Application de l’interaction rayonnement

matière

Le microscope
optique
 Introduction

La microscopie est un ensemble de techniques d’imagerie

des objets de petites dimensions.

L’appareil utilisé pour rendre possible cette observation

est appelé un microscope.

Il existe différents types de microscopes et la physique

qui est concernée n’est pas la même.

La physique qui est derrière les différents types de

microscopes est fondée sur des effets électriques,
magnétiques, optiques, électroniques, ioniques,
photoniques, quantiques (tunnel), etc.

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On distingue principalement trois types de microscopies:

I- Microscope optique: interaction d’un faisceau lumineux

avec l’objet.

II- Microscope électronique: interaction d’un faisceau

électronique avec l’objet.

III- Microscope à sonde locale: un capteur sonde

directement la surface de l'objet. On peut citer le
microscope à force atomique (AFM), le microscope à
effet tunnel, microscope optique en champ proche, etc.

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Toutefois, il est possible de comparer les valeurs
caractéristiques des microscopes comme :

 Le grossissement

 Le pouvoir de résolution déterminé par la distance

minimale pour distinguer les images de deux points
séparés.

 La netteté des images

 La valeur des aberrations sphériques des lentilles.

 L’angle d’ouverture

 La longueur d’onde des émissions utilisées

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 Le microscope optique est appelé aussi microscope
photonique parce qu'il utilise des photons.

 Le microscope est un instrument que l’on utilise pour

l’examen d’objets trop petits pour être visibles à l’œil
nu.

 L’œil humain ne peut distinguer des objets d’une taille

inférieure à 0,1 mm (100 m).

 Le microscope optique donne une image grandie d’un

objet en général transparent.

 Les observations au microscope demandent une

préparation de l’échantillon, et certains réglages du
microscope.
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Composantes mécanique du microscope optique

 Une base.

 Une potence qui supporte le revolver porte-objectif, le

tube porte-oculaires.

 La platine qui se déplace dans deux/trois dimensions.

 Le support du condensateur.

 Des systèmes de crémaillères permettent de réaliser

une mise au point rapide et fine. Différente mécaniques
existent pour réaliser ces réglages.

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 Composantes optiques du microscope optique

Les objectifs sont les éléments les plus critiques d'un

microscope. Ils déterminent sa qualité optique.

Un objectif est un système à lentille convergente plus ou

moins complexe avec une distance focale
courte, qui projette l'image agrandie et inversée de
l'échantillon vers le plan focal inférieur de
l'oculaire, de sorte que celui-ci puisse "voir" et grossir
encore l'image.

Les objectifs sont placés dans une tourelle porte-

objectifs ou tourelle revolver qui comporte six ou sept
objectifs avec des grossissements différents.

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Il existe un certain nombre de constantes :

 l’ouverture numérique ou l’angle maximum sous lesquels

les rayons issus de l’objet peuvent pénétrer dans le
système optique.

 Le grandissement.

 Contraste de phase ou pas.

 Immersion.

 Longueur du tube.

 Epaisseur de la lamelle couvre-objet.

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 Principe du microscope optique

L’échantillon est éclairé par une lampe. Les molécules

à observer vont interagir avec la lumière de plusieurs
façons :

Soit en absorbant certaines longueurs d'onde de la

lumière. C'est la microscopie en lumière directe.

Soit en provoquant un déphasage des différents rayons

lumineux. C'est la microscopie en contraste de phase.

Soit en émettant de la lumière à une autre longueur

d'onde que celle d'origine. C'est la microscopie à
fluorescence.

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 L’objectif transforme l’objet en une image réelle.
 L’image se forme au plan focal d’un oculaire qui va
pouvoir en donner ensuite une image virtuelle située à
l’infini.
 Le grossissement de l’appareil dépend :
- des objectifs;
- des oculaires;
- des distances qui séparent les composants.

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 Tête optique
Les oculaires

La tourelle
porte-objectif

platine Le condenseur

Le diaphragme de champ
La molette de mise au point

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  La tête optique
Elle renferme le système optique des oculaires à
l’objectif, porte la sortie trinoculaire et la tourelle
porte-objectif.

Les oculaires
Ensemble de plusieurs lentilles, assimilable à une
loupe à fort grossissement. Il grossit l’image fournie
par l’objectif. Ils sont généralement caractérisés par
deux chiffres qui sont le grossissement et l’indice de
champ.
La tourelle porte-objectif
La tourelle (ou revolver) peut accueillir 3 ou 4
objectifs selon le modèle de microscope. Ceux-ci sont
simplement vissés sur la tourelle et peuvent être
facilement changés.
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La molette de mise au point
Elle nous permet de régler la netteté de l’image d’un
échantillon.
Le condenseur
Constitué d’une lentille, le condenseur est l’élément qui
concentre et dirige le faisceau de lumière sur
l’échantillon.

