Analyse et dénaturation des protéines

Expérience n°4

Théorie
La cellule est principalement composée de protéines, et leur unité répétée, l'acide aminé. La protéine fonctionne comme biologique.
catalyseurs ou enzymes, transporteurs d'oxygène et hormones.

Il existe quatre niveaux de structure protéique : les niveaux primaire, secondaire, tertiaire et quaternaire. Le niveau primaire
la structure est composée d'acides aminés liés par des liaisons covalentes simples. Il existe deux types de structure secondaire, l'hélice α
et les feuillets β. La structure de l'hélice alpha contient un brin de chaîne d'acides aminés qui est lié par des interactions intramoléculaires.
liaisons hydrogène. Deux chaînes qui sont liées par des liaisons hydrogène décrivent la structure en feuillet beta. La structure tertiaire
de la protéine fait référence à la combinaison soit d'hélice pure, soit de bêta pur, soit d'une combinaison des deux. La stabilisation
interactions in the tertiary level are (a.) salt linkages, (b) hydrogen bonds, (c) disulfide linkages, and (d) hydrophobic
interactions.

Dénaturation des protéines.

La dénaturation est le dépliement de la structure secondaire, tertiaire et quaternaire complexe des protéines. La chaleur, forte
Les acides et les solvants organiques (par exemple, l'alcool) peuvent dénaturer les protéines. La chaleur fait que les atomes à l'intérieur de la molécule de protéine se ...

vibrent plus rapidement, provoquant la rupture des liaisons hydrogène et des interactions hydrophobes. Les acides forts rompent les liaisons salines
en ionisant le groupe carboxylique,
et alc
L'alcool dénature la protéine en perturbant les liaisons hydrogène.

Les ions de métaux lourds comme l'argent, le plomb et le mercure dénaturent également les protéines en combinant les anions carboxylate libres de
l'acide aminé acide avec le métal, provoquant une précipitation. C'est le raisonnement dans l'utilisation des protéines (par exemple, le blanc d'œuf) comme
antidote pour l'intoxication aux métaux lourds.

Les acides organiques, comme l'acide picrique et le tanin, sont utilisés pour précipiter les alcaloïdes, donnant lieu au nom "alcaloïdal".
réactifs”. L'anion de l'acide réagira avec les groupes aminés protonés de protéines, provoquant une perturbation du sel
Les liaisons. Le cuir est fabriqué en revêtant des peaux animales d'acide tanique, d'où le processus est connu sous le nom de tannage.

Tests de couleur des protéines

Les acides aminés peuvent être identifiés par les groupes R attachés au carbone α qui réagissent avec des produits chimiques spécifiques.
Cependant, étant donné que les protéines contiennent divers acides aminés, un seul test ne suffira pas à identifier les acides aminés. Ce serait
il est préférable d'effectuer de nombreux tests avant de conclure sur les composants d'une protéine.

1. Test de
Biuret
Ce test donnera un résultat positif pour les composés qui contiennent 2 ou plusieurs liaisons peptidiques. Il donnera un
couleur violette distinctive qui est probablement due à la formation d'un complexe par des ions cuivriques avec les groupes amino
appelé Biuret. Par conséquent, les dipeptides et les acides aminés comme la sérine et la thréonine ne donnent pas de résultats positifs avec cela.

test.

2. Test à la ninhydrine
Lorsque les acides aminés sont pulvérisés avec de la ninhydrine, cela donnera un résultat de couleur bleue à violette. La présence de
Le groupe amine, y compris ceux trouvés dans les amines et l'ammoniac, donnera également le même résultat sauf pour la proline et
l'hydroxyproline qui donnera un résultat de couleur jaune.

3. Test xanthoprotéique
La nitration des acides aminés contenant un cycle benzénique produira le produit nitrobenzène qui donnera un
coloration jaune à orange. Le tryptophane, la tyrosine et la phénylalanine produiront le nitrobenzène lorsqu'ils seront traités avec
acide nitrique concentré. Le collagène et la gélatine ne donnent pas de réaction positive.

4. Test de Millon
La présence du groupe phénol dans des acides aminés comme la tyrosine est nitrée par une solution de mercure et
des nitrates mercuriels dans de l'acide nitrique concentré. Un précipité blanc commencera à se former, devenant rouge brique sur
haine prolongée due à la formation d'un complexe de mercure des dérivés nitrophényliques. L'ajout de NaNO2 transforme
 L'aldéhyde présent dans le réactif provoquera la formation d'un anneau de couleur bleue ou violette en raison de
formation d'un complexe entre le réactif et l'anneau indole du tryptophane. La gélatine et le collagène ne parviennent pas à donner un
résultat positif avec ce test indiquant l'absence de tryptophane dans ces protéines.

Test de Sakaguchi
La combinaison d'alpha-naphtol et d'hypobromite ou d'hypochlorite de sodium réagira avec la guanido.
groupe donnant une couleur complexe rouge à orange. Ce test est utilisé pour identifier la présence d'arginine. C'est un
test extrêmement sensible et peut être utilisé comme test général pour les protéines, car toutes les protéines connues contiennent suffisamment
arginine.

7. Test de l'acétate de plomb (Test pour le soufre)

This test is specific for sulfur-containing amino acids like cysteine and methionine. The sulfahydryl or
Les groupes disulfure sont convertis en sulfure inorganique, Na2S, dans une solution fortement alcaline. Cela réagira davantage avec
acétate de plomb pour former un précipité brunâtre-noir de sulfure de plomb (PbS).

Objectif
Être capable d'identifier les différents acides aminés dans un échantillon de protéine.

