SPECTROSCOPIE DE MASSE
I- Généralités
1- But :
établir les masse moléculaires
établir la structure des substances
2- Principe
Echantillon gazeux ionisé avec énergie suffisante
M M + e
Ions radicaux
Accélération des ions dans une chambre d’ionisation et d’accélération
Analyseur d’ion : sépare les ions en fonction de m/e à l’aide
d’un champ magnétique B
Détecteur
La spectroscopie de masse est capable de trier les éléments en fonction du
rapport charge électrique par la masse de l'élément (rapport e/m).
Il suffit de combiner l'action d'un champ électrique et d'un champ magnétique.
On introduit des ions positifs entre deux plaques à différent potentiel: il
s'ensuit une accélération des ions. Leur énergie cinétique est alors: Ec = e.V
(avec e la charge de l'ion et V la différence de potentiel entre les deux
plaques).
3) Partie constituantes
une source d’ions
un analyseur qui sépare les ions selon le rapport m/e. La
spectroscopie de masse est capable de trier les éléments en fonction du
rapport masse de l'élément par la charge électrique.
un détecteur qui donne l’intensité du faisceau ionique correspondant à
chaque espèce.
un système électronique.
un système de pompage.
II- Ionisation - Fragmentation
Ionisation dans la chambre d’ionisation
Plusieurs méthodes d’ionisation en fonction de
- l’état physique et de volatilité
- stabilité thermique du produit
impact électronique
thermoionisation
désorption de champ
désorption laser
Bombardement atomique
Composés organiques de PM élevé
bombardement ionique
Fragmentation
Ionisation : M + e M + 2e
fragment neutre
M fragment ionique + radical, atome, molécule
BC
B + fragment neutre
D + fragment neutre
Au cours d’une fragmentation la charge se localise sur le fragment
possédant le potentiel d’ionisation le plus faible
BC B + C
PI (B) < PI (C) B >> C
CH3 O H
CH3 O H m
e = 32
H m
CH3 C O H e = 31
H
H C O +H H
III- Méthodes d’ionisation
1- Ionisation par impact électronique
Méthode la plus ancienne et la plus utilisée
Le composé est volatilisé dans la chambre d’ionisation et les particules
gazeuses sont soumises au bombardement électronique et transformés
en ions positifs
M + e M + 2e
2) Les autres méthodes d’ionisation
a) Ionisation par photon
photons générés par des lampes puissantes ou des lasers
exemple de lasers : lasers à CO2, Ar, N2
Ions formés : fonction de la longueur d’onde, puissance du lasers et
de la présence au non de matrices : M+ ; (M + H)+ ; (M + Na)+…
b) Source FAB
méthode utilisée pour des échantillons solides
l’échantillon est bombardé par des particules neutres Ar, Xe, Cs…
ions formés :
(M + H)+ : quasimoléculaire
ions positif et négatifs
Peu de fragmentation
c) Ionisation chimique
On introduit dans la source un gaz qui réagit avec le composé
gaz : NH3, CH4, isobutane
ions : (M + H)+ = M+1 (M + NH4)+ = M+18 NH3
(M + H)+ = M+1 (M + C2H5)+ = M+29 CH4
(M + H)+ = M+1 (M + C3H7)+ = M+43
Isobutane
(M + C4H9)+ = M+57
IV- Analyseur de masse
1- analyseur à secteur magnétique
ions subit l’action de
- la force magnétique F = e.v.B
- force centrifuge mv2/r
d’autre part l’ion est accéléré à l’intérieur de la source selon la
vitesse v et acquiert une énergie
E = e V = ½ mv 2 v = (2eV/m)1/2
m/e = B2 r2 / 2V
Si r et V constantes, B est uniquement fonction de m
En faisant varier B, on peut faire passer successivement au
collecteur les ions de masse différentes
2- analyseur à temps de vol
3- analyseur à résonance cyclotronique
4- analyseur quadripolaire
V- Exploitation des données
1) Type d’ions
monochargés XY+
polychargé XYn+
ions monoatomique M+
ions polyatomiques XY+
ions moléculaire XY , M formés à partir de XY
ions fragments X+ / Y+
ions réarrangements XRY+ à partir de XYR
ions métastables : ions formés après la source d’ions
