UNIVERSITÉ NATIONALE MAJOR DE SAN

MARCOS
(Université du Pérou, Doyenne de l'Amérique)

FACULTÉ DE CHIMIE, INGÉNIERIE CHIMIQUE

DÉPARTEMENT ACADÉMIQUE DE CHIMIE ORGANIQUE

Laboratoire de produits naturels

Pratique N° 2

Pratique triterpénoïdes : saponines triterpénoïdales

Tour lundi 9-13h

Intégrants :
Melendez Cabrera Ronal 02070033
Ochoa Rojas William 10070003
Sánchez Romani Ruth Rosemary 11070166
Valentín Carhuancho Rocio Lizeth 13070158

Professeur Gloria Eva Tomas Chota

Fecha de Entrega : 1–10–2017

 TABLA DE CONTENIDO

I. Introduction………………………………………………3

II. Principes théoriques……………………………………….4

III. Détails expérimentaux………………………………..6

IV. Réactions chimiques…………………………………..8

V. Résultats……………………………………………….10

VI. Discussion des résultats………………………………..14

VII. Conclusions…………………………………………….15

VIII. Recommandations………………………………………16

IX. bibliographie………………………………………………..17

X. appendice…………………………………………………..18

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 I. INTRODUCTION

Les saponines sont des hétérosides (sucre + sapogénines) qui se caractérisent par leur
capacité à produire de la mousse lorsqu'une solution aqueuse qui les contient est agité.
forme une mousse car les saponines diminuent la tension superficielle de l'eau. Sont
par conséquent tensioactifs naturels. L'utilisation qui a été faite des saponines est très large
se distinguant dans l'industrie pharmaceutique en raison de leurs différents types d'action. Ils offrent
bénéfices pour la santé tels que réduire le cholestérol, possèdent des propriétés
anticancéreux, ont des propriétés antioxydantes, renforcent le système immunitaire, etc.

L'objectif de cette pratique est de vérifier la présence de saponines dans un échantillon.

à travers des tests physiques et chimiques caractéristiques pour la reconnaissance des saponines.

II. PRINCIPES THÉORIQUES

Saponines

On appelle saponine un groupe de glycosides qui se dissolvent dans l'eau et

diminuent la tension superficielle de celle-ci, par conséquent, en secouant ses solutions, on forme
une mousse abondante et relativement stable. Par hydrolyse des saponines, on obtient
glucides et des aglycones, appelés génériquement sapogénine, qui peuvent avoir
un squelette stéroïdien (type colano) comme l'esmilagénine, ou triterpène ou type β-amirine
comme dans la chichipegenina.

Figure 1. Sapogénines à squelette stéroïdien et triterpénoïde

Les saponines sont des substances polaires, et il est possible de les extraire à chaud ou à froid avec de l'eau.
les alcools de faible poids moléculaire. Les matériaux lipoïdes présents dans ces extraits
se séparent avec du benzène. En concentrant la solution alcoolique, les saponines se séparent et
ensuite, les mélanges d'alcool-eau se cristallisent.

Pour obtenir des sapogénines, on peut hydrolyser les saponines avec leurs enzymes naturelles,
avec des enzymes d'origine microbiologique ou en les hydrolysant avec de l'acide chlorhydrique ou de l'acide sulfurique
(ce dernier est préféré pour les sapogénines insaturées). Ensuite, on extrait les
saponines, qui sont peu polaires, avec du benzène, de l'éther de pétrole ou de l'acétone et
recristallisent.

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5
 III. DÉTAILS EXPÉRIMENTAUX
Matériaux
o2 verres de 250 mL
10 tubes à essai
o2 baguettes
pipette Pasteur
oPropipeta
Mortier et pilon
mixeur

Réactifs
Acide acétique (3 gouttes). Réactif toxique
Anhydride acétique (5 mL). Réactif contrôlé
Acide sulfurique (5 mL). Réactif contrôlé
Chloroforme. Réactif toxique
quinoa moulue
Boliche moulu
Avoine moulue

Procédure

1) Test de la mousse
. On a ajouté une petite quantité de quinoa dans un tube à essai,
avena et boliche, et on y a ajouté de l'eau distillée.
. Le tube a été soumis à une agitation vigoureuse pendant 30 secondes.

