EXPOSE DE BIOCHIMIE:

DOSAGE DU PSA

rédigée par :
CHIEDJE POUOMEGNE LESLINE CLAUDIA
Encadreur:
Mr FOTSO SEGOR
 PLAN 2

• INTRODUCTION

• BUT

• TECHNIQUE DE DOSAGE

• PROCEDURE

• INTERPRETATIONS

• VALEURS DE REFERENCES

• VARIATIONS PHYSIOLOGIQUES

• VARIATIONS PATHOLOGIQUES

• CONCLUSION
 INTRODUCTION (1) 3

• PSA est un sigle anglais qui signifie « Prostate Specific Antigen », ce que l’on peut
traduire par antigène spécifique de la prostate; c’est donc un marqueur spécifique de la
prostate et non du cancer.

• C’est une protéine naturellement produite par la prostate, cette glande masculine
située sous la vessie et qui entoure la partie initiale de l’urètre; elle est présente dans
la sperme à la concentration de l’ordre du mg/L et a un rôle de liquéfaction du liquide
séminal; passe dans le sang dans l’ordre du ng/mL.

• La prostate est une glande sexuelle masculine située sous la vessie, sa fonction est de
produire un liquide qui participe à la composition du sperme sain. Elle entoure le tube
(appelée l’urètre) qui transporte l’urine de la vessie vers l’extérieur à travers le pénis;
Les troubles de la prostate peuvent avoir une incidence sur la manière dont vous urinez
et parfois aussi modifier votre fonction sexuelle.
 INTRODUCTION (2) 4

• Il existe 02 formes de PSA q savoir:

 PSA Total : environ 70% du PSA sérique total circule sous forme liée aux
protéines du sang, comme l’alpha-antichymotypsine (ACT sur le schéma) ou
l’alpha2-macroglobuline;

 PSA Libre : 30 % sous forme libre.

• Les tests permettent soit le dosage du PSA total soit uniquement ses fractions,
libres (PSA libre) ou liées (PSA complexé).

• La forme libre augmente en cas d’hypertrophie prostatique bénigne (HBP).

• La forme liée augmente en cas de cancer.

• Le rapport PSA libre/total s'abaisse en cas de cancer.

 BUT 5

• Il a été montré qu’une élévation du taux de PSA par rapport aux valeurs
normales pouvait être le signe d’une anomalie au niveau de la prostate; qui n’est
pas nécessairement un cancer. D’autres maladies touchant la prostate, comme
une infection (prostatite) ou une augmentation de la taille de la prostate
(adénome) peuvent également se traduire par une augmentation du taux de
PSA.

• Sa mesure fait ainsi partie des examens qui permettent de dépister un cancer de
la prostate.

• Par ailleurs, chez les hommes qui ont un cancer de la prostate diagnostiqué, il a
été montré que le taux de PSA est un bon indicateur de l’efficacité des
traitements et de l’évolution de la maladie.
 TECHNIQUE 6

• dosage immuno-enzymatique DRG PSA Total ELISA propose le matériel

requis pour la mesure quantitative de totale d'antigène spécifique de la prostate
(t-PSA) dans le sérum ou le plasma (plasma EDTA, héparine de lithium ou
citrate).
 PROCÉDURE (1) 7

1. PRELEVEMENT :

• Il est possible d'utiliser du sérum ou du plasma (plasma EDTA, héparine de

lithium ou citrate) pour ce dosage.

• Les échantillons contenant de l’azide de sodium ne doivent pas être utilisés pour
ce test.

• En général, il faut éviter d'utiliser des échantillons hémolytiques, ictériques ou

lipémiques.

• Il est important à prendre en compte avant la prise de sang pour la

détermination de niveaux de PSA qu’étant donné que différents facteurs peuvent
influencer les niveaux de PSA dans le sang, s'assurer que le patient a bien évité
les circonstances suivantes avant le prélèvement d'échantillon sanguin:
 PROCÉDURE(2) 8

Manipulation de la prostate au cours d'examens médicaux, comme le toucher

rectal (TR), échographie

 prostatique transrectale

 Prostatite

 Cyclisme

 Activité sexuelle (éjaculation)

 Troubles hépatiques

 Prise d'inhibiteurs de la 5-alpha réductase, d'anti-androgènes ou d'analogue de

la gonadolibérine
 PROCÉDURE (3) 9

 Sérum:

Prélever le sang par ponction veineuse, laisser coaguler, puis séparer le sérum par
centrifugation à température ambiante. Ne pas centrifuger avant que la
coagulation ne soit terminée. Les patients sous traitement anti-coagulant peuvent
demander un temps de coagulation plus important.

