REPUBLIQUE DU CAMEROUN REPUBLIC OF CAMEROUN
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Paix-Travail-Patrie Peace-Work-Fatherland
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MINISTERE DE LA SANTE PUBLIQUE MINISTRY OF PUBLIC HEALTH
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SECRETERIAT GENERAL GENERAL SECRETARY
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PREVALENCE ET PROFIL DE RESISTANCE AUX
FLUOROQUINOLONES ET AUX AMINOSIDES DES
ISOLATS DE SARM DANS LES SECRETIONS GENITALES
DE L’HOPITAL GYNECO-OBSTETRIQUE ET
PEDIATRIQUE DE YAOUNDE
Protocole de recherche en vue de l’obtention partielle du Diplôme de Technicien
Principal Médico-Sanitaire /Option Analyses Médicales
Rédigé par :
DALOHO YEMELI MURIELLE FIONA
Élève Technicien Principal Médico-Sanitaire option Analyses Médicales
Matricule : 20TAM-0967
Niveau : III
Sous l’encadrement de:
M. DEUMAGA RODIER
Ingénieur biologiste
Année Académique: 2022-2023 9ième Promotion
Prévalence et profil de résistance aux fluoroquinolones et aminosides des isolats de SARM
dans les sécrétions génitales de l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Yaoundé
SOMMAIRE
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Prévalence et profil de résistance aux fluoroquinolones et aminosides des isolats de SARM
dans les sécrétions génitales de l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Yaoundé
LISTE DES ABREVIATIONS
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Prévalence et profil de résistance aux fluoroquinolones et aminosides des isolats de SARM
dans les sécrétions génitales de l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Yaoundé
LISTE DES ANNEXES
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Prévalence et profil de résistance aux fluoroquinolones et aminosides des isolats de SARM
dans les sécrétions génitales de l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Yaoundé
INTRODUCTION
Le Staphylococcus aureus est une bactérie pyogène. Son caractère ubiquitaire, sa virulence et
sa remarquable capacité de survie dans un environnement défavorable ou même hostile
expliquent sa grande fréquence en pathologie communautaire et nosocomiale. S. aureus est
responsable d’une grande variété d’affections de gravité variable parfois bénignes comme les
infections cutanées et muqueuses ou sévères comme l’endocardite et la septicémie. (DUVAL,
1989)
Observés par Pasteur en 1879 dans un pus de furoncle, les staphylocoques doivent leur nom à
OGSTON (1881) qui les a mis en évidence dans des abcès aigus et chroniques. En 1884,
Rosenbach a obtenu des cultures pures de staphylocoques et les a scindés en deux groupes
selon que les colonies étaient blanches ou dorées (Avril, et al., 2000)
Dans les années 1940, avec la découverte de la pénicilline comme antibiotique, un traitement
efficace avait été trouvé pour les infections staphyloccociques. Cependant, très vite des
souches résistantes à la pénicilline sont apparues. (« Celbenin », 12 oct 2015) Ensuite au
début des années 60, la méthicilline fut introduite en thérapeutique pour pallier à cette
résistance. Les premières souches résistantes à cet antibiotique apparaissent dès 1961. (Lowy,
1 mai 2003;)
Selon l’OMS dans certaines régions africaines, jusqu’à 80% des infections à staphylocoque
doré (Staphylococcus aureus ) se sont avérées résistantes à la méthicilline (SARM). (OMS, 15
août 2015) Ces souches communément appelées SARM sont non seulement résistantes à la
méthicilline mais, également à toutes les bêta-lactamines. De plus, elles présentent des
résistances élevées aux autres familles d’antibiotiques. Elles constituent l’une des premières
causes d’infections nosocomiales. Elles posent de véritables problèmes thérapeutiques, avec
un risque de décès qui est supérieur de 64% comparé au risque pour les personnes atteintes
d’une souche non résistante. Elles augmentent également le coût des soins du fait de la
prolongation des séjours à l’hôpital et des soins plus intensifs sont requis. (OMS, 15 août