Il est situé sous la platine du microscope et peut être

déplacé vers le haut ou vers le bas, donc plus ou moins
proche de la platine. Son bon réglage est très important.

Le diaphragme de champ

Il contrôle la taille du champ éclairé sur l’échantillon.
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Les objectifs
 Ce sont des pièces
maîtresses du microscope.

 Ils donnent une image

réelle, inversée et agrandie
de l’objet.

 Ce sont des éléments essentiels dans la constitution

des images.
 Ils sont définis par leur ouverture numérique, capacité
à capter les rayons lumineux diffractés (envoyés
obliquement pour simplifier à l’extrême) par l’objet
éclairé.
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 Les objectifs sont définis par plusieurs
caractéristiques, certaines étant gravées sur la
monture de l’objectif.
 L’objectif d’un microscope fonctionne de la même
manière qu’un objectif photo.

 C’est un système de lentilles qui collectent la lumière

renvoyée par un objet pour la focaliser sur un plan,
point par point, afin de créer une image de l’objet qui
sera grossie par les lentilles de l’objectif et des
oculaires.
 Un oculaire est caractérisé par le grossissement,
l’ouverture numérique et le pouvoir séparateur .

De la qualité de l’objectif dépend la qualité de l’image.

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 Ouverture numérique

M1_UBMA Prof. S. Alleg 17 05/04/2020

 Plus l’angle de capture est grand, plus les objectifs sont
aptes à montrer les petits détails.

 L’ouverture numérique, ON, est donné par la

formule suivante :

ON = n sin α

Cette expression indique la largeur maximale du cône de

lumière pénétrant dans la lentille.

Où n est l’indice de réfraction du milieu dans lequel

travaille l’objectif .

L'ouverture numérique est directement proportionnelle à

l'indice de réfraction n du milieu situé entre l'échantillon
et la lentille de l'objectif.
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n=1 pour l’air ;
n= 1,515 pour le verre ordinaire ;
n= 1,515 ou 1,518 pour l’huile à immersion.

α est l’angle formé par l’axe de l’objectif et les rayons

extrêmes le traversant et participant à la formation
de l’image.

 Plus l’objectif grandit l’image, plus ON augmente.

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L’ouverture numérique est une dimension sans unité qui
caractérise les objectifs de microscope.

L’ouverture numérique représente la gamme d’angles

pour laquelle l’objectif est capable d’émettre et de
recevoir de la lumière.

Ce paramètre influence WD, la profondeur de champ

et le pouvoir séparateur de l’objectif.

Plus l’ouverture numérique est élevée, plus WD et la

profondeur de champ sont faibles et plus le pouvoir
séparateur est important.

M1_UBMA Prof. S. Alleg 20 05/04/2020

 Profondeur de champ
La profondeur de champ correspond à l’épaisseur de
l’échantillon pour laquelle l’image est nette.

Plus le grossissement est grand, moins la profondeur de

champ est importante.

Champ observé
Le champ observé (plage d’observation) dépend de l’indice
de champ de l’oculaire et correspond sur l’échantillon au
diamètre (en mm) de la zone que vous pouvez voir à
travers les oculaires.

M1_UBMA Prof. S. Alleg 21 05/04/2020

L’indice de champ des oculaires est le deuxième chiffre
présent sur l’oculaire.
- Par exemple, des oculaires avec l’inscription 10X/22
indiquent un indice de champ de 22 mm.

Pour calculer le champ observé, il suffit de diviser l’indice

de champ de l’oculaire par le grossissement de l’objectif
utilisé.

Exemple: pour un indice de champ des oculaires de 20,

avec l’objectif 4X, alors le diamètre de la zone
observée est égal à 20/4 soit 5 mm

Plus le grossissement est important, moins le champ

observé est grand.
M1_UBMA Prof. S. Alleg 22 05/04/2020
 Distance de travail
La distance de travail (working distance, WD) est la
distance entre l'objectif et l’échantillon pour laquelle
l’image est nette.
WD dépend de l’ouverture numérique de l’objectif.

 Calcul du grossissement
Le grossissement de ce que est observé est égal au
grossissement des oculaires multiplié par le
grossissement de l’objectif utilisé.
Grossissement = Gobjectif x Goculaires

Par exemple, pour un microscope dont les oculaires

grossissent 10X et l’objectif utilisé grossit 4X , le
grossissement final est égal à 10×4=40X.
M1_UBMA Prof. S. Alleg 23 04/04/2020
 Le grandissement
Le grandissement est le rapport entre la taille de l’image
formée par l’objectif et la taille réelle de l’objet.

