A
Ma Maman
Makam Sylvie
LISTES DES FIGURES
Figure 1: Types de tubes et ordre de remplissage, Laboratoire Hôpital Central Yaoundé................................
Figure 2: coloration de Gram, A: bacilles Gram positif, B: bacilles Gram négatif; (Modified from Atlas
RM: Principles of microbiology, St Louis, 2006, Mosby)................................................................................
Figure 3: Coloration de Ziehl, textbook of practical microbiology..................................................................
Figure 4: production de la pyocianine (coloration bleue) sur EMB par Pseudomonas aeruginosa,
laboratoire Hôpital central de Yaoundé............................................................................................................
Figure 5: galerie API20E BioMérieux, laboratoire Hôpital central Yaoundé...................................................
Figure 6: test DNase positif, laboratoire Hôpital central Yaoundé...................................................................
Figure 7: pousse de levure sur Sabouraud, laboratoire Hôpital central Yaoundé...........................................
Figure 8 : bouchons de champagne indiquant la présence de la BLSE, laboratoire Hôpital central
Yaoundé.............................................................................................................................................................
figure 9: A: VITEK 2 COMPACT Bio Mérieux, B: BACT ALERT Bio Mérieux, C : microscope
optique ; Laboratoire HCY...............................................................................................................................
figure 10: D: Autoclave; E: Étuve; F : Coulter HORIBA, Laboratoire Hôpital Central Yaoundé....................
figure 11: G: Coagulomètre; H: réalisation Antibiogramme Streptococcus spp, Laboratoire Hôpital
Central Yaoundé................................................................................................................................................
LISTE DES SIGLES ET ABREVIATIONS
ALAT : Alanine AminoTransferase
ASAT: Aspartate AminoTransferase
ATB: Antibiotique
ATCC: American type Culture Collection
BAAR: Bacille Acido-Alcoolo Résistant
BCC: Bouillon Cœur Cervelle
BLSE: Bêtalactamase à Spectre Étendu
CA-SFM : Comité d’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
CAMP: Christie, Atkins and Munch-Perterson
CLED: Cystéine Lactose Électrolyte Déficient
CRP : C-reactive Protein
ECBU : Examen Cytobactériologique des Urines
EDTA : Éthylène Diamine Tétra-acétique
ELISA : Enzyme Linked Immunosorbant Assay
EMB : Éosine Méthylène Bleu
EUCAST : European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing
FMSP : Faculté de Médecine et des Sciences Pharmaceutiques
HCT : Hématocrite
HCY : Hôpital Central de Yaoundé
ISTM : Institue Supérieur de Technologie Médicale
LDH : Lactate Déshydrogénase
NFS : Numération Formule Sanguine
PCV : Prélèvement Cervico-Vaginal
POS : Procédure Opératoire Standard
PSA : Prostatic Specific Antigene
SARM : Staphylococcus aureus Résistant à la méthicelline
SIDA : Syndrome immuno- déficience acquis
SS : Salmonella-Shigella
TCMH : Teneur Corpusculaire Moyenne en Hémoglobine
TPHA : Treponema pallidum Hemmaglutination Assay
TSH : Thyroid stimulating Hormone
UCAC : Université Catholique d’Afrique Central
VGM : Volume Globulaire Moyen
VIH : Virus immuno- déficience Humain
REMERCIEMENTS
Nous adressons nos remerciements à certaines personnes pour avoir contribué de près ou de loin à la
réussite de ce stage et à la rédaction de ce document, plus particulièrement au personnel administratif
et enseignant de la FMSP pour les efforts qu’ils ne cessent de fournir pour nous offrir une formation de
qualité et au personnel du laboratoire de l’HMR1 :
─ Pr. Roger NANFOSSO TSAFACK, Recteur de l’Université de Dschang ;
─ Pr. Pierre Siméon CHOUKEM, Doyen de la faculté de médecines et de sciences
pharmaceutiques de l’Université de Dschang ;
─ Pr. ZAMBOU François, Chef du département des sciences biomédicales ;
─ Pr. NOUBOM Michel, Chef de département de biologie clinique ;
─ Dr. EWODO, notre encadreur de niveau ;
─ Dr. NGOMTCHO pour la supervision au laboratoire et la facilitation de notre admission à la
banque de sang de l’HMR1 ;
─ Nos enseignants pour leur savoir-faire et savoir être qu’ils nous transmettent sans réserve ;
─ Colonel Dr. AYANMA, chef de service spécialisé de biologie et d’analyse medicale de
l’HMR1
─ Je remercie la major ASSENGUE Bernadette du laboratoire de l’HMR1 pour la
suivie et l’encadrement
─ Tout le personnel du laboratoire de l’HMR1 pour leur encadrement durant le stage ;
─ A tous nos collègues stagiaires pour l’atmosphère de confiance, d’amitié et le partage mutuel
des connaissances qui a régné entre nous tout au long du stage.