 Plasma:

Le sang total doit être prélevé dans des tubes de centrifugation contenant un anti-
coagulant et centrifugé immédiatement après le prélèvement
 PROCÉDURE (4) 10

2. STOCKAGE ET PREPARATION DES SPECIMENS

• Les tubes contenant les échantillons doivent être fermés et peuvent être
stockés jusqu’à 7 jours à 2 °C à 8 °C avant d’être testés.

• Les échantillons stockés pour un temps prolongé (jusqu’à 12 mois) doivent

être congelés à -20 °C avant d’être testés.

• Les échantillons décongelés doivent être retournés plusieurs fois avant le test.

3. DILLUTION DE L’ECHANTILLON

• Si, lors d’un test préliminaire, la concentration de l’échantillon se révèle être

supérieure à celle du standard le plus concentré, alors l’échantillon doit être dilué
avec le Zéro Standard et testé de nouveau, comme décrit dans Réalisation du test.

• Pour le calcul des concentrations, ce facteur de dilution doit être pris en considération.
 PROCÉDURE (4) 11

4. PRINCIPE DU TEST

• Le kit DRG PSA Total ELISA est un test immuno-enzymatique en phase solide (ELISA) basé
sur le principe du sandwich. Les puits de microtitration sont recouverts d'un anticorps
monoclonal dirigé contre un site antigénique unique de la molécule de PSA.

• Pendant l’incubation, les molécules de PSA de l'échantillon ajouté se lient à l'anticorps

immobilisé. Le conjugué enzymatique, qui est ajouté, contenant un anticorps de PSA
conjugué à la peroxydase de raifort (HRP), se lie au PSA en formant un complexe
sandwich.

• Après une étape de lavage pour éliminer toutes les substances non liées, la phase solide
est incubée avec la solution de substrat. La réaction colorimétrique est arrêtée par l'ajout
d'une solution d'arrêt, et la densité optique (DO) du produit jaune résultant est mesurée.

• L'intensité de la couleur est proportionnelle à la concentration de l'analyte dans

l'échantillon
 PROCÉDURE (5) 12

5. RÉACTIFS

• Microtiterwells (Microplaques), 12 x 8 (à détacher) barrettes, plaques de

96 puits; Les puits sont recouverts avec un anticorps anti-PSA (monoclonal).

• Zero Standard (Zero Standard), 1 flacon, 10.0 ml (Solution pour dilution

de l’échantillon) ; Contient un agent de conservation sans mercure.

• Standard (Standard 1 - 5), 5 flacons, 0,5 mL chacun; Concentrations: 1,56

– 3,12 – 6,25 – 12,5 – 25,0 ng/mL ; Contient un agent de conservation sans
mercure.

• Control Low & High (Contrôle), 2 flacons, 0,5 mL chacun. Contient un

agent de conservation sans mercure.
 PROCÉDURE (6) 13

• Enzyme Conjugate (Conjugué enzymatique), 1 flacon, 12 mL; Anticorps anti-PSA

conjugué à la HRP;Contient un agent de conservation sans mercure.

• Substrate Solution (Solution substrat), 1 flacon, 12 mL; Tétraméthylbenzidine (TMB).

• Stop Solution (Solution d’arrêt), 1 flacon, 14 mL, prêt à l’emploi; Contient 0,5 M de
H2SO4,

• Tous les réactifs sont prêts à l’emploi

6. Equipement et matériel

Un spectrophotomètre lecteur de microplaques calibré (450 nm, avec longueur

d'onde de référence à 620 nm à 630 nm); des micro-pipettes de précision
variables et calibrées; du papier absorbant ; de l’eau distillée ; un minuteur ;
papier graphique ou logiciel pour la réduction des données
 PROCÉDURE (7) 14

7. Stockage et stabilité du kit

• Les réactifs contenus dans des flacons non-ouverts, stockés à 2 °C à 8 °C, seront
stables jusqu’à la date d’expiration inscrite sur l’étiquette. Ne pas utiliser les réactifs
au-delà de cette date.

• Les réactifs contenus dans des flacons ouverts doivent être stockés à 2 °C à 8 °C. Les
microplaques doivent être stockées à 2 °C à 8 °C. Une fois le sachet en aluminium
ouvert, attention à bien refermer le flacon.

