
Mésappariements
Formes tautomères
de bases azotées
GTP
Mésappariement
GTP
Mésappariement
Déplacement des Hydrogène
des fonctions amine ou énol Formes tautomères
Tautomère de l’A est l’imino-A
Imino-A s’hybride avec C
Tautomère de la T est l’énol-thymine
énol-T s’hybride avec la G
Tautomère de la G est l’énol-G
énol-G se lie avec la T
Transmission du mésappariement
T A
Mésappariement:
C au lieu de T
C A T A
T A
C A
Substitution
C≡G au lieu
de T=A