RESUME
Le métier de biologiste clinicien est un métier qui nécessite une parfaite fluidité tant sur le plan
théorique que pratique. Dans l’optique non seulement de se familiariser aux réalités du terrain du
biologiste clinicien mais aussi d’acquérir des aptitudes pratiques, nous avons effectué un stage d’une
durée de dix semaines au sein de laboratoire de l’HMR1, stage qui s’est déroulé du 06 février au 15
avril 2023. Nous étions au nombre de 12 venant de master I Biologie clinique de la FMSP de
l’Université de Dschang, le travail débutait à 7h 30 de lundi à vendredi pour finir à 15h30 et le travail
les samedi et dimanche était volontaire. Nous avons parcouru les services du prélèvement, de
bactériologie, l’immunologie, la biochimie, l’hématologie, la banque de sang et la parasitologie. Nous
étions également tenus de participer à l’élaboration du bilan statistique mensuel du laboratoire, à la
révision et l’élaboration des POS, de passer les commandes des réactifs et consommables et de
participer à la gestion de stock de ces derniers. Du fait du manque de certains services, équipements et
appareils, certains objectifs n’ont pas été atteints. Toutefois, le stage a été d’un très grand apport aussi
bien sur le plan théorique que pratique.
INTRODUCTION
La biologie clinique occupe une place importante dans le processus de prise en charge des patients,
elle intervient notamment dans le dépistage, le diagnostic biologique et suivi de nombreuses
pathologies avec la collaboration des médecins et infirmiers. En plus du milieu hospitalier, elle est très
impliquée dans les recherches pharmaceutiques, le développement des vaccins, la production agricole
et animale etc. Mais ceci reste plus effective beaucoup plus dans les pays développés et quelques rares
pays Africains qui ont su profiter des grands avancés qu’a connu la science ces dernières décennies.
Dans le contexte de notre pays des efforts restent à fournir dans la création des centres de recherche,
des laboratoires de référence et l’équipement de nos laboratoires hospitaliers ceci dans le but de
produire de résultats de qualité afin d’accéder à l’accréditation et valoriser la place du biologiste
clinicien au sein du laboratoire. L’Université de Dschang particulièrement la faculté de médecine et
des sciences pharmaceutiques dans sa mission, se donne pour objectif d’offrir les meilleures
formations à ses étudiants pour répondre non seulement aux normes nationales mais internationales
également en ce qui concerne la biologie clinique afin d’être à la hauteur des attentes en termes
d’innovation des techniques de diagnostic de différentes pathologies en milieu hospitalier pour une
meilleure prise en charge du patient. C’est d’ailleurs l’une des principales raisons de notre descente sur
le terrain pour une durée de dix semaines, du 06 Février au 15 Avril 2023 jà l’HMR1 pour toucher du
bout de doigt les réalités du biologiste clinicien en milieu hospitalier et acquérir des aptitudes
pratiques. Nous avons mené et assisté plusieurs activités au sein du laboratoire sur les différentes
paillasses que nous allons présenter en phase pré-analytique, analytique et post-analytique et enfin
présenter nos différentes contributions personnelles à l’amélioration de la structure.