• Les kits ouverts conservent leur activité durant 8 semaines s’ils sont stockés comme
précédemment mentionné.

8. Préparation des réactifs

Amener tous les réactifs et le nombre de barrettes nécessaires au test à température

ambiante (20 °C à 26 °C) avant utilisation
 PROCÉDURE (8) 15

9. REALISATION DU DOSAGE

1- Disposer le nombre de puits de micro-titration désiré dans le support.

Déposer 25 µL de chaque Standard, Control et les échantillons, avec de nouveaux cônes de pipette, dans
les puits appropriés.

2- Incuber pendant 5 minutes à température ambiante.

3- Déposer 100 µL d’Enzyme Conjugate dans chaque puits.

4- Bien mélanger pendant 10 seconds; Il est important d’obtenir un mélange parfait lors de cette étape.

5- Incuber pendant 60 minutes à température ambiante.

6- Rincer les puits 5 fois avec 400 µL de l’eau distillée par puits, si un laveur de microplaques est utilisé.

- OU -

• Décanter le contenu des puits. Rincer les puits 5 fois avec 300 µL de l’eau distillée par puits pour un
lavage manuel; Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d’éliminer les gouttelettes résiduelles.
 PROCÉDURE (9) 16

Remarque importante: La sensibilité et la précision de ce test sont fortement

dépendantes de la bonne réalisation des étapes de lavage!!

7- Ajouter 100 µL de Substrate Solution à chaque puits.

8- Incuber pendant 20 minutes à température ambiante.

9- Stopper la réaction enzymatique en ajoutant 100 µL de Stop Solution à chaque

puits.

10- Déterminer la densité optique (DO) de la solution dans chaque puits à 450 nm
(lecture) et à 620 nm à 630 nm ; Il est recommandé de lire les puits dans les 10
minutes qui suivent l'ajout de la solution d'arrêt (Stop Solution).
 VALEUR DE RÉFÉRENCES 17

• Valeur seuil de PSA : 4,0 ng/mL

• Pour les hommes de moins de 70 ans, un taux du PSA inférieur à 3 ng/ml est
considéré comme normal.

• Au-delà de 70 ans, les taux du PSA augmentent légèrement avec l’âge et que,
par exemple, une valeur de 6,5 ng/ml peut être considérée comme rassurante.
 INTERPRETATIONS 18

• Il s'agit d'un marqueur pratiquement spécifique d'un organe : la prostate, mais il ne permet
pas à lui seul, le diagnostic exact d'une pathologie prostatique

• Les résultats de ce test donnent des informations directes sur la présence d'un cancer de la
prostate. Cependant, le taux du PSA peut être élevé dans différentes pathologies de la
prostate comme l'adénome, la prostatite (inflammation/infection de la prostate). Il peut
également être élevé après certains examens comme un toucher rectal (de manière non
significative), une cystoscopie, la mise en place d’une sonde à demeure ou une intervention
sur la prostate.

• Plus le taux de PSA est élevé, plus grande est l'éventualité d'une extension du cancer au-delà
de la prostate.

• Il est important de savoir que l’examen clinique demeure irremplaçable dans le cas de cette
maladie
 19

VARIATIONS PHYSIOLOGIQUES
 Les circonstances suivantes peuvent augmenter les niveaux de PSA :

• Manipulation de la prostate au cours d'examens médicaux, comme le toucher rectal (TR),

échographie

• prostatique transrectale, etc.

• Prostatite

• Cyclisme

• Activité sexuelle (éjaculation)

• Troubles hépatiques

 Les circonstances suivantes peuvent diminuer les niveaux de PSA :

• Prise d'inhibiteurs de la 5-alpha réductase, d'anti-androgènes ou d'analogue de la

gonadolibérine
 VARIATIONS PATHOLOGIQUES
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 Si la concentration de PSA est supérieure ou égale à 4,0 ng/mL, il est fortement

recommandé de procéder à des examens de suivi; une telle concentration de
PSA indique :

• un risque élevé de cancer de la prostate, mais peut également être due à une

• hyperplasie bénigne de la prostate (HBP).

 21

CONCLUSION

• La mesure du taux de PSA s’effectue à partir d’une simple prise de sang.

• Un taux de PSA supérieur aux valeurs normales est le signe d’une anomalie au
niveau de la prostate, anomalie qui n’est pas nécessairement cancéreuse.

• Pour le dépistage du cancer de la prostate, le taux de PSA constitue une

indication; Il doit être associé à d’autres examens pour orienter le diagnostic.