2) Réactif de Salkowski
. Une petite quantité d'échantillon a été ajoutée à un tube de...
sayo et ensuite on lui a ajouté 1 mL de H2ALORS4cc y 5 gouttes d'anhydride
acétique avec l'aide d'une pipette Pasteur.

3) Variante A de Réaction de Salkowski

. Une petite quantité d'échantillon a été ajoutée à un tube de...
sayo, suivi de 1 mL de chloroforme.
. On a ajouté de l'anhydride acétique refroidi avec une pipette Pasteur.
une goutte de H2DONC4(cc).

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4) Variante B de Réaction de Salkowski
. Une petite quantité d'échantillon a été ajoutée à un tube de ...
sayo, suivi de 1 mL de chloroforme.
. On a ajouté 1 mL de H2ALORS4cc.

5) Réactif de Liebermann –Burchard

. On a ajouté 5 gouttes d'acide à une petite quantité d'échantillon.
acétique dans un tube à essai.
. Ensuite, 3 mL d'AC ont été ajoutés.2O/H2ALORS4(50:1) avec l'aide d'une
pipette Pasteur.

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 IV. RÉACTIONS CHIMIQUES

1. Réaction de Salkowski

Merveille (quinua) + H2ALORS4+ Ac2O (gouttes)

Jaune à rouge → présence de saponine

 8

2. Réaction de Liebermann-Burchard

Mélange + HOAc (gouttes) + Ac2O / H2DONC4(3 mL) => rouge groseille

Muestra + Ac2O + H2ALORS4

 9
V. RÉSULTATS

1. Test de la mousse

On a prélevé des aliquotes des échantillons, à chacune on a ajouté une petite quantité de
de l'eau et a été agité vigoureusement pendant 30 secondes, on a trouvé cela :

-Boliche : Présente une grande quantité de mousse persistante.

-Quinua: Présenté peu de mousse
Avoine : je présente peu de mousse
 Réactif de Salkowski

Après avoir ajouté de l'acide sulfurique concentré et des gouttes d'anhydride acétique à chacune
des aliquotes disponibles et laisser reposer pendant 20 minutes, il a été observé :

-Boliche : Couleur rouge sang, la solution incolore. POSITIF POUR SAPONI-

NAS.
-Quinoa : Bien que l'échantillon ne se soit pas coloré, la solution a pris une légère tein
jaune. POSITIF POUR LES SAPONINES
Avoine : Bien que l'échantillon ne se soit pas coloré, la solution a pris une légère couleur.
jaune POSITIF POUR SAPONINES.

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3. Variante A de reacción de Salkowski

Afin de déterminer la présence de saponines triterpéniques ou de saponines stéroïdales, on

Ils ont dissous les aliquotes de chaque échantillon dans du chloroforme et ont ajouté de l'anhydride acétique congelé.
et une goutte d'acide sulfurique concentré ; on laissa reposer 30 minutes et on observa :

Boliche : Coloration violet-rouge intense. POSITIF POUR SAPONINES TRITERPENIQUES.

NICAS.
-Quinoa : Un anneau jaunâtre s'est formé en haut. POSITIF POUR SA-
PONINES TRITERPÉNIQUES.
 -Avoine : Un anneau jaunâtre s'est formé sur le dessus. POSITIF POUR LE CRAPAUD
NINAS TRITERPENIQUES.

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4. Variante B de réaction de Salkowski
Les aliquotes ont été dissoutes dans du chloroforme et de l'acide sulfurique concentré a été ajouté.
trouvé :

-Boliche : Présente une coloration rougeâtre. POSITIF POUR LES SAPONINES.

-Quinua: Presento coloración cafe. POSITIVO PARA SAPONINAS
-Avoine : Présente une coloration brun. POSITIF POUR LES SAPONINES
 12

5. Réactif de Liebermann-Burchard

On a ajouté une solution 50:1 d'anhydride acétique : acide sulfurique et quelques gouttes d'acide.
acétique à chacune des aliquotes disponibles ; aucun changement de coloration n'a été observé,
C'est pourquoi une lampe UV a été utilisée afin de faire une meilleure observation.