OBJECTIFS DU STAGE
Les étudiants du Master Niveau I pour valider la partie pratique de leur stage doivent travailler les
postes de Bactériologie, de Virologie, de Parasitologie-mycologie, d’hématologie, Banque de Sang,
Sérologie, de Biochimie et d’Histologie-cytologie pathologie.
Les objectifs généraux du stage sont axés sur la maîtrise des techniques dans tous les services du
laboratoire d’analyses médicales. En effet les étudiants doivent pendant la durée de leur stage:
1. Participer dans la gestion du laboratoire dans son ensemble
2. Participer à la gestion des stocks, commandes et approvisionnement des réactifs et
consommables de laboratoire
3. Participer au montage des postes de manipulation et à l'installation du matériel dans les
services
4. Participer à la maintenance préventive des appareils et opérations de métrologie (températures
et volumes essentiellement).
5. Participer à la rédaction des Procédures opératoires standards, mise en oeuvre de ces
procédures et à la réalisation des examens de laboratoire.
6. Maîtriser l'organisation des phases pré-analytique, analytique, post-analytique,
7. Participer à la gestion des déchets dans le laboratoire,
8. Se renseigner sur le processus d'accréditation des laboratoires
9. Participer à la gestion et l’exploitation des contrôles de qualité internes et externes
A. STAGE PRATIQUE DE BACTERIOLOGIE
1. Objectifs généraux :
Maîtriser des règles d'hygiène et de sécurité dans un laboratoire de microbiologie,
Maîtriser toutes les techniques de diagnostique dans le laboratoire
Interpréter et la valider les résultats microbiologiques,
Connaître et la pratique de la démarche assurance qualité dans un laboratoire de
microbiologie,
Acquérir les facultés d'intégration au sein d'équipes de chercheurs, publication de travaux
scientifiques
2. Objectifs spécifiques :
Faire la préparation, stérilisation et répartition de milieux complexes
Réaliser les cultures bactériennes dans tous les milieux ordinaires comme spécifiques
Réaliser les antibiogrammes tenant en compte les espèces bactériennes
Réaliser les identifications bactériennes en tenant en compte les techniques (automatisées
ou manuelles)
Faire des identifications en utilisant les mini-galeries classiques.
Préparer et çbntrôler la qualité des milieux de culture en bactériologie.
Faire des interprétations diagnostiques des infection d'origine bactériennes
Faire le diagnostic bactériologique d’infections d’origine bactérienne.
Rédiger un mode opératoire dans le laboratoire de Bactériologie
B. STAGE PRATIQUE DE VIROLOGIE
1. Objectifs généraux :
Savoir réaliser les techniques de diagnostic d’un examen virologique,
Contrôler la prescription des examens virologiques,
Maîtriser la pratique analytique au laboratoire de virologie,
Maîtriser les différentes techniques de confirmation, d’évaluation pronostique et de suivi
virologique en fonction des circonstances pathologiques cliniques et au laboratoire de
virologie,
Savoir interpréter les résultats selon l'organigramme diagnostic, pour des infections virales
commune
Maîtriser la validation biologique, l'assurance qualité (ISO 15 189, ISO 17 025),
Connaître les risques virologiques inhérentes au prélèvement et à la manipulation d'un
échantillon virologique
Maîtriser le risque professionnel et les aspects médico-légaux.
2. Objectifs spécifiques :
Savoir recueillir, réaliser, conditionner et acheminer différents prélèvements de différentes
natures et localisations anatomiques
Savoir régler correctement un microscope à immunofluorescence
Savoir réaliser, lire et interpréter un diagnostic direct (qualitatif et/ ou quantitatif) d’une
infection virale
Expliquer les principes, réaliser, lire et interpréter les différents tests de contrôle de qualité
au sein d'un laboratoire de virologie
Savoir réaliser et valider différents tests virologiques en urgence
C. STAGE PRATIQUE DE PARASITOLOGIE MYCOLOGIE
1. Objectifs généraux :
Maîtrise des techniques de Diagnostic des parasitoses
Maîtrise des techniques de Diagnostic des mycoses
Identification des Helminthes d'importance médicale
Identification des champignons d'importance médicale
2. Objectifs spécifiques :
Identifier les parasitoses digestives et du sang, des urines et autres produits biologiques.