Matériaux
Tubes à essai Tyrosine
Porte-tube à essai Réactif de Millon
Porte-essai 0,1 % NaNO2
Porte-tubes à essai Réactif de Cole de Hopkin
pipette H2SO4 conc.
pipette 10% NaOH
aspirateur solution d'acétate de plomb à 5%
spatule eau ammoniacale
tige d'agitation 0,2 % d'urée
Brûleur Bunsen éthanol à 95%
Trépied 2% de chlorure mercurique
Tissu métallique 2% acétate de plomb
Verre de montre nitrate d'argent à 2 %
Bain-marie Acide picrique
cylindre gradué Acide tannique
Bouchon albumine d'œuf (à partir d'œuf frais)
5% d'albumine
5 % de gélatine
HNO3 conc.
NH4OH conc.
5 % de phénol

Procédures

I. Tests de couleur pour les acides aminés et les protéines

A. Test xanthoprotéique
Placez 1 ml de solution d'albumine à 5 %, de solution de gélatine à 5 % et de tyrosine dans des tubes à essai étiquetés séparément. Ajoutez 5
ajoutez quelques gouttes de HNO3 concentré dans chaque tube. Remarquez la formation d'un précipité blanc. Mélangez-le soigneusement, chauffez au bain-marie, et
notez le changement de couleur. Laissez refroidir et ajoutez quelques gouttes de NH4OH concentré. Notez l'intensité de la couleur.

Test xanthoprotéique Observations

Albumine
Gélatine
Tyrosine

Test de Millon
Placez 1 ml de chaque solution à 5 % d'albumine, de tyrosine et de solution de phénol à 5 % dans des tubes à essais étiquetés séparément. Ajoutez 4
Ajoutez des gouttes de réactif de Millon dans chaque tube à essai. Chauffez dans un bain-marie bouillant pendant 10 minutes, puis laissez refroidir en plaçant le
 Albumine
Tyrosine
Phénol

Test de Cole de C. Hopkin

Placez 1 ml de tyrosine, de solution d'albumine et de solution de gélatine à 5 % dans des tubes à essai étiquetés séparément. Ajoutez 4 gouttes.
du réactif de Hopkin's Cole. Inclinez le tube à essai dans le porte-tube. Laissez glisser soigneusement 2 ml d'acide sulfurique concentré.
le long du côté du tube incliné afin qu'il forme une couche en dessous de la solution protéique. Notez la couleur de la
jonction des deux liquides.

Test de Cole de Hopkin Observations

Albumine
Gélatine
Tyrosine

D. Lead Acetate Test

Placez 1 ml de solution d'albumine à 5 %, de solution de gélatine à 5 % dans des tubes à essai étiquetés séparément. Ajoutez 5 gouttes de NaOH à 10 %.
et 3 gouttes de solution d'acétate de plomb à 5 % dans chaque tube à essai. Secouer et chauffer dans un bain-marie bouillant. Décrivez la couleur de la
précipité formé.

Test de l'acétate de plomb Observations

Albumine
Gélatine

Test de Biuret
Placez 2 ml de chaque solution d'albumine à 5 % et d'urée dans des tubes à essai étiquetés séparément. Ajoutez 1 ml de solution de NaOH à 10 % et
Environ 5 gouttes de solution de CuSO4. Observez la couleur qui se développe.

Test de Biuret Observations

Albumine à 5%
Urée

II. Dénaturation des protéines

A. Coagulation
Par la chaleur
Étiquetez 2 tubes de test comme 1 et 2. Dans les deux tubes, placez une petite quantité de solution d'albumine d'œuf. Dans le tube 1, ajoutez 3 ml.
eau distillée et chauffer le tube à essai dans un bain-marie bouillant pendant 10 minutes en remuant. Laisser refroidir. Ajouter 3 ml d'eau distillée
Ajoutez de l'eau dans le tube à essai 2 et agitez. Filtrez les deux tubes séparément, puis testez les deux filtrats en utilisant le réactif de Biuret. Comparez les résultats.
et enregistrez votre résultat ci-dessous.

Observations
Tube à essai 1
Tube à essai 2

2. Acides inorganiques
Étiquetez deux tubes à essai comme 1 et 2, et ajoutez 3 ml d'albumine à 5 % dans chaque tube. Dans le tube à essai 1, ajoutez quelques gouttes de HCl concentré.

par goutte, en agitant après chaque ajout. Enregistrez le nombre de gouttes de l'acide ajoutées jusqu'à ce qu'un précipité se forme. Ensuite, ajoutez
une quantité excessive de HCl et notez si cela augmentera ou dissoudra le précipité formé. Répétez la même.
procédure dans le tube à essai 2, mais cette fois utilisez de l'H2SO4 concentré.

Observations
HCl
H2SO4
 Albumine
Gélatine

B. Précipitations

1. Par des sels métalliques lourds

Dans trois éprouvettes, placez 3 ml de solution d'albumine d'œuf. Dans l'éprouvette 1, ajoutez 5 gouttes de solution d'acétate de plomb. Ajouter
ajouter un excès de solution d'acétate de plomb et noter si le précipité augmente ou se dissout. Répétez la procédure en
Ajout de 5 gouttes de nitrate d'argent au tube à essai 2 et de 5 gouttes de chlorure de mercure au troisième tube à essai. Décrivez les résultats.

sels de métaux lourds Observations

Acétate de plomb
Nitrate d'argent
Chlorure mercurique

2. Par réactifs alcaloïdaux

Placez 3 ml de solution d'albumine d'œuf dans deux tubes à essai. Dans le tube à essai 1, ajoutez 2 ml de solution d'acide tanique, et dans le tube à essai
2, ajoutez 