2015)
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Certaines espèces de staphylocoques aureus fabriquent également une toxine (TSST-1)
responsable du syndrome du choc toxique (SCT) dans 75 % des cas. Le syndrome du choc
toxique touche les femmes pendant leurs règles, notamment lorsque les protections
menstruelles ne sont pas changées pendant une longue période (4 à 6 h). Cette affection
provoque de très nombreux symptômes et peut même engendrer un décès dans les 2 heures
qui suivent l’infection. Cette souche de staphylocoque doré s’installe au niveau du vagin et
peut s’étendre à d’autres zones du corps. (medadom, 2022)
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CHAPITRE I : PROBLEMATIQUE
De par le caractère cosmopolite des Staphylocoques, ainsi que des observations du Professeur
A. Benouda, l’infection staphylococcique est un problème de santé mondial. (Benouda A,
2010). La prévalence des infections staphylococciques dans le monde est très hétérogène et
variable. En Amérique du Nord, on note des prévalences allant de 36 à 62.6% pour des
populations à risques. Des prévalences de 10 à 57% sont relevées en Afrique. (Benouda A,
2010)
L’incidence des infections staphylococciques en Europe en 2012 était de 18,0%, dont moins
de 1% dans les pays du Nord, entre 5 et 20% dans les pays d’Europe centrale et supérieure à
25% dans les pays du Sud. (staphylocoque aureus (staphylocoque doré) [Internet], 2021)
En Asie, on note de forte prévalence, dont 64% à Shanghai, 0.2% en Chine et à Hong-Kong.
(Bernier-Lachance)
En Afrique du Nord, Comparée aux autres pays du Maghreb, l’Algérie enregistre la plus forte
prévalence de SARM (44 %) par rapport aux deux pays voisins que sont la Tunisie (18 %) et
le Maroc (19 %) (Zouagui, et al., 2015)
A Lomé au Togo dans l’étude de (Kombaté, et al., 2011), une prévalence de 35,7% était
observé ; au Burkina Faso on note une prévalence de 31,33 % dans l’étude (Traore & S,
2019) ; en côte d’ivoire nous avons une prévalence de 19,3 % dans l’étude de
(ZINZENDORF, et al., 2013).
De même Au Cameroun, Selon l’étude de Luria Leslie Njoungang sur « Modèles de
prévalence et de résistance aux antibiotiques des souches de Staphylococcus aureus isolé à
Yaoundé Hôpital militaire, Cameroun », 201 échantillons cliniques ont été analysés, Ce
pathogène a été détecté dans 39 des échantillons collectés avec une prévalence taux de 19,4
%. Parmi ceux-ci, 28 (72 %) étaient résistants à méthicilline. Les sources d'infection les plus
fréquentes sont les prélèvements urogénitaux avec 21 souches (10,4 %) de S. aureus ; la
majorité étant originaire femmes (57 %) et dont 17 SARM (81 %). (Luria, et al., 2015)
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Egalement dans l’étude de Mansour Mohamadou sur « Forte prévalence de Panton-Valentine
leucocidine positive, multi résistante, Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline
souches circulant parmi les configurations cliniques dans Régions de l'Adamaoua et de
l'Extrême-Nord du Cameroun », un total de 380 isolats cliniques de S. aureus ont été obtenus
dont 202 (53,2 %) étaient des isolats multi résistants non dupliqués contenant 45,5 % de
SARM, Un plus grand nombre de SARM ont été isolés du pus (30,4 %) suivi de l'hémoculture
(18,5 %) et de l'urine (17,4 %). Les isolats de prélèvement urétraux et vaginaux étaient
également représentés avec 9,8 % d'isolats provenant de ces échantillons biologiques.
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Question de recherche
Quelle est la prévalence des isolats de Staphylococcus aureus Résistant à la
Méthicilline des sécrétions génitales et quel est le profil de résistances de celles-ci aux
fluoroquinolones et aux aminosides ?
Hypothèse de recherche
La prévalence des isolats de Staphylococcus aureus Résistant à la Méthicilline des
sécrétions génitales serait non négligeable et le profil de résistance aux fluoroquinolones et
aminosides serait non négligeable.