-Boliche : Coloration jaunâtre. POSITIF POUR SAPONINES TRITERPÉNOÏDES-

LES.
-Quinoa : aucune coloration n'a été perçue.
-Avena: Coloration rosée. POSITIF POUR LES SAPONINES TRITERPÉNOÏDALES.

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VI. DISCUSSION DES RÉSULTATS

Dans l'essai de la mousse, le boliche a présenté une mousse abondante et celle-ci était
persistante dans le temps, le quinoa et l'avoine ont présenté une mousse pas si abondante
mais si persistante. Cela nous indique la présence de saponines en grandes quantités.
des dans le bar, en petite quantité dans le quinoa et dans l'avoine.

En utilisant le réactif de Salkowski, une coloration rouge sang a été obtenue dans le boli-
che, qui indique la présence d'une structure stéroïdienne, base de la saponine.
 L'avoine et le quinoa ont présenté une coloration jaune, ce qui est également positif.
pour les saponines, mais en moindre concentration. Cependant, il n'est pas possible de déterminer
nar si cette saponine est triterpénique ou stéroïdienne.

La réaction Variante A de la réaction de Salkowski permet de différencier une saponine

triterpénique de la stéroïdal, en se basant sur la couleur du produit. Dans notre cas,
par cette réaction, la présence de saponines triterpéniques a été déterminée car
le produit de la réaction était une bague de couleur rouge-groseille dans le bistrot; la qui-
nua et l'avoine ont présenté un anneau fin de couleur jaune foncé. Pour les cua-
trois échantillons se sont révélés positifs pour saponine triterpénique.

La réaction Variante B de la réaction de Salkowski permet également de différencier un

saponine triterpénique stéroïdienne, en se basant sur la couleur du produit. Dans nos-
tro cas, par cette réaction, la présence de saponines stéroïdales a été déterminée
donne-leur dans les 3 échantillons car le produit de la réaction était de couleur brun foncé, le
cela indique la présence de saponines stéroïdales.

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VII. CONCLUSIONS

Les saponines (saponines stéroïdiennes) sont des métabolites largement distribués.

buidos en el reino vegetal y se caracterizan por la diversidad de sus formas.

La concentration de saponines ne dépend pas seulement de l'espèce et de la sous-espèce

 analysée, si ce n'est de la zone où les plantes sont cultivées. En analysant
muestras de diferentes marcas comerciales se suelen encontrar resultados
très différents.

On conclut à la présence de saponines dans les échantillons végétaux analysés.

La variante de Salkowski A nous donne la référence de quelle classe de saponine il s'agit.

peut trouver et cela indique qu'il s'agit d'une saponine triterpénique car cela
obtint une coloration rougeâtre

Le test de Liebermann-Burchard nous indique la classe de saponine qui se

il a, mais présente des interférences avec d'autres structures organiques avec des anneaux
aromatiques ou doubles liaisons conjuguées.

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VIII. RECOMMANDATIONS

Pour mieux observer les colorations des réactions, qui indiquent la présence de
saponines, il faut attendre un certain temps pour mieux observer les couleurs.

En la prueba de Salkowski el l'anhydride acétique doit nécessairement être réfrigéré

 Les échantillons doivent également être réfrigérés pour que la réaction se produise.
correctement et on peut observer la coloration.

Il faut travailler sous la hotte lors de l'utilisation d'anhydride acétique. en raison de

que c'est très irritant.

Tous les matériels en verre doivent être lavés, dans ce cas les tubes à essai où
le test a été réalisé pour qu'il n'y ait pas d'impuretés et cela va générer des interférences
cias dans les réactions et cela pourrait nous donner un résultat erroné.

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IX. BIBLIOGRAPHIE

Domínguez, Xorge “Méthodes de recherche Phytochimique”, Éditorial Limusa, Mexique, 1973, P. : 81-
87.

[Link]
 Université nationale du centre du Pérou faculté des sciences appliquées école académique professionnelle
nal de génie agroindustriel ; détermination des saponines

Latinreco (1990) “Quinua, vers la culture commerciale”, Latinreco S.A.; Quito – Équateur.

