RÉPUBLIQUE ALGÉRIENNE DÉMOCRATIQUE ET POPULAIRE
MINISTÈRE ENSEIGNEMENT SUPÉRIEUR ET RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITÉ SAAD DAHLAB- BLIDA 1
TECHNIQUES D’EXTRACTION
DES BIOMOLECULES
RESPONSABLE DU MODULE: Dr CHALAL
INTRODUCTION
En vue d’extraire sélectivement un ou plusieurs
composés d’un mélange en s’appuyant sur leur
propriétés chimiques et/ou physiques.
L’extraction protéique à partir d’un tissu s’effectue
initialement par la destruction cellulaire au moyens
de plusieurs méthodes (mécaniques, chimiques ou
enzymatiques) puis les débris cellulaires seront
séparés par centrifugation et enfin la purification
protéique à partir du mélange en appliquant
plusieurs techniques.
Extraction des acides nucléiques : plusieurs phases
sont impliquées:
o Lyse cellulaire via des méthodes physiques ou
chimiques.
o Elimination (séparation) des lipides membranaires
ainsi que les débris cellulaires (en utilisant un
détergent et par centrifugation).
• Elimination des protéines par une protéase.
• Elimination de l’ARN par l’Rnase
• Précipitation/agrégation/élution de l’ADN
TECHNIQUES MÉCANIQUES
-En utilisant les broyeurs mécaniques (en verre) tels
que:
L’homogénéisateur de type Dounce
L’homogénéisateur de type Potter-Elvehjem
-Piston (à tête
en téflon+ tige
d’acier) et un
mortier
Eprouvette +piston.
TECHNIQUES MÉCANIQUES
-French Press (BROYEUR DE CELLULES)
Cylindre creux en métal+ piston
métalliques doté des o‐rings
en caoutchouc très solide.
TECHNIQUES MÉCANIQUES
La sonication (Ultrasons)
• Destruction des cellules par les ultrasons
• Permettant le relâchement des composés
intracellulaires (protéines, métabolites… etc) dans le
milieu.
Sonicateurs de
NexTgen Lab
Un large éventail d'applications:
homogénéisation, dégazage,
émulsion, extraction d’ADN, lyse
de bactéries etc…
Techniques chimiques et enzymatiques
-CHOC OSMOTIQUE:
Incubation des cellules dans une solution hypo‐
osmotique.
Pénétration de l’eau dans les cellules ce qui provoque
leur gonflement et par conséquent, la rupture de leur
membrane plasmiques .
-Modification de la force ionique /pH
Rupture membranaire peut être effectuée par:
o Addition des ions
o Modification du PH
-Lyse enzymatique
En utilisant des enzymes tels que:
la lyticase de S. aureus
le lysozyme
Extraction par solvant
-Le solvant : l’eau, généralement un solvant organique
(éther de pétrole, éthanol, toluène……
-Plusieurs paramètres à tenir en compte:
• La miscibilité et état physique du solvant (Le solvant
doit être non miscible, liquide à la température ainsi qu’
à la pression où l’on effectue l’extraction.
• La densité du solvant
• Le composé à extraire
Il doit être très soluble dans le solvant.
• Le solvant doit être facile à éliminés après l’extraction
• Peu toxique
L’extraction par solvant s’effectue en trois étapes:
Mise en contact solvant + l’échantillon
possédant le composé à extraire (décoction,
infusion ou macération).
Décantation: en utilisant une ampoule à
décanter
Séchage et filtration: pour l’élimination d’eau
retenu au sein de la phase organique.
Extraction par hydro-distillation
-Distillation d’un composé via entraînement à la
vapeur d’eau.
- Appliquée pour l’extraction des huiles essentielles
- Elle s’effectue en plusieurs étapes:
Entraînement à la vapeur: bouillir l’eau+
échantillon possédant le composé d’ intérêt à
extraire.
Relargage: en utilisant le chlorure de sodium en
vue de rendre les huiles essentielles moins
solubles pour les récupérer facilement.
Décantation: faite dans une ampoule à décanter
permettant la séparation du mélange en 2 phases
non miscibles (phase aqueuse et phase
organique).
Séchage et filtration: Pour l’élimination d’eau
retenue dans la phase organique (restant dans
l’huile).
- Utilisation d’un déshydratant comme le
cyclohexane afin d'éliminer l’eau retenu (séchage).
Décantation
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES