TPHA:
Le test TPHA (Treponema Pallidum Hémagglutination Assay) est un test sérologique sanguin utilisé pour
dépister la syphilis ; il détecte les anticorps spécifiques au Treponema pallidum, l'agent causal, en utilisant des
globules rouges sensibilisés qui s'agglutinent si les anticorps sont présents, indiquant une infection passée ou
actuelle et permettant d'évaluer son stade, bien qu'il soit souvent couplé à d'autres tests comme le VDRL pour
confirmer une infection active.
Principe : Il s'agit d'une hémagglutination [Link] globules rouges (souvent de mouton) sensibilisés
avec des antigènes de Treponema pallidum sont mélangés avec le sérum du [Link] présence d'anticorps
spécifiques (anti-T. pallidum), les globules rouges s'agglutinent, formant un motif visible.
Points importants:
Test spécifique de la syphilis .
Reste positif à vie, même après traitement.
Les réactifs et les matériels:
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Microplaque
TPHA Test Cells: Ce sont des hématies sensibilisées par des antigènes de Treponema
[Link] permettent de détecter la présence d’anticorps anti-tréponème par
agglutination.
🔹 TPHA Control Cells: Ce sont des hématies non sensibilisées. Elles servent à vérifier qu’il n’y a pas
d’agglutination non spécifique dans le sérum testé.
🔹 TPHA Diluent : C’est une solution tampon utilisée pour la dilution du sérum du patient. Elle assure
des conditions optimales de la réaction antigène-anticorps.
🔹 TPHA Positive Control :C’est un sérum contenant des anticorps anti-Treponema pallidum connus.
Il permet de vérifier le bon fonctionnement du test.
🔹 TPHA Negative Control : C’est un sérum sans anticorps anti-tréponème.
Il permet de confirmer l’absence d’agglutination en conditions normales.
Le procédure :
Pour chaque malade on travaille sur 3 puits :
Puit 1 : on met 190µL de Diluant+10µl sérum (dilution 1/20).
Puit 2 : on met 75µl de cellules contrôle. On lui ajout 25µl de sérum dilué.
Puit 3 : on met 75µl de cellules test. On lui ajout 25µl de sérum dilué.
2 puits pour le contrôle positif, un contient 75µl cellules contrôle et l’autre
contient 75µl cellules test chacun on lui ajoute 25µl du contrôle positif.
2 puits pour le contrôle négatif, un contient 75µl cellules contrôle et l’autre contient 75µl cellules test on lui
ajoute 25µl du contrôle négatif.
-On met la plaque sous agitation permanant pour 6 minutes.
- Incubation pour 40 à 45min à température ambiante dans l’obscurité.
Lecture des résultats :
Si les résultats sont positifs on doit effectuer des dilutions pour déterminer le titre.
Détermination de titre :
Le titre : “ Correspond au dernier puit où une agglutination est observée”. On procède à faire une série de
dilutions successif comme Laisser le 3éme puits vide et ajouter 25 µl de Diluant dans chacun des 8 puits
restants.
Transférer 25 µl de l’échantillon dilué de la 1ère cupule dans le puits vide et dans le 2ème puits.
Homogénéiser. Diluer en série le long de la ligne de puits en jetant les 25 µl excédentaires du puits final
Mélanger doucement les Cellules Test (R1) afin d’assurer une remise en suspension complète. Distribuer 75 µl
de Cellules Test (R1) dans chaque cupule. La plage de dilution finale des échantillons après addition de la
suspension de cellules est de 1\80 – 1\ 10240. Bien agiter.
Interprétation :
Calcule du titre :
-Pour le premier puit la dilution est de 1/20.
-Pour le 4eme puit, la dilution est ¼ (25 µL/25 µL+75 µL).
-Dans les autres puits on a effectué la dilution de ½.
Dans ce cas la plus haute dilution ayant donné une agglutination correspond à la 3éme puit donc le
titre est 320 pour ce patient.
NB : ce test doit toujours être couplé à un deuxième technique sérologique afin d’établir le
diagnostic avec certitude
Si le résultats est positive on effectuer des dillution pour déterminer le titre.