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11 vues13 pagesTechniques de Microscopie et Applications
Les microscopes utilisent la magnification à travers des lentilles ou des faisceaux d'électrons pour observer des organismes microscopiques. Les microscopes optiques utilisent la lumière visible et des lentilles pour magnifier jusqu'à 1000x, tandis que les microscopes électroniques utilisent des faisceaux d'électrons et peuvent atteindre une magnification de plus de 100 000x. Les principes clés de la microscopie optique incluent la magnification à travers des lentilles objectives et oculaires, une résolution de 0,2 µm permettant l'observation de structures bactériennes mais pas virales, et diverses techniques comme le contraste de phase, le champ sombre et la fluorescence qui augmentent le contraste. Les microscopes électroniques offrent une résolution et une magnification encore plus élevées.
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Les microscopes utilisent la magnification à travers des lentilles ou des faisceaux d'électrons pour observer des organismes microscopiques. Les microscopes optiques utilisent la lumière visible et des lentilles pour magnifier jusqu'à 1000x, tandis que les microscopes électroniques utilisent des faisceaux d'électrons et peuvent atteindre une magnification de plus de 100 000x. Les principes clés de la microscopie optique incluent la magnification à travers des lentilles objectives et oculaires, une résolution de 0,2 µm permettant l'observation de structures bactériennes mais pas virales, et diverses techniques comme le contraste de phase, le champ sombre et la fluorescence qui augmentent le contraste. Les microscopes électroniques offrent une résolution et une magnification encore plus élevées.
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Techniques de microscope
Microscopes
Microscopes
–Outil le plus important pour
étudier les micro-organismes
Utilisez une lumière viable pour observer
objets
–Agrandir les images
environ 1 000x
Microscope électronique
introduit en 1931, peut
agrandir des images au-delà de
100 000x
Microscope à sonde de balayage
introduit en 1981, peut voir
atomes individuels
Principes de la microscopie optique
Microscopie optique
La lumière passe à travers l'échantillon, puis à travers
series of magnifying lenses
–Le plus courant et le plus facile à utiliser est le brillant-
field microscope
Les facteurs importants dans la microscopie optique incluent
Magnification
Résolution
•Contraste
Principes de la microscopie optique
Grossissement
Le microscope a deux lentilles d'agrandissement
• Microscope composé
•Lentille incluse
–Lentille oculaire et lentille objective
La plupart des microscopes à champ clair ont quatre grossissements d'objectif
objectifs, 4x, 10x, 40x et 100x
Les lentilles se combinent pour agrandir les objets
•Magnification is equal to the factor of the ocular x the objective
–10x X 100x = 1,000x
Principes de la microscopie optique
Résolution
Utilité du microscope
dépend de sa capacité à
résoudre clairement deux objets
qui sont très proches l'un de l'autre
La puissance de résolution est définie
comme la distance minimale
existant entre deux
objets où ces objets
apparaître encore comme séparés
objets
La puissance de résolution détermine
combien de détails peuvent être vus
Principes de la microscopie optique
Résolution
La résolution dépend de la qualité des lentilles et
longueur d'onde de la lumière d'illumination (filtre bleu donne
la meilleure résolution
Combien de lumière est libérée par la lentille
–La puissance de résolution maximale de la plupart des microscope à champ clair
les microscopes est de 0,2 μm (1 μm = 1x10)-6M)
Cela suffit pour voir la plupart des structures bactériennes (>1um)
Trop petit pour voir les virus (< 0,3 um)
Principes de la microscopie optique
•Exemples de microscopes optiques qui augmentent
contraste
Microscope à contraste de phase
Microscope d'interférence
Microscope à champ obscur
Microscope à fluorescence
Microscope laser à balayage confocal
Principes de la microscopie optique
Phase-Contrast
Utilise des lentilles spéciales pour amplifier les différences entre
indices de réfraction des cellules et du milieu environnant
Utilise un ensemble d'anneaux et de diaphragmes pour atteindre la résolution
Principes de la microscopie optique
Microscope à champ sombre
–Image inversée
L'échantillon apparaît lumineux sur un
fond sombre
–Comme une photographie
négatif
–Atteint l'image à travers un
condenseur modifié
Principes de la microscopie optique
Microscope à fluorescence
–Utilisé pour observer des organismes
qui sont naturellement fluorescents
ou sont marqués avec des fluorescent
teinture
La molécule fluorescente absorbe
lumière ultraviolette et émet visible
lumière
•L'image fluoresce dans l'obscurité
arrière-plan
Principes de la microscopie optique
Microscope Électronique
–Utilise des lentilles électromagnétiques, des électrons et
écran fluorescent pour produire une image
–La résolution augmentée de 1 000 fois par rapport au champ clair
microscope
•À environ 0,3 nm (1 nm = 1x10-9M)
–La magnification augmentée à 100 000x
–Deux types de microscopes électroniques
Transmission
Numérisation
Principes de la microscopie optique
Microscope Électronique de Transmission
(TEM)
–Utilisé pour observer des détails fins
–Dirige un faisceau d'électrons sur l'échantillon
•Les électrons passent à travers ou se dispersent à
surface
–Montre des zones sombres et claires
Zones plus sombres plus denses
Préparation d'échantillons par
Tranchage mince
Fracture par congélation ou gravure par congélation
Principes de la microscopie optique
Microscope électronique à balayage
(SEM)
Utilisé pour observer les détails de surface
Un faisceau d'électrons scanne la surface de
spécimen
Spécimen recouvert de métal
– En général de l'or
–Les électrons sont libérés et
réfléchi dans la chambre de vision
–Certains microscopes atomiques capables
de voir des atomes uniques