Biologie
Moléculaire :
PCR
Préparé par : Ezzidine Nouha
Plan
• Définition
• Principe
• Conditions expérimentales
• Exemple Illustratif
• Conclusion
• PCR : La réaction PCR (Polymerase
Chain Reaction) est une technique
de réplication ciblée in vitro
Définition • Elle permet d'amplifier in vitro une
région spécifique d'un acide
nucléique donné afin d'en obtenir
une quantité suffisante pour le
détecter et l’étudier.
Pour se faire :
• Une série de réactions permettant la
réplication d’une matrice d’ADN double
brin est répétée en boucle,
Principe • Au cours de la réaction PCR, les produits
obtenus à la fin de chaque cycle servent
de matrice pour le cycle suivant,
• l’amplification est donc exponentielle.
Pour avoir réplication d’un ADN double brin, il faut
agir en trois étapes.
1. Dénaturation : Il faut dénaturer l’ADN pour
obtenir des matrices simple brin :
Principe 2. Hybridation : borner et amorcer la réplication
de la séquence à amplifier à l’aide
d’oligonucléotides amorces spécifiques :
3. Polymérisation : réaliser la réaction de
polymérisation du brin complémentaire. A la
fin de chaque cycle, les produits sont sous
forme d'ADN double brin.
Les trois étapes, constituant un cycle de PCR, sont
effectuées à des températures différentes permettant
de contrôler l’activité enzymatique.
• Pour effectuer ces transitions de températures, les
microtubes contenant le mélange réactionnel sont
placés dans un appareil programmable :
Conditions un thermocycleur.
expérimentales • Cet appareil présente un bloc chauffant qui permet
d’exposer les tubes qui contiennent le mélange
réactionnel à des températures choisies et pour des
durées déterminées par l’expérimentateur.
• La réaction PCR est extrêmement rapide et ne dure
que quelques heures (2 à 3 heures pour une PCR de
30 cycles).
Illustration
Conclusion
• Pcr est une technique d’amplification
enzymatique (taq polymérase) qui
permet à partir d’un fragment d’ADN ,
d’obtenir plusieurs millions de copies
identiques de ce même fragment.
• Elle est très précieuse pour les études
d’ADN fossile car on ne dispose que
de très peu de matériel génétique.