[Link]

[Link]
ferme2c/evanswc01/[Link]

[Link]

[Link]

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X. APPENDICE

Questionnaire

1. Indique la classification des saponines selon leur structure et donnez un exemple

pour chacune.
Saponines stéroïdiennes
La génine est un stéroïde, lié à un glucide (généralement un polysaccharide)
par lien O-glucosidique. Généralement, le stéroïde est tétracyclique. De
De manière générale, son squelette de base contient des cycles avec un nombre de carbones dans
l'ordre suivant : 6-6-6-5.

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Exemple
Dioscine

C'est unsaponine stéroïdique présent dans lesracinesdes espècesDioscorée

compositayDioscorea floribunda. Par hydrolyse, il se décomposeendiosgénineD-
glucosey 2 unités deL-Ramnosa.
Saponines triterpéniques : La génine est un triterpène, lié à un glucide par liaison O-
glucosidique. Le triterpène est pentacyclique. Généralement, son squelette de base contient
anneaux avec un nombre de carbones dans l'ordre suivant : 6-6-6-6-5.

Dans ce groupe de saponines, les génines se composent de trois unités de terpénoïdes (figure de
la izquierda de la tabla de abajo). Cada terpeno se compone de dos unidades de isopreno
(cinq atomes de carbone), de sorte que les génines sont des molécules avec 30 atomes de carbone.

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Exemple :

Glicirricina

La glycyrrhizine est le sel de Ca++ y K+ glycyrrhizic acid, un glucoside qui est dérivé de la racine de
la plante Glycyrrhiza glabra (réglisse). Elle est 50 fois plus sucrée que le sucre.
 2. Écrivez deux réactions différentes de celles réalisées dans la pratique pour différencier
classer les saponines selon leur structure.

a) Réaction de Rosenheim : elle est utilisée pour différencier l'ergostérol du cholestérol,

seuls les composés qui donnent la réaction positive sont ceux qui ont deux
doubles liaisons conjuguées. L'ergostérol, par exemple, possède deux doubles liaisons.
ces conjugués dans l'anneau B.
Cette réaction consiste à traiter l'échantillon de solution de chloroforme d'un
stéroïde avec une solution d'acide trichloroacétique, le développement d'un
La couleur rouge qui passe au bleu ou au violet pâle indique une réaction positive.

Échantillon + CHCl3+ CCl3COOH 90% violet ou bleu.

b) Test du bicarbonate de sodium 10% : on dissout 1-2 mg de l'échantillon dans

méthanol, on ajoute 2-3 gouttes d'acide sulfurique concentré. On agite
légèrement. Ensuite, ajoutez 2-3 gouttes de la solution de bicarbonate de sodium.
La présence de bulles et leur permanence pendant plus d'une minute indiquent la
présence de saponines.

Échantillon + CH3OH + H2ALORS4 CC+ NaHCO3 bulles

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3. Con un diagrama de flujo describa un método de extracción de una saponina.

Dans le diagramme de flux suivant, deux méthodes d'extraction des saponines sont décrites : le
méthode Soxhlet et méthode assistée par ultrasons.
Méthodologie pour la comparaison des méthodes Soxhlet vs Ultrasonique pour l'extraction de
saponines du résidu de fique.

L'extraction Soxhlet est une méthode cyclique dans laquelle on utilise un équipement en trois pièces (flacon,
cuisine extracteur et condenseur) qui est utilisé pour extraire des composés contenus dans
matériaux solides. Le composé se dilue dans le solvant en raison de l'affinité polaire qui existe entre
les deux produisant une solution du composé dans le solvant qui va se concentrer
à mesure que le cycle se répète.

La méthode d'extraction assistée par ultrasons (EAU) fournit une efficacité élevée de
contact dans l'échantillon entre la matrice et le solvant. Un effet de cavitation sonore est
produit sous irradiation ultrasonique où des microbulles se forment lorsque
la pression négative est suffisamment élevée. Une fois créées, ces bulles grandissent et se
se compriment lorsqueles pressions sont négatives et positives, respectivement, la constante
L'expansion et la compression génèrent l'effondrement des bulles où les parois se brisent.
cellulaires et facilitent la pénétration du solvant en eux, la température augmente
diminuant la viscosité et ces facteurs font que le phénomène de transfert de
la masse est meilleure.

