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Introduction à la spectroscopie RPE

Ce document décrit les principes de base de la résonance paramagnétique électronique (RPE). Il explique ce qu'est un spectre RPE et comment il est utilisé pour mesurer la valeur g d'un centre paramagnétique. Le document contient également des exemples de spectres RPE de protéines et centres fer-soufre.

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Introduction à la spectroscopie RPE

Ce document décrit les principes de base de la résonance paramagnétique électronique (RPE). Il explique ce qu'est un spectre RPE et comment il est utilisé pour mesurer la valeur g d'un centre paramagnétique. Le document contient également des exemples de spectres RPE de protéines et centres fer-soufre.

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LA RPE AU COIN DU FEU

PREMIER EPISODE :

Q’EST– CE QU’UN

SPECTRE RPE ?

P. Bertrand
LA SALLE DE RPE, LE 25 DECEMBRE, 6h DU MATIN

A quoi ça sert ?
ENREGISTRER DES SPECTRES RPE

Équation N°1: (SURFACE +) = (SURFACE -)


QU’EST- CE QU’UN SPECTRE ?

 Etymologie : spectre = apparition (latin spectare = regarder)

 1669 Isaac Newton (17 ans) étudiant au Trinity College, Cambridge

lumière blanche sur un prisme



apparition de bandes colorées sur un écran = spectre

Le prisme (matière) modifie la lumière (rayonnement)

 En physique : l’interaction matière / rayonnement produit un spectre

dans un spectroscope. Chaque spectroscopie vise une cible particulière.

 Sens figuré : spectre d’un antibiotique, spectre de compétences


d’une personne.
La RPE = RESONANCE PARAMAGNETIQUE ELECTRONIQUE

spectroscopie qui a pour cible les centres paramagnétiques

Centre paramagnétique = atome ou molécule


qui possède des électrons non appariés

LES CENTRES PARAMAGNETIQUES DES PROTEINES

Sites actifs d’enzymes et centres rédox

flavine centres fer-soufre

hème

2Fe-2S

4Fe-4S
3Fe-4S
CENTRE PARAMAGNETIQUE DANS UN CHAMP MAGNETIQUE B

ECLATEMENT DES NIVEAUX D’ENERGIE (Pieter Zeeman, Nobel 1902)

S = 1/2 S=1 E
E
E

B=0 B0
B=0 B0

 Nombre de niveaux : déterminé par le spin S du centre paramagnétique


2S + 1 entier ou demi-entier

 Eclatement proportionnel à B : E = g  B  = 9,274 10-24 J /T


Joule Tesla magnéton de Bohr

facteur g : sans dimension, caractéristique du centre paramagnétique


Pour mesurer g : spectroscopie RPE

 Centre paramagnétique : spin 1/2 , facteur g

 Dans un champ magnétique : S = 1/2


E = g  B
 Expérience
de spectroscopie : rayonnement (fréquence  fixée) sur centre paramagnétique

interaction si h = E h = 6,626 10-34 J s


constante de Planck

Résonance pour B = Br tel que


E h
E = g  Br = h

Raie de résonance en Br = h / g
spectre

0 B Position de la raie  mesure de g


Br
REPONSE A LA QUESTION INITIALE
On enregistre un spectre RPE pour mesurer des valeurs de g

aimant, cavité, source de rayonnement ( pont hyperfréquence)


LE FACTEUR g DEPEND DE L’ORIENTATION DU CHAMP
PAR RAPPORT AU CENTRE PARAMAGNETIQUE

 
B Centre paramagnétique caractérisé par:

3 axes magnétiques {x, y, z}


3 nombres (gx , gy , gz )
y
x  directions intermédiaires :