Objectif général
Déterminer la prévalence des isolats de Staphylococcus aureus Résistant à la
Méthicilline des sécrétions génitales ainsi que le profil de résistance aux fluoroquinolones et
aux aminosides des patients venus en consultation à l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et
Pédiatrique de Yaoundé.
Objectifs spécifiques
- Identifier les isolats de Staphylococcus aureus Résistant à la Méthicilline des
sécrétions génitales chez les patients
- Déterminer la fréquence des SARM en fonction de l’âge et du sexe
- Sortir le profil de résistance des SARM aux fluoroquinolones et aux aminosides
- Déterminer les facteurs à l’origine de l’acquisition de résistances de ces souches de
SARM
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CHAPITRE II : METHODOLOGIE
I. Caractéristiques de l’étude
I.1 Type d’étude
Nous allons réaliser une étude retro prospective et transversale.
I.2 Lieu d’étude
Notre étude s’effectuera à l’Hôpital Gynéco Obstétrique et Pédiatrie de Yaoundé. L’HGOPY
est situé dans la région du centre Cameroun département du Mfoundi, arrondissement de
Yaoundé V. Il est situé dans le quartier Ngousso et délimite au Nord par le collège Bella
Hassan, au Sud par la maeture, à l’Est par l’hôpital Général, à l’Ouest par la station Ola.
Le choix sera porté sur ce site pour les raisons suivantes :
- Il est réputé pour être l’un des meilleurs hôpitaux au Cameroun en matière de prise en
charge des patients ;
- Sa position géographique rend son accès très facile ;
- Il dispose un plateau technique de haut niveau.
I.3 Durée de l’étude
Notre étude se déroulera sur une durée allant de juin à aout.
II. Population d’étude et matériels
II.1 Population d’étude
Nous nous intéresserons aux patients à qui le médecin aura prescrit un examen
bactériologique des sécrétions génitales.
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II.2 Taille de l’échantillon
Nous avons considéré la prévalence du Dr Rahima TOUAITIA en 2016 qui était de 10,4% ; la
𝜌×(1−𝜌)
taille de l’échantillon sera de 143 obtenue par la formule suivante 𝑛 = 𝜇 2
𝜎2
n : taille de l’échantillon :
𝜇 2 : degrés de confiance=1,96
𝜎 2 : degrés de précision= 0,05
𝜌 : prévalence
II.3 Matériel
Matériels de collecte
Nous avons besoin de :
- Fiche de consentement/d’assentiment éclairé des parents du patient ou du patient lui-
même ;
- Lettre d’information pour informer l’hôpital concerné que l’on fera une collecte ;
- Fiche technique qui comporte le numéro d’identification du patient, l’âge, le sexe,
l’examen demandé, résultat obtenu après analyse de l’examen.
Matériels de prélèvement
- Gants à usage unique ;
- Spéculum ;
- Gants à usage unique ;
- 1 écouvillon pour femme et 1 écouvillon pour PU ;
- Lit gynécologique ;
- Source lumineuse ;
- Alèze ;
- Compresse ;
- Eau stérile
Matériels de culture
- Gélose Chapman ;
- Microscope optique ;
- Incubateur à 37°C ;
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- Bec bunsen ;
- Anse de platine ;
- Lame ;
- Lamelles ;
- Colorants de Gram ;
- Bouteille de gaz butane + tuyau + détenteur ;
- Pipette Pasteur stérile.
Matériels d’identification
- Disque de novobiocine
- Plasma sur tube edta pour la coagulase
- Tubes à hémolyse
- Mannitol (sur Chapman)
- Etiquettes
- Eau oxygénée
Matériels d’antibiogramme
- Anse de platine ;
- Bec Bunsen ;
- Bouteille de gaz ;
- Boites de Pétri ;
- Gélose Mueller Hinton ;
- Disques d'antibiotiques ;
- Eau physiologique stérile ;
- Écouvillons stériles ;
- Etiquettes ;
- Incubateur à 370C ;
- Densitomètre ;
- Pince métallique ;
- Pipette Pasteur stérile ;
- Vortex ;
- Chronomètre ;
Matériel biologique
Sécrétions génitales respectant les conditions de prélèvement.
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III. Méthodes
III.1 Echantillonnage
Nous utiliserons la méthode non probabiliste par convenance
III.2 Critères de sélection de la population d’étude
III.2.1 Critères d’inclusion
Phase rétrospective
Tout patient à qui un examen bactériologie des sécrétions génitales avait été prescrit et
dont les résultats étaient contenus dans les registres du laboratoire étais inclus dans
l’étude.
Phase transversale
Tout échantillon génital de patient acheminé au laboratoire pour un examen
bactériologique.
III.2.2 Critères de non inclusion
Seront non inclues dans notre étude :
Phase rétrospective
Tout patient à qui aucun examen bactériologie des sécrétions génitales n’avait été
prescrit.
Phase transversale
Tout échantillon non génital de patient acheminé au laboratoire.
III.2.3 Critères d’exclusion
Seront exclues de notre étude :
Toute personne ne remplissant pas les conditions de prélèvement ;
Toute personne n’ayant pas d’infection génitale ;
Toute personne ayant une infection génitale n’étant pas due aux SARM.
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III.3 Recrutement des participants
Après accueil et installation des patients, nous présenterons l’intérêt de notre étude grâce à la
fiche d’information ; puis les intéressés liront et signeront la fiche de consentement éclairé,
d’assentiment et répondront aux questions qui leur seront posées.
III.4 Prélèvement
III.4.1 Conditions de prélèvement
Les participants inclus dans l’étude devront :
Pour les femmes :
- Ne pas faire la toilette intime le matin du prélèvement
- Ne pas être en période de menstruation
- Ne pas être sous antibiotique
- Ne pas faire de rapports sexuels 48 à 72 heures avant le prélèvement
Pour les hommes :
Le prélèvement doit se faire très tôt le matin avant que le patient urine et si tel n’est pas le cas,
espacé le prélèvement de 3 à 4 heures après la dernière miction.
III.4.2 Prélèvement proprement dit
Il s’effectuera de la manière suivante :
Pour les femmes :
- Après avoir demandé au patient si elle a respecté les conditions de prélèvements,
expliquer au patient comment doit se dérouler le prélèvement ;
- Etiqueter les écouvillons en précisant celui du col et celui de la paroi ;
- Mettre l’alèse sur le lit gynécologique et installer le patient en position gynécologique ;
- Enfiler les gants et enlever le spéculum de son plastique devant la patiente ;
- Tenir le spéculum en position latérale et dégager les grandes lèvres ;
- Introduire délicatement le spéculum dans l’orifice vaginal jusqu’au ¾ et tourner le
spéculum en position horizontale ;
- Ouvrir le spéculum ;
- A l’aide de l’écouvillon étiqueté, prélever au niveau du cul de sac de douglas ;
- Fermer le spéculum au ¾ et dégager doucement ;
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Pour les hommes
- Après avoir demandé au patient s’il respecte les conditions de prélèvement, lui
expliqué comment doit se dérouler le prélèvement ;
- Demander au patient de baisser son pantalon et enfiler les gants de soins ;
- Nettoyer tout le gland avec la compresse et l’eau stérile ;
- Presser sa verge de la base vers l’avant ;
- Introduire délicatement l’écouvillon (1cm) dans la verge en se rassurant que le patient
a le moins mal possible ;
- Faire quelques mouvements de rotation et retirer l’écouvillon
III.5 Transport des échantillons
Après avoir effectué le prélèvement, l’échantillon sera transporté immédiatement au
laboratoire dans un tambour, accompagné de la fiche technique qui a été dûment remplie et du
bulletin d’examen du patient.
III.6 Analyse des échantillons
Une fois au laboratoire, les échantillons seront enregistrés dans le cahier de paillasse.
Les éléments reportés seront les suivants : les noms et prénoms, le code, l’âge, le sexe, l’heure
du prélèvement et les antibiotiques (si antibiothérapie en cours).
III.6.1 Préparation des milieux et stockage
Elle se fera de la manière suivante :
- Préparer la gélose de MH selon les indications du fabricant en ajoutant, pour les bactéries
à croissance lente, les suppléments pour la gélose au sang MH-F comme indiqué dans le
tableau 1 d’EUCAST 2021. La préparation et l’addition des suppléments sont décrites en
détail : [Link]
- Préparer la gélose Chapman selon les indications du fabriquant.
- L’épaisseur de la gélose doit être de 4 mm ± 0,5mm (approximativement 25ml pour une
boîte de 90mm de diamètre, 31ml pour une boîte de 100mm de diamètre, 71ml pour une
boîte de 150mm de diamètre et 40ml pour une boîte carrée de 120mm de côté).
- La surface de la gélose doit être séchée avant emploi. Les conditions de séchage et de
conservation des milieux fabriqués au laboratoire son fonction de l’équipement du
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laboratoire et devait être déterminées localement. Les boîtes ne devaient pas être
desséchées.
- Conserver les boîtes préparées au laboratoire à 4-8°C. Si elles étaient conservées au-delà
de 7 jours, les conserver en sachet plastique scellé.
- Les conditions de séchage et de conservation des milieux fabriqués au laboratoire étaient
déterminées localement dans le cadre du programme d’assurance qualité.
- Il convenait de suivre les recommandations du fabricant pour le mode de conservation des
géloses prêtes à l’emploi. Les utiliser avant péremption.
Après l’arrivée des échantillons au laboratoire, nous devions les traités, après l’enregistrement
de ses échantillons, on procèdera comme suit :
III.6.2 Jour 0
Examen macroscopique : aspect, couleur, texture, odeur.
Ensemencement sur gélose Chapman. Incuber à 37°C pendant 24heures en atmosphère
ordinaire.
Examen microscopique :
- Etat frais des sécrétions génitales (Cocci immobile) ;
- GRAM direct : un frottis sera effectué avec les sécrétions et après coloration, il sera
observé à l’objectif 100X au microscope (Cocci à gram positif isolé ou regroupé en
diplocoques, en amas polyédrique évoquant un aspect grappe de raisin).
Procédure de la coloration de Gram :
- Déposer la lame à colorer sur le bac de coloration ;
- Recouvrir la lame du violet de Gentiane et laisser agir pendant 30s à 60s ; s=secondes ;
- Rincer à l’eau du robinet ;
- Recouvrir de nouveau la lame (il joue le rôle de mordant en renforçant l’action de violet
de Gentiane) avec le lugol et laisser agir pendant 30s à 60s ;
- Rincer à l’eau ;
- Décolorer à l’alcool ou acétone, verser sur la lame inclinée jusqu’à ce que la dernière
goutte soit incolore ≤10s ;
- Rincer à l’eau ;
- Recoloration à la Fuchsine et laisser agir environ 30 à 60s ;
- Laisser sécher et lire à l’objectif 100X.
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III.6.3 Jour1
Lecture du milieu de culture : elle consistera à faire la description des colonies
observées (colonies jaunes avec virage du milieu Chapman en jaune).
Gram de contrôle si culture positive, à l’aide d’une colonie isolée sur une culture pure.
Tests d’orientation : test de la catalase
Principe :
Cette enzyme est produite en abondance par les bactéries à métabolisme respiratoire (aérobie
strict et aérobie anaérobie facultatif) qui peuvent détruire les peroxydes H2O2 (Winn, et al.,
2006) selon la réaction suivante : 2H2 O2 → 2H2O+O2
Technique :
- Sur une lame, mettre une goutte d’eau oxygénée
- Prendre une colonie isolée et l’introduire dans la goutte
Lecture :
La présence de catalase est marquée par la formation immédiate des bulles d’O2.
Tests d’identification :
Recherche de la coagulase
Test spécifique des Staphylocoques permettant de différencier Staphylococcus aureus
(Staphylocoque doré) des Staphylocoques coagulase négative.