Identifier les principaux champignons d’intérêt médical
Maîtriser les techniques de diagnostic immunologique parasitaire et fongique
D. STAGE PRATIQUE D’HEMATOLOGIE ET IMMUNOLOGIE
1. Objectifs généraux :
Interpréter et commenter les résultats des examens ;
Apporter un conseil sur les stratégies thérapeutiques.
Détailler le mode opératoire des prélèvements d'échantillons biologiques propres à chaque
sous-domaine de l’hématologie (hématologie cellulaire, hémostase et banque de sang;
Détailler le principe, l'intérêt, les limites et les indications des techniqucs d’examens
hématologiques ;
Identifier avec précision les cellules sanguines et les pathologies pouvant les toucher ;
2. Objectifs spécifiques :
Maîtriser l’usage d’une micropipette
Savoir réaliser les dilutions en série
Réaliser les tests de diagnostic rapides immuno-chromatographiques sur cassettes ou
bandelettes (VIH, HBSAg.)
Réaliser les tests d’agglutination (Widal, ASLO, CRP,...)
Réaliser un test ELISA
Être capable d'identifier les cellules immunitaires dans un frottis sanguin
Identifier les cellules sanguines
Diagnostiquer les pathologies hématologiques
Former au diagnostic des anomalies hématologiques constitutionnelles
Former aux techniques de diagnostic immunologique en hématologie
E. STAGE PRATIQUE DE BIOCHIMIE
1. Objectifs généraux
Etre apte à expertiser les prescriptions d’actes de biochimie quant à leur pertinence, et les
résultats des analyses, test et exploration, quant à leur cohérence avec les processus
métaboliques explorés
Connaitre les principales techniques de dosages et d’utilisation des procédés de
reconnaissance (notamment chimiques, enzymatiques et immunologiques)
Maîtriser les outils de l’assurance de qualité en biochimie
Savoir faire le choix d'un système analytique et validation de techniques
Maîtriser les instruments et les systèmes analytiques ;
Maîtriser les notions d’organisation d’un secteur de biochimie ;
Acquérir les principes méthodologiques de la recherche clinique ;
Fabrication de colorants cytochimiques, immunologiques, contrôle de pH
2. Objectifs spécifiques
Apprendre à utiliser les résultats des analyses et tests biochimiques en vue de fournir une
aide au diagnostic, au pronostic et au suivi thérapeutique,
Former à apprécier les critères d’évaluation des marqueurs biochimiques et à être interlocuteur
des cliniciens prescripteurs dans les démarches diagnostiques et thérapeutiques pour
l’exploration des pathologies du métabolisme biochimique.
Savoir décrire la stratégie des examens à effectuer et indiquer pour chaque examen l’intérêt
diagnostique, pronostique et/ou thérapeutique dans les situations suivantes.
Etre capable de maîtriser le degré d’urgence d’une prescription d’analyses biologiques et
connaître les règles d’éthiques indispensables à la prise en charge des patients (sujets en
réanimation, perturbations électrolytiques et acido-basiques, facteurs de risque et pathologies
cardiovasculaires...)
