ÉLECTROPHORÈSE SUR acétate de cellulose
Introduction
L’électrophorèse est une méthode de séparation des molécules chargées électriquement (comme les
protéines, les acides aminés ou les acides nucléiques) sous l’action d’un champ électrique.
Lorsqu’un courant traverse une solution contenant ces molécules, celles-ci migrent vers l’électrode de
charge opposée : les molécules négatives vers l’anode (+) et les positives vers la cathode (–).
L’électrophorèse sur acétate de cellulose utilise une fine bande de plastique recouverte d’acétate de
cellulose comme support de migration.
Cette technique est largement utilisée en biochimie clinique pour séparer les protéines sériques, les
hémoglobines, ou encore certains enzymes, car elle est simple, rapide et peu coûteuse.
1-Définition
L’électrophorèse sur acétate de cellulose est une technique de séparation électrophorétique où le
support de migration est une feuille d’acétate de cellulose, souvent de 0,1 mm d’épaisseur.
Sous l’effet d’un champ électrique appliqué entre deux électrodes, les molécules présentes dans un
échantillon (comme le sérum) migrent à travers ce support selon :
• leur charge électrique (positive ou négative),
• leur poids moléculaire,
• et le pH du milieu (qui influence la charge nette des molécules).
Cette technique repose donc sur le principe fondamental selon lequel les molécules se déplacent à des
vitesses différentes en fonction de leurs caractéristiques électriques et structurales.
2-Types d’électrophorèse sur acétate de cellulose
Il existe plusieurs variantes selon le pH du tampon et le type d’analyse :
a) Selon le pH :
• Électrophorèse en milieu alcalin (pH ≈ 8,6)
➜C’est la plus courante.
ÉLECTROPHORÈSE SUR acétate de cellulose
À ce pH, la plupart des protéines (comme les protéines sériques) portent une charge négative et migrent
vers l’anode.
➜Elle permet de séparer les principales fractions protéiques : albumine, α1-globulines, α2-globulines, β-
globulines et γ-globulines.
➜Aussi utilisée pour le diagnostic des anomalies de l’hémoglobine (HbA, HbS, HbC, etc.).
• Électrophorèse en milieu acide (pH < 7)
➜Moins fréquente.
Certaines protéines ou enzymes ayant un point isoélectrique bas nécessitent un milieu acide pour une
meilleure séparation.
b) Selon l’objectif :
• Électrophorèse qualitative :
Sert à observer le profil de migration et détecter d’éventuelles anomalies.
• Électrophorèse quantitative :
Accompagnée d’un densitomètre, elle permet de mesurer la proportion de chaque fraction.
3-Matériaux utilisés
Pour réaliser l’électrophorèse sur acétate de cellulose, on utilise :
•Support : bande ou feuille d’acétate de cellulose (souvent 6 x 7 cm).
•Tampon électrophorétique : solution conductrice permettant la migration des ions (ex. tampon
barbiturique à pH 8,6).
•Échantillons : sérum, hémolysat ou extrait protéique.
•Micropipette ou peigne d’application : pour déposer avec précision de petits volumes
d’échantillon.
•Cuve d’électrophorèse : contenant les électrodes reliées à une source de courant continu
(100 à 200 V).
•Colorants : Bleu de Coomassie, Noir Amido, Ponceau S… pour révéler les bandes.
•Solutions de fixation et de décoloration : pour fixer les protéines et éliminer l’excès de
colorant.
ÉLECTROPHORÈSE SUR acétate de cellulose
•Densitomètre (facultatif) : pour mesurer la densité optique des bandes et obtenir des
valeurs quantitatives.
4-Techniques (Étapes expérimentales)
1. Préparation du support : la bande d’acétate est découpée à la taille voulue, puis imbibée dans le
tampon pour permettre la conduction du courant.
2. Application des échantillons : à l’aide d’une micropipette ou d’un peigne, on dépose une
petite quantité de chaque échantillon sur la ligne de départ (environ 1 cm du bord).
3. Migration : le support est placé dans la cuve d’électrophorèse.
On applique une tension électrique (généralement entre 150 et 200 volts).
Les protéines migrent vers l’électrode opposée selon leur charge.
La migration dure en moyenne 20 à 40 minutes, selon le protocole.
4. Coloration : après la migration, on plonge la bande dans le colorant pour rendre visibles les
bandes de protéines.
5. Décoloration et fixation : on élimine l’excès de colorant pour faire ressortir les bandes
nettes.
Le support est ensuite séché pour conservation
6. Lecture et interprétation : on observe les bandes (à l’œil ou avec un densitomètre).
Chaque bande correspond à une fraction protéique différente.
Exemple : albumine (bande la plus mobile), α1, α2, β, γ-globulines.
ÉLECTROPHORÈSE SUR acétate de cellulose
5-Avantages et inconvénients
Avantages :
• Technique rapide, simple et économique.
• Ne nécessite pas de matériel très sophistiqué.
• Utilise de petites quantités d’échantillon.
• Donne un résultat visuel clair et immédiat.
• Idéale pour le diagnostic de routine (protéines sériques, hémoglobines).
Inconvénients :
• Résolution faible comparée à d’autres supports (gel d’agarose, SDS-PAGE).
• Support fragile (risque de déchirure ou d’assèchement).
ÉLECTROPHORÈSE SUR acétate de cellulose
• Quantification peu précise sans densitomètre.
• Difficile de récupérer les fractions pour des analyses ultérieures.
• Sensible à la température et à l’humidité.
Références Bibliographiques
1-Google(Wikipedia)
2- [Link]