La coagulase libre est une exo-enzyme coagulant le plasma d'homme ou de lapin. C'est une
protéine thermostable active la prothrombine en thrombine. La thrombine ainsi activée agit
sur le fibrinogène qu'elle transforme en fibrine (Vandepitte, V., k., P., & C.C, 1994).
C'est un facteur primordial dans le pouvoir pathogène en coagulant le plasma autour des
coques et en les protégeant de la phagocytose (Winn, et al., 2006).
Technique
- Réaliser une culture jeune en bouillon agité des souches Staphylococcus testées ;
- Incuber 24h à 37°C ;
- Mettre dans un tube à hémolyse 4 gouttes de bouillon et 4 gouttes de plasma de
- Lapin oxalaté ;
- Placer le tube au bain marie à 37°C durant 2 à 4h, observer toutes les heures.
Lecture
Une coagulation pourra être observée par une prise en masse du liquide (Winn, et al., 2006).
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Test à la novobiocine
La novobiocine est utilisée pour distinguer les différentes espèces de staphylocoques. Une
petite quantité de colonie bactérienne isolée du patient est ensemencée en présence de
l’antibiotique novobiocine et la présence d’une croissance après 18h à 24h d’incubation
indique la présence de S. saprophyticus tandis que l’absence de croissance indique la présence
de S. aureus.
Mannitol (sur Chapman)
Sur Chapman, après ensemence et incubation, après 24h s’il y’a présence de colonies
bactériennes jaunes accompagnées du virage du milieu au jaune alors il y’a fermentation du
mannitol.
Réalisation de l’antibiogramme adapté (méthode de diffusion des disques ou
méthode de Kirby Bauer).
Préparation de l'inoculum
- A partir d’une culture pure et jeune (18-24h), prélever deux colonies de S. aureus ;
- Transvaser dans un tube contenant 5 ml d’eau physiologique stérile, émulsionner les
colonies ;
- Ajuster la densité de l’inoculum à celle de l’étalent 0,5% Mac Farland jusqu'à l’obtention
la même opacité aux environs 5x106 UFC/ml.
Ensemencement par écouvillonnage (CA-SFM, 2015)
- Couler la gélose de Mueller-Hinton dans les boites de pétri (4 mm) ;
- Tremper un écouvillon stérile dans l’inoculum ;
- L’essorer en le pressant fermement (et en le tournant) contre la paroi interne du tube, afin
de décharger au maximum ;
- Frotter l’écouvillon sur la totalité de la surface gélosée, sèche, de haut en bas, en stries
serrées.
- Répéter l’opération 2 fois, en tournant la boite de 60° à chaque fois, sans oublier de faire
pivoter l’écouvillon sur lui-même. Finir l’ensemencement en passant l’écouvillon sur la
périphérie de la gélose.
- Laisser sécher de 3 à 5 minutes ;
Application des disques d’antibiotiques
- Déposer les disques d’antibiotiques (au maximum 6 antibiotiques par boite) ;
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- Presser chaque disque d’antibiotique à l’aide de pinces bactériologiques stériles et ne pas
déplacer les disques après application ;
- Incuber 24 h à 37°C.
III.6.4 Jour2
Lecture des tests d’identification et de l’antibiogramme
Détection de la résistance à la Méthicilline chez S. aureus
La sensibilité des souches S. aureus a été déterminée par la méthode de diffusion en milieu
gélosé de Muller-Hinton selon les recommandations du comité de l’antibiogramme de la
société française de microbiologie (CA-SFM, 2017).
La résistance des souches de S. aureus à la Méthicilline (oxacilline) est recherchée à l’aide
d’un disque de céfoxitine (30μg), en plus du disque d’oxacilline (5μg) lui-même dans les
conditions standard (Felten et Casin, 2003).
La résistance à la Méthicilline est définie par des diamètres d’inhibition : < à 22 mm et < à 20
mm à la céfoxitine et à l’oxacilline respectivement.