B
 parallèle à x : g = gx (gx , gy , gz )
B
 parallèle à y : g = gy g dépend de 
B parallèle à z : g = g direction de B
z

mais gmin < g < gmax


Br = h  / g 

le champ de résonance dépend de l’orientation de B
par rapport au centre paramagnétique
EXEMPLE : LE FLAVOCYTOCHROME b2

gx = 1,4 Br = h  / g 
hème b 2 : S = 1/2 gy = 2,22
gz = 3,01  = 9,4 109 Hz

z  z z
B


B
y y y
x 
x x
Br = 223 mT Br = 302 mT
B Br = 463 mT

B (mT)

200 300 400 500


COMPARONS AU SPECTRE EXPERIMENTAL

z y x

223 302 463 B (mT)

flavocytochrome b2
T = 15 K
 = 9,40 GHz
SPECTRE D’UNE SOLUTION GELEE

B constant dans l’échantillon


B

Echantillon : 150 L, 10 M  1015 molécules orientées aléatoirement

Br = h / g  , gmin < g < gmax  Bmin< Br < Bmax


CONSEQUENCE : EMPILEMENT DE 1015 RAIES DE RESONANCE

z x

B (mT)

Bmin = 223 mT Bmax = 463 mT

A QUOI RESSEMBLE LE SPECTRE RESULTANT ?

EXAMINONS UN AUTRE EXEMPLE


EXEMPLE 2 : UN CENTRE 2Fe2S

Fe3+ Fe2+ gx = 1,90 Br = h  / g 


z S=½ gy = 1,94
gz = 2,05  = 9,4 109 Hz
y
x

z
y
Br = 328 mT Br = 346 mT Br = 357 mT

320 330 340 350 360 B (mT)


SPECTRE D’UNE SOLUTION GELEE


B
UN PEU DE CALCUL MENTAL
6 molécules 158 molécules

29585 molécules 1015 molécules


Le spectromètre effectue une dérivation par rapport à B
328 346 357

Br = h  / g 
B
Mesure
 = 9,4 10 Hz
9
de gx

Mesure Mesure
de gz de gy

328 346 357


ET A TEMPERATURE AMBIANTE ?

B constant dans l’échantillon


B

Petites molécules : 
Mouvements de rotation rapides dans le champ B
Effet de moyenne
TOUTES LES MOLECULES DONNENT LA MEME RAIE

gmoyen = (gx + gy + gz) / 3

gx = 1,90
Centre 2Fe2S : gy = 1,94  gmoyen = 1,96
gz = 2,05
Bmin Bmax

320 330 340 350 360 B (mT)


Br = h  / g 

 = 9,4 x 109 Hz : Bmoyen = 343 mT


Mesure de gmoyen

SPECTRE PLUS SIMPLE


MAIS MOINS D’INFORMATION…
QUELQUES REPERES CHRONOLOGIQUES

 Premières expériences de RPE : solution Mn2+ et Cu2+

Zavoisky, Kazan 1945

Cummerow et Halliday, Pittsburg 1946

 A partir de 1947: nombreuses expériences au Clarendon Laboratory, Oxford

En 1950: thèse d’un jeune français d’origine russe :

Anatole Abragam (1915 - juin 2011)

 Première expérience de RMN :

Bloch et al., Stanford 1946


Nobel 1952
Purcell, et al., Harvard 1946
QUELQUES MOTS SUR A. ABRAGAM

- Carrière à Saclay. Collège de France à 44 ans, Acad. Sc.

- Autobiographie : De la physique avant toute chose ?


(Odile Jacob)

en anglais « time reversal : an autobiography »

- Au Clarendon Laboratory: « hydrogen, no smoking »

-« Avant de mettre la Mécanique Quantique au panier,


vérifions une dernière fois les fusibles… »
LA RPE AU COIN DU FEU

DEUXIEME EPISODE :

A QUOI SERT LA RPE ?


Patrick Bertrand
“La spectroscopie de
Résonance Paramagnétique
Electronique”
EDP Sciences, collection
Grenoble Sciences.
Le Volume 1, paru en novembre 2010:
fondements
Volume 2, (hiver 2011-2012):
applications.

Table des matières, infos:


[Link]
[Link]/bip06/~bertrand/

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