UNIVERSITE M’HAMED BOUGARA
BOUMERDES
FACULTE DES TECHNOLOGIE
Compte Rendu de TP n°03
Caractérisation chimique des
protides et des substances
azotées
Présenté par :
-LOUALI LINA
-BOULESSANE MAROUA
-LAOUFI DONIAZED
1-INTRODUCTION
Les protéines et les autres substances azotées occupent une place
centrale dans les systèmes vivants, où elles assurent des fonctions
variées telles que la catalyse, le transport, la communication
cellulaire et le maintien des structures biologiques. Leur identification
et leur caractérisation sont donc essentielles pour comprendre leur
rôle biochimique et leurs interactions dans les milieux biologiques.
L’objectif de ce TP est d’explorer différentes méthodes qualitatives
permettant de mettre en évidence la présence des protides dans une
solution. À travers plusieurs réactions colorées spécifiques ainsi que
des tests de précipitation, nous étudierons la réactivité chimique des
protéines et des acides aminés vis-à-vis de réactifs classiques tels que
le CuSO₄, l’acide nitrique ou encore la ninhydrine. Ces techniques
simples mais efficaces constituent des outils fondamentaux en
biochimie analytique pour l’identification des molécules azotées.
2-But du TP
Le but de ce TP est de mettre en évidence la présence des protides et des
substances azotées dans différentes solutions à l’aide de réactions chimiques
spécifiques. Il s’agit d’identifier qualitativement les protéines et certains acides
aminés en utilisant :
des réactions colorées permettant de révéler la liaison peptidique et
différents groupements fonctionnels (aromatiques, indole, phénol,
guanidyle) ;
des méthodes de précipitation caractérisant la dénaturation et
l’insolubilisation des protéines sous l’effet de la chaleur, des acides forts,
des solvants ou des métaux lourds.
Ce TP vise ainsi à familiariser l’étudiant avec les principales techniques de
détection des protides et à comprendre leur comportement physico-chimique
en solution.
Parte théorique :
Réaction à la Ninhydrine
la ninhydrine est un réactif largement utilisé en biochimie pour la détection
qualitative des acides aminés libres et, dans une moindre mesure, des
peptides courts. C’est un composé oxydant puissant capable de réagir avec la
fonction α-amine des acides aminés pour produire une coloration
caractéristique permettant leur mise en évidence.
➤ Structure et propriétés de la ninhydrine
La ninhydrine (trikétohydrindène hydraté) possède une structure fortement
oxydante. Elle est généralement dissoute dans l’éthanol pour améliorer sa
stabilité et sa solubilité.
➤ Principe de la réaction
Quand un acide α-aminé réagit avec la ninhydrine en milieu chauffé, plusieurs
transformations se produisent :
1. Décarboxylation de l’acide aminé → libération de CO₂
2. Désamination → libération de NH₃ (ammoniac)
3. Oxydation de la ninhydrine → formation d’un dérivé réduit
4. Le NH₃ libéré réagit avec la forme oxydée de la ninhydrine → formation
d’un complexe violet intense appelé :
✔ Pourpre de Ruhemann (coloration violette caractéristique)
Cette couleur violette est le signe de la présence d’acides aminés libres.
➤ Cas particuliers
Les iminoacides (proline, hydroxyproline) ne possèdent pas de fonction
amine primaire → ils donnent une coloration jaune.
Les peptides longs réagissent faiblement car la fonction amine n’est pas
libre.
Les protéines entières donnent parfois une coloration légère uniquement
si une hydrolyse partielle libère des acides aminés.
➤ Intérêt de la réaction
La réaction à la ninhydrine est :
simple,
sensibile (trace d’acides aminés suffit),
rapide,
spécifique des acides α-aminés.
Elle est utilisée en :
biochimie (détection QUALITATIVE),
chromatographie sur papier,
analyse d’urines,
dépistage d’acides aminés anormaux,
contrôle de pureté.
La ninhydrine est un réactif spécifique des acides aminés libres. Elle réagit
avec la fonction amine en donnant un complexe violet (pourpre de Ruhemann)
après chauffage. Les iminoacides donnent du jaune. Cette réaction permet de
révéler qualitativement la présence d'acides aminés dans une solution.
3-Matériel et Réactifs :
Solutions protéiques : ovalbumine, solutions inconnues A et B
Lessive de soude (NaOH 30% / 10%)
Sulfate de cuivre CuSO₄ (1 %)
Acide nitrique HNO₃ concentré
Réactif de ninhydrine (0,5 %)
Acide glyoxylique
Acide sulfurique H₂SO₄ concentré
Résultats
Solution testée Observation Interprétation
Ovalbumine coloration violette présence d’acides aminés
Solution A violet présence d’acides aminés
Solution B violet présence d’acides aminé
Discussion
La coloration violette obtenue pour les trois solutions indique
clairement que les échantillons contiennent des acides aminés ou des
groupements aminés libres. La réaction a bien suivi le mécanisme
attendu : oxydation de l’acide aminé, libération d’ammoniac, puis
formation du complexe coloré. Aucune coloration jaune n’a été
observée, ce qui suggère l’absence d’acides aminés secondaires tels
que la proline ou l’hydroxyproline dans les solutions testées.
Les résultats concordent donc avec les propriétés connues des
protéines et confirment la fiabilité de la ninhydrine comme test
qualitatif.
CONCLUSION
Ce TP nous a permis d’identifier la présence des protéines et des
acides aminés grâce à différentes réactions chimiques. Les
tests colorés ont montré que les solutions étudiées contiennent bien
des liaisons peptidiques et certains groupements caractéristiques des
acides aminés. Les réactions de précipitation ont confirmé la nature
protéique des échantillons par leur dénaturation sous l’effet de la
chaleur, des acides, des solvants et des métaux lourds.
Ainsi, ce travail nous a permis de mieux comprendre les propriétés
chimiques des protides et les méthodes utilisées pour les reconnaître
en biochimie.