La résistance antibactérienne sera déterminée pour 8 antibiotiques en utilisant la méthode de
diffusion en milieu gélosé de Muller-Hinton selon les recommandations du comité de
l’antibiogramme de la société française de microbiologie pour les antibiotiques suivants :
oxacilline (5μg), céfoxitine (30μg), gentamicine (10μg), kanamycine (30 μg), tobramycine
(10μg), ciprofloxacine (5 μg), ofloxacine (5ug), norfloxacine (10ug).
Identification du germe
- Catalase positive
- Coagulase positive
- Mannitol positif
- Sensibilité à la novobiocine
Transcription des résultats dans le registre de paillasse. Rendu du résultat.
III.7 Technique d’analyse statistique des données
III.7.1 Variables étudiées :
Qualitatives : Sexe,
Quantitative : Âge
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Les variables à étudier seront enregistrés, traités et analysés à l’aide du logiciel Excel 2016.
Les résultats obtenus seront présentés sous forme de tableaux, histogramme et/ou secteurs.
III.8 Considérations éthiques
Afin de mener cette étude dans l’éthique, nous aurons besoin :
- D’une autorisation de recherche délivrée par la Fondation Virginia Henderson ;
- D’une clairance éthique ;
- D’une fiche de consentement et d’assentiment libre et éclairée de nos participants.
IV. BUDGET D’ÈTUDE
ressources Emplois montant
Ressources propres Clé USB 5000
Crédit de communication + 10000
Internet
Rames de papier formats A4 3500
Paquet de gants 10000
Frais de transport 20000
Matériels didactiques (stylos, 4000
crayon, calculatrice)
Boite de Pétrie 15000
Écouvillon 10000
Disque d’Antibiotique 25000
Milieu de culture (Chapman 50000
(MSA) et Mueller Hinton
Agar)
Impression 10000
Eau oxygénée 5000
imprévus 20000
Total 187500
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Prévalence et profil de résistance aux fluoroquinolones et aminosides des isolats de SARM
dans les sécrétions génitales de l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Yaoundé
V. CHRONOGRAMME DES ACTIVITÉS
PERIODE Mars Avril Mai Juin Juillet Août Septembre
2023 2023 2023 2023 2023 2023 2023
ACTIVITES
Rendu du
protocole
Revue de la
littérature
Obtention des
autorisations
Collecte des
données
Analyse des
données
Rédaction du
mémoire
Dépôt du
mémoire
Soutenance
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Prévalence et profil de résistance aux fluoroquinolones et aminosides des isolats de SARM
dans les sécrétions génitales de l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Yaoundé
REFERENCES
« Celbenin ». (12 oct 2015). resistant Staphylococci [Internet]. Récupéré sur Disponible sur:
[Link]
Avril, J.L., Dabernath, H., Denis, & F. (2000). Bactériologie clinique. Paris : Ellipses.
Benouda A, E. (2010). S. STAPHYLOCOCCUS Aureus : EPIDEMIOLOGIE ET
PREVALENCE DES SOUCH ES RESISTANTES A LA METHICILLINE (SARM)
AU MAROC. STAPHYLOCOCCUS AUREUS.
Bernier-Lachance, J. (s.d.). Prévalence et caractérisation de Staphylococcus aureus résistant
à la méthicilline d’origine aviaire au Québec:154.
CA-SFM. (2015). Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie:
recommandations 2015 V.2.0 Mai. CA-SFM EUCAST /2017. France.
CA-SFM. (2017). Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie:
recommandations 2017 V.2.0 Mai. CA-SFM EUCAST /2017. France .
DUVAL, J. (1989). Évolution des résistances. PARIS.
Kombaté, K., Dagnra, A., Saka, B., Mouhari-Toure, A., Akakpo, S., Tchangaï-Walla, K., &
Pitché, P. (2011). Prévalence de Staphylococcus aureus résistant à la méticilline. p. 68.
Lowy, F. (1 mai 2003;). Antimicrobial resistance: the example of Staphylococcus aureus.J
Clin Invest.