ionssecondaires : formés suite aux réactions entre différents et molécules
2) Types de pics
Pic moléculaire M
Attention, il n’est pas toujours présent
Pics de fragmentation
important pour établir la structure
pics de réarrangement
générés par les ions dont au moins un atome a subi un déplacement
pics des ions métastables
pic de base : pic qui sert à normaliser le spectrogramme, en général c’est
le pic le plus important, on lui attribue l’abondance 100%
pic isotopiques : présence des isotopes des éléments
permet de déterminer la formule brute
Multiples : ils sont formés par les ions ayant les mêmes masses
nominales
Ex. :
P+1/P P+2/P
12C16O : 27,9949 1,12 0,2
14N : 28,0064 0,76
2
12C 1H : 28,0312 2,23 0,01
2 4
Si manque de « haut résolution », solution avec l’aide de (P+1)/P et (P+2/P)
Exemples de fragmentations
O O
+e + 2e
m/e = 72
O
O
O
CH3 + O CH3
+ H2C
15 u m/e = 57
m/e = 43 29 u
O O
+e
C C C O
- 2e - NH2
NH2 NH2
m/e = 105
M+ m/e = 121
- CO
C6H5
O C NH2
m/e = 44
m/e = 77
Différents types de fragmentations
I- coupure simple
1-
C C C + C
Ion nb impair d’e ion nb pair d’e + radical neutre
Ex:
C7H16 C6H13 + CH3
m / e = 100 m/e = 85
2-
C C C C + C C
Ion nb pair d’e ion nb pair d’e + molécule neutre
C6H13 C4H9 + H2C CH2
m/e = 85 m/e = 57
3-
C C C C C C C + C
Coupure allylique cation nb pair d’e + radical neutre
4- coupure en β d’un hétérocycle aromatique
CH2 R CH2 + R
CH+
tropylium m/e = 91
II- Réarrangements
1-
C X
Cn C
Cn + HX
C
C H
Exemple : élimination d’eau, hydracides…
2-migration d’hydrogène par effet « ortho »
B R B
O
+ O R
H H
A A
Noyau aromatique ou double liaison cis
Migration d’hétéroatome
H H
C C C C C + C
X
3- Mac Lafferty
Ion avec liaison multiple et H en γ de cette liaison.
H
H R
γA R A
+ CH
B C B
β C
α H
R H
γ CH H
O O
CH2 + R CH CH2
β CH
CH2 H H 2C
α
Lois de fragmentation
1- la hauteur de pic moléculaire M est maximale pour les chaînes
linéaires et diminue avec les ramifications.
2- dans une série la hauteur de M diminue quand M augmente.
3- les ruptures se font préférentiellement au niveau des atomes les plus
substitués.
4- les doubles liaisons, cycles et hétéroatome stabilisent l’ion M+.
5- les doubles liaisons favorisent les ruptures allyliques
H2C CH CH2 CH2
6- les cycles ont tendance à perdre leurs substituant
7- dans les structures de type benzyle Ar-CH2-R la rupture se fait en
α,β donnant l’ion Ar-CH2+ stabilisé.
8- les ruptures se font facilement en α d’un hétéroatome laissant la charge
du coté de l’hétéroatome formant ainsi un ion « onium » stabilisé
R
R O CH2 N CH2
R'
9- les ruptures conduisant à la formation de molécules neutres telles
que CO, C2H5, H2O, NH3, H2S, HCN, sont favorisées.
10- règle de parité des pic: Pour les molécules contenant O ou 2n
atomes d’azote : radicaux sont impairs; molécules ionisées sont paires
Spectre de masse obtenu en EI de l’alcool p-
nitrobenzylique
Axe des ordonnées : Abondance relative (AR %) par rapport au
pic le plus intense appelé pic de base
OH pic de base (100%)
O
N
O
Axe des absisses :
Rapport “ masse sur charge” : m/z
1ère approche pour l’interprétation d’un spectre
1./ Identification des pics parasites dus au mode d’échantillonage et
au mode d’ionisation
2./ Identification du pic moléculaire ou pic apparenté
3./ Analyse des fragments
3.1./ analyse du pic le plus intense
3.2./ nombre de pics de fragmentation
3.3./ distribution des pics
4./ Analyse des satellites isotopiques
1./ Identification des pics parasites dus au mode d’échantillonage et
au mode d’introduction de la substance dans la chambre
d’ionisation
– En “ionisation chimique” : pics du gaz ionisant
– En FAB et MALDI, pics de la matrice
– Si couplage GC-MS : dérivés silylés provenant du
vieillissement (bleeding) de la phase stationnaire
– Si couplage LC-MS : pics des impuretés du solvant
– ……..