Le terme grossissement désigne un rapport entre des

valeurs angulaires et non entre des valeurs linéaires.

Un anneau de couleur permet d’identifier le grandissement de l’objectif.

M1_UBMA Prof. S. Alleg 24 05/04/2020
Code coloré d’identification des grandissements des
objectifs pour microscope
Grandissement Code coloré
1x Noir
2x Marron
4x Rouge
10x Jaune
20x Vert
40x Bleu clair
50x Bleu clair
60x Bleu cobalt
100x Blanc
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Le pouvoir séparateur ou résolution
C’est la capacité d’un objectif à distinguer deux points
distincts.

L’œil a la capacité de distinguer des particules d'un

diamètre pouvant atteindre 0.1 μm.
Les particules doivent être séparées entre elles d'une
distance d'au moins 5 μm. Le pouvoir séparateur de
l’œil est de 5 μm.

M1_UBMA Prof. S. Alleg 26 05/04/2020

Il est définie comme la distance angulaire minimale entre
deux éléments qui permet d’en obtenir deux images
distinctes.

La résolution maximale qu’il est possible d’obtenir

aujourd’hui en microscopie optique est de 0,24 µm,
c’est-à-dire que l’on peut distinguer sur un échantillon
deux points distants l’un de l’autre de 0,24 µm.

Si deux points sont distants l’un de l’autre de seulement

23 µm, ils seront alors vus comme un seul point.

La qualité d’un microscope ne dépend pas du

grossissement mais du pouvoir séparateur.

M1_UBMA Prof. S. Alleg 27 05/04/2020

 Aberration chromatique
La lumière blanche qui passe à travers une lentille se
décompose en différentes  (différentes couleurs) qui ne
se projettent pas sur le même plan focal. C’est ce que
l’on appelle une aberration chromatique.
Certains objectifs peuvent corriger cette aberration. On
les appelle objectifs achromatiques (corrigés sur deux
couleurs) et apochromatiques (corrigés sur trois couleurs).

M1_UBMA Prof. S. Alleg 28 04/04/2020

L'image intermédiaire est tracée en vert. L'image finale est tracée
en jaune. Si celle-ci se forme dans le plan focal objet de l'oculaire,
l'image finale est située à l'infini.

Objectif x5 Oculaire x5

M1_UBMA Prof. S. Alleg 29 04/04/2020

Oculaire x5

Objectif x2,5 Objectif x5 Objectif x10

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Objectif x5
Image intermédiare en vert Image finale en jaune

Oculaire x5 Oculaire x10

M1_UBMA Prof. S. Alleg 31 04/04/2020

 Formation de l’image

 L’objet est transformé en une image

réelle à l’aide d’un objectif.

 L’image se forme au plan focal

d’un oculaire qui va pouvoir en
donner ensuite une image virtuelle
située à l’infini .

M1_UBMA Prof. S. Alleg 32 06/04/2020

M1_UBMA Prof. S. Alleg 33 06/04/2020
M1_UBMA Prof. S. Alleg 34 06/04/2020
 L'objectif assimilable à une lentille convergente de
petite distance focale 𝒇′𝟏 , son rôle est de faire
converger la lumière issue de l'objet observé à
l'intérieur du tube du microscope.

 L’objectif donne d'un objet AB situé en avant de son

foyer objet une image réelle A'B’.

 L'oculaire est assimilable à une lentille convergente

de distance focale 𝒇′𝟐 de quelques centimètres. Il est
utilisé comme une loupe.

 L’oculaire convergent permet d'observer l’image

intermédiaire.

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 ∆= 𝐹′1 𝐹2
𝑓′1 𝑓′2

O1 O2
Objet F1 F’1 F2 F’2

Lentille objectif Lentille oculaire

 La distance focale de l’objectif 𝒇′𝟏 = 𝑶𝟏 𝑭′𝟏 .

 La lentille objectif est de très courte distance focale (𝑓′1 est très petit).

 La distance focale de l’oculaire 𝒇′𝟐 = 𝑶𝟐 𝑭′𝟐 .

 La lentille oculaire a une distance focale de l’ordre de quelques cm.

 La distance qui sépare les deux lentilles ou intervalle

optique est notée ∆= 𝑭′𝟏 𝑭′𝟐 .
M1_UBMA Prof. S. Alleg 36 04/04/2020