Luria, L. N., Julius, M. N., Celestin, R. A., Achiangia, P. N., Michel, K., Emile, M., . . .
Daniel, T. G. (2015). Prevalence and antibiotic resistance patterns of strains.
medadom. (2022). Récupéré sur STAPHYLOCOQUE DORÉ : DÉFINITION,
SYMPTÔMES, COMPLICATIONS ET PRÉVENTION.
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dans les sécrétions génitales de l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Yaoundé
OMS. (15 août 2015). Premier rapport de l’OMS sur la résistance aux antibiotiques: une
menace grave d’ampleur mondiale [Internet]. WHO. Récupéré sur
[Link]
staphylocoque aureus (staphylocoque doré) [Internet]. (2021, octobre 9). Récupéré sur
[Link]
Traore, C. Z., & S, K. D. (2019). Antibiorésistance des isolats de staphylococcus aureus de
patients hospitalisés et ambulatoires à Ouagadougou.
Vandepitte, V., E., k., P., P., H., & C.C. (1994). Bactériologie clinique : techniques de base
pour le laboratoire. Genève.
Winn, S., A., W., J., E., K., G., P., P., S., & G, W. (2006). Color Atlas and Textbook of
Diagnostic Microbiology (éd. Sixth Edition).
ZINZENDORF, N. Y., BABA-MOUSSA, L., OUASSA, T., CABLAN, A., LATHRO, J.,
EDOH, V., & LOUKOU, Y. G. (2013). PRODUCTION DE LEUCOTOXINES ET
RÉSISTANCE. Abidjan.
Zouagui, S., Bekkhoucha, S., Amhis, W., Abi-Ayad, R., Boubekri, I., Benmehdi, I., & Lazizi
A., L. A. (2015). Susceptibility of Staphylococcus aureus Clinical Isolates to Propolis
Extract Alone or in Combination with Antimicrobial Drugs. Molecules.
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ANNEXE
Annexe 1 : FICHE DE COLLECTE DES DONNEES
CODE DE LA SOUCHE : …………………………………………………………………….
Date de prélèvement : …………………………………………………………………………
DONNEES EPIDEMIOLOGIQUES
Sexe du patient : F M
Age :……………… Quartier :………………………
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Etat du terrain (Pathologie associée) :
Autres : …………………… ………………………………………………………………….
Automédication préalable : oui non
Si automédication, précisez
Antibiotique : médicament traditionnel :
Si automédication, par antibiotique, vous rappeler vous du nom de l’antibiotique ?
OUI NON
Si oui quel est le ou les noms de ces antibiotiques ?............................................
En déduire la classe (l’investigateur)……………………………………
Annexe 2 : Fiche de consentement Éclairé
Je soussigné(e) M. / Mme ………………………………………………………. Certifie avoir
lu et compris la note d’information qui m’a été remise et avoir eu la possibilité de poser toutes
mes questions. Je comprends les objectifs et les avantages liés à cette étude. J’accepte
librement et volontairement de participer à cette étude dans les conditions précisées de la note
d’information ; je pourrais à tout moment interrompre le contrat sans avoir à justifier ma
décision.
Fait à Yaoundé le…………………………………………
PARTICIPANT(E) INVESTIGATRICE PRINCIPALE
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Annexe 3 : Fiche d’assentiment libre
Je soussigné ………………………………………………………………………………
Parents/ tuteur légal de l’enfant ……………………………………………………….......
Après avoir reçu toutes les informations afférentes à l’étude sur Prévalence et profil de
résistance aux fluoroquinolones et aminosides des isolats de SARM dans les sécrétions
génitales de l’Hôpital Gynéco-Obstétrique et Pédiatrique de Yaoundé et compris l’importance
d’une telle investigation, je m’engage à faire participer mon enfant à cette étude.
En foi de quoi, je signe cet engagement pour servir et valoir ce que de droit.
Fait à Yaoundé le ………………………..
Signature du parent/tuteur de l’enfant Signature de l’investigatrice
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TABLE DES MATIERES
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