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4. Menciones 5 ejemplos de saponinas con actividad farmacológica, con su

structure respective.

Saponines avec activité pharmacologique :

Escine :
Extraite de la plante Aesculus hippocastanum (marronnier d'Inde). Présente une activité
antiedematosa y antiexudativa con una leve acción sobre el tono del músculo liso de la
paroi veineuse. Par son action sur les veines et les capillaires, elle diminue l'hyperperméabilité.
vasculaire, ce qui améliore l'hémodynamique et réduit l'œdème des membres inférieurs dans
les patients atteints de varices.

Glicirricina

Il a des propriétés d'antiherpétique pour l'herpès simple de type I, II, zona et le virus de
papillome humain. Il est également utilisé comme édulcorants, anti-inflammatoires, expectorants,
augmente la sécrétion de mucus, provoquant ainsi au niveau gastrointestinal une
action antiacide et antiulcéreuse.
Saikosaponina:

Il possède une action anti-infectieuse, antivirale, cytostatique, immunosuppressive et anti-inflammatoire.

Matesaponine :

Présent dans les feuilles de maté, il présente une activité antihypercholestérolémique, une capacité de
former des micelles avec le cholestérol et les sels biliaires dans le tractus gastro-intestinal, formant
complexes qui préviennent leur absorption.

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Bacósido A:

Ils stimulent l'activité des kinases cérébrales et la restauration de l'activité synaptique.

et aident à la réparation des neurones endommagés par les radicaux libres et, en définitive,
améliorent la transmission des impulsions nerveuses. Des études in vitro ont montré que la
la bacopa protège les astrocytes et les fibroblastes humains contre les dommages oxydatifs.

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5. Avec un exemple de synthèse, indiquer l'application industrielle des saponines.

Les bienfaits du quinoa, le grain d'or des Andes, sont nombreux et très surprenants.
eh bien, même la substance amère qui la couvre, appelée saponine, a maintenant une utilisation
comercial en la industria cosmética y de jabones y detergentes y, en un futuro, en farmacia.

Tout ce processus aboutit à une poudre qui pourrait être classée comme
résidu si ce n'était pour ses multiples propriétés, celles qui sont maintenant exploitées dans la
fabrication de divers produits.

Formulation de shampoings avec des saponines

Shampoing avec SQ.

Texapon (20, 15, 10, 5, 0%)

Saponines de quinoa (2,5, 5, 10, 15, 20 %)

Sales (1%), Glicerina (5%), EDTA (0.15%)

Eau désionisée à 100 mL

6. Indique une méthode pour quantifier les saponines

Procédure de la méthode

Peser 0,50 +/- 0,02 g de grains entiers de quinoa et les placer dans un tube à essai.
Ajouter 5,0 mL d'eau distillée et fermer le tube. Démarrer le chronomètre et secouer.
Vigoureusement le tube pendant 30 secondes.

Laisser le tube au repos pendant 30 minutes, puis agiter à nouveau pendant 20 secondes.

Laisser reposer pendant 30 minutes de plus, puis secouer à nouveau pendant 30 secondes. Donner
au tube une dernière secousse comme celle qu'on donne aux thermomètres oraux.

Laisser le tube au repos pendant 5 minutes, puis mesurer la hauteur de la mousse au plus proche de 0,1 cm.

Calculs

0,646( altitude ) 0.104

=
( )

0,646 x( hauteur
d'un espacement des puces de 30 ség en cm )
0.104
% =
(poids de la muestre en grammes) x10

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Méthode rapide

Pour effectuer des déterminations plus rapides, on peut prendre la mesure de la hauteur de mousse.
après une agitation de 30 secondes, attendant environ 10 secondes de plus pour que cela
stabilisez la mousse

( hauteurde espumas después de 30 seg en cm +)0,001

0.441x
=
( )

0,441x (hauteurd'un espace de 30 s ég en cm + 0,001 )

% =
(poids de la muestre en grammes) x10
26