1./ Identification des pics parasites dus au mode
d’échantillonage et au mode d’ionisation
Exemple : le spectre en FAB d’un dipeptide (masse = 212) ,
matrice = “magic bullet”
* = pic de la matrice
2./ Identification du pic moléculaire ou pic apparenté
– En impact électronique (EI), le pic moléculaire est un radical-
cation provenant de l’arranchement d’un électron à la molécule
neutre : M+ •
La notation M+ • signifie qu’il s’agit de la molécule entière (après
perte d’un électron), qu’elle est chargée positivement (+), et
qu’elle comporte un électron non apparié (•)
! Il est parfois invisible dans le spectre
- En “ionisation chimique” (CI), apparition d’ions pseudo-moléculaires
suite
à l’ajout d’un proton sur M : (M+H)+ (masse : M+1) (en mode
positif)
ou à la perte d’un proton : (M-H)- (masse : M-1) (en mode
négatif)
- En “Electrospray” (ESI), apparition d’ ions moléculaires
multichargés : (M+zH)z+ avec z > 1.
Ils apparaissent à des valeurs de m/z plus faibles que M
Déconvolution
!! Le pic à rechercher diffère selon la technique d’ionisation
2./ Identification du pic moléculaire ou pic apparenté
Le pic moléculaire ou pic apparenté est généralement le plus lourd ou,
si présence de satellites isotopiques, presque le plus lourd.
Avec des techniques d’ionisation tels que FAB, MALDI, APCI, …peuvent
apparaître de pics correspondant à des dimères (2M) ou trimère (3M)
voire des adduits de M avec des ions présents (Ex : M+Na, ….)
Identification du pic moléculaire M+• sur un spectre
obtenu en impact électronique
Spectre de masse obtenu en EI de l’alcool p-nitrobenzylique (MM = 153)
pic moléculaire M+•
m/z = 153
(abondance 85%)
OH
O
N
O
Identification du pic moléculaire MH+ sur un spectre
obtenu en ionisation chimique
Spectre de masse obtenu en CI de l’alcool p-nitrobenzylique (MM = 153)
OH pic pseudo-moléculaire MH+
M+1 : m/z = 154
(abondance 100%)
O
N
O
3./ Analyse des fragments
La fragmentation génèrent des pics de masse inférieure à M
Le type de fragments, leur abondance, leur nombre, leur
distribution est caractéristique de la molécule
Fragments
OH
O
N
O
3./ Analyse des fragments
3.1./ Analyse du pic le plus intense
Le pic de base sur lequel est normalisée l’intensité de tous les
autres pics correspond à la formation du fragment le plus
probable donc le plus facile à former lors de l’ionisation de la
molécule
3.2./ Nombre de pics de fragmentation
Si le spectre présente un faible nombre de pics :
* Soit, la molécule présente des faiblesses dans sa structure.
Le moindre apport d’énergie casse la molécule, tjs au
niveau des mêmes liaisons.
* Soit, la molécule possède une structure qui est capable
d’emmagasiner de l’énergie avant de se casser (doubles
liaisons, cycles aromatiques). Dans ce cas, le pic moléculaire
devrait être visible, voir assez intense
3.3./ Etude de la distribution en masse des fragments
Il existe des “règles de fragmentation” qui permettent d’identifier
une substance inconnue à partir de l’étude de sa fragmentation.
Ex : Au sein d’une série homologue, l’intensité du pic moléculaire
décroît lorsque la masse moléculaire augmente
4./ Analyse des satellites isotopiques
Les isotopes naturels génèrent des pics de masse supérieure
- à la masse moléculaire M (satellites M+1,M+2,…)
- à la masse de chaque fragment
L’abondance de ces satellites isotopiques est caractéristique de leur
composition.
OH
Satellites isotopiques
O
N
O
Récapitulatif sur l’identification
d’un composé à partir d’un SM
Identification du * Formule brute :
Analyse des Nombre et nature des
pic moléculaire satellites atomes de la molécule
Identification du à haute
pic moléculaire isotopiques ** Formule développée
résolution
= structure :
Façon dont les atomes
sont agencés
MM
Formule Formule
brute* développée**
Comparaison
Remarque : Analyse des de spectres à
Un spectre de masse l’aide d’une banque
ne donne aucune
fragments
indication sur la disposition de données
spatiale de la molécule
(stéréochimie)