Connaître les méthodes et principes généraux suivants, principales méthodes de mesures
(notamment optiques, électrochimiques, spectrométriques) principales techniques séparatives
(notamment chromatographiques, électrophorétiques) principales techniques de dosages et
d’utilisation des procédés de reconnaisssance (notamment chimiques, enzymatiques et
immunologiques)
Maîtriser les outils de l’assurance de qualité en biochimie :
Savoir faire le choix d’un système analytique et validation de techniques
Maîtriser les instruments et les systèmes analytiques ;
Maîtriser les notions d’organisation d’un secteur de biochimie ;
Acquérir les principes méthodologiques de la recherche clinique ;
F. STAGE PRATIQUE D’ANATOMIE PATHOLOGIE
1. Objectifs généraux
Connaître le processus de réalisation du frottis cervico vaginale ;
Connaître la coloration de papanicolaou ;
Connaître la coloration de May grumwald giemsa ;
Connaître la coloration à l’hematoxillineeosine ;
Connaître le procéder de confection d’une lame d’histologie ;
Maîtriser le processus de réception d'un prélèvement histologique et cytologique ;
G. STAGE PRATIQUE DE BIOLOGIE MOLECULAIRE
I. Objectifs généraux
Moléculaire et les équipements de protection individuelle à arborer sur chaque paillasse ;
Maîtriser le circuit des échantillons destinés à une analyse moléculaire ;
Maîtriser les différentes paillasses d’un laboratoire de Biologie moléculaire ;
Maîtriser les appareillages utilisés dans un laboratoire de Biologie Moléculaire ;
Maîtriser l’usage d’une micropipette ;
Maîtriser le calcul des volumes, des concentrations, des quantités de matière en solution et la
composition d’un mélange réactionnel ;
Maîtriser les techniques d’inactivation des agents pathogènes (notamment des virus) ;
Maîtriser les techniques d’extraction ou d’isolation de l’ADN/ARN ;
Pouvoir réaliser l’électrophorèse sur gel d’agarose et sur gel de polyacrylamide ;
Savoir programmer un thermocycleur ;
Savoir visualiser/identifier les produits d’une PCR dans un gel sous UV via un
transluminateur;
Maîtriser l’usage de l’ordinateur pour l’analyse et l’interprétation des résultats d’une
amplification moléculaire.
E. STAGE PRATIQUE DE TRANSFUSION SANGUINE
1. Objectifs généraux
S’approprier la loi de 2003 sur la TS au Cameroun ;
Identifier les textes règlementaires de la TS au Cameroun, décrire le système transfusionnel
camerounais ;
Définir les Points forts et les Points faibles du Système dans la Promotion du Don de sang au
Cameroun
Identifier et classer les Différents types de Donneurs de sang rencontres au Cameroun ;
Mener l’interrogatoire et Effectuer l’examen médical pré don pour la Sélection des donneurs ;
Effectuer l’information pré et post don ;
Citer les Critères d‘Exclusion au don ;
Décrire et Prendre en charge les Incidents et les Accidents chez les Donneurs de sang lors du
don ;
Décrire le cadre réglementaire et l’aspect psycho sociologique du Don de sang au Cameroun ;
Décrire et Reproduire les techniques de prélèvement du don de sang (Aphérèse / Sang total) et
pratiquer au moins 20 prélèvements de donneurs de sang ;
Participer à la planification, l’organisation et la mise en œuvre d’une collecte mobile de sang
(cas échéant)
Décrire le processus et les techniques de préparation des PSL ;
Identifier les Infections transmissibles par transfusion, décrire leur épidémiologie, leurs
manifestations cliniques, leur technique de dépistage et leurs implications en transfusion
sanguine ;
Décrire le processus et les techniques de Qualification biologique des Dons ;
Organiser et Mener une séance de Counseling post test avec les Donneurs infectés ; structures
spécialisées pour leur prise en charge,
Définir les Notions de Risque résiduel et de Fenêtre sérologique des transmissibles par
transfusion ;
Décrire le processus et les techniques de Conservation, Distribution et Transport des Produits
sanguins ;
Définir les Notions théoriques de base en immuno-hématologie à mettre en pratique durant le
Stage ;
Décrire les différents systèmes de groupes sanguins et leur implication en transfusion sanguine
au Cameroun ;
Déterminer les groupages sanguins ABO/D et phénotypage Rhésus/kell sur
plaque d’opaline, en tube et gel filtration (cas échéant) ;
Citer les différents tests de compatibilités et leurs applications en fonctions des PSL puis
les pratiquer ;
Déterminer les vigilances (matério-vigilance, reacto-vigilance, hemovigilance) en TS et leurs
applications et identifier les difficultés y afférentes.
I. PRESENTATION DE L’HOPITAL MILITAIRE REGION 1
1. LOCALISATION
L’HMR1 est situé dans la région du Centre, dans la ville de Yaoundé, département de
Mfoundi, arrondissement de Yaoundé III et bien précisément entre ministère de la défense et le
boulevard de la Réunification.
Figure 1 : Présentation de l’entrée de l’HMR1
2. HISTORIQUE
Août 1993 : Création de l’Hôpital Militaire de Yaoundé par décret n°93/213 du 04 août 1993 portant
création et organisation des Formations hospitalières militaires. En ce moment-là, il est un
commandement et non un service, mais reste inactivé. Un Commandant de l’Hôpital Militaire de
Yaoundé est cependant nommé et travaille avec un comité restreint à la structuration de l’institution.
En 1994, Activation du Commandement de l’hôpital Militaire de Yaoundé
Etat des lieux :
L’hôpital, qui alors, résulte de la fusion de l’Infirmerie de Garnison et du Centre Médical militaire de
Yaoundé, hérite des deux bâtiments qui abritaient les deux premières structures et s’enrichit d’un
bâtiment nouveau à trois niveaux. Il est alors doté de onze services spécialisés.
En 2001, suite aux grandes réformes qu’ont connues les Forces de Défense, l’Hôpital Militaire de
Yaoundé change d’appellation et devient l’Hôpital Militaire de Région n°1. Il devient à l’occasion un
service et se voit nommer son tout premier médecin-Chef.
De 2001 à nos jours plusieurs autres bâtiments y ont vu le jour, permettant ainsi à l’Hôpital de voir
croitre considérablement sa capacité. L’HMR1 dispose de 32 services spécialisés organisé comme
suite :
Figure 2 : Organigramme de l’HMR1
3. PRESENTATION DU SERVICE SPECIALISE DE BIOLOGIE ET D’ANALYSES
MEDICALES
Le laboratoire de l’Hôpital Militaire Régional 1 partage le pavillon C avec deux embranchements de
l’Imagerie Médicale (Echographie, Scanner), la Réanimation, Banque de sang.
Le laboratoire d’analyse médicale est subdivisé en plusieurs sous sections (paillasses) : Une salle de
prélèvement, une grande salle, constituée de la paillasse d’Hématologie, Immuno-sérologie et celle de
Biochimie, une banque de sang, une salle pour la parasitologie et le laboratoire de Bactériologie
a- Le prélèvement
Le prélèvement en analyses médicales est la clé de réussite d’un bon diagnostic. Une fois que le
patient remplit les conditions de prélèvements, et fois que ce dernier se fait dans des conditions
adéquates, le patient est sûr de rentrer avec son résultat, bien sûre à condition que l’analyse soit bien
faite.
Pour ce qui est du prélèvement à l’HMR1, il existe deux salles de prélèvement :
Une salle pour prélèvement sanguin : elle est constituée de 05 chaises, deux tables,
deux registres et le matériel pour le prélèvement.
Une salle de prélèvement pour PCV, PU, PV, recherche de mycoplasme et
spermogramme.
b- Biochimie/Immuno-sérologie/ Hématologie
Ces trois unités sont réunies en un bloc car ils ont tous un point commun : la manipulation du sang
total, le sérum et/ou le plasma. Subdivisé en trois, cette salle contient des automates d’Hématologie,
ceux de biochimie et également ceux d’immunologie ; trois frigos ; une grande étagère
compartimentée en fonction des différentes paillasses que regroupe la salle, ainsi que les autres
consommables.
c- Parasitologie
Ce service comporte deux salles, dont une servante généralement de salle repos et l’autre servante de
salle de manipulation. On y retrouve un distillateur, trois microscopes, dont un seul utilisable, des
réactifs en grand nombre pour les colorations en parasitologie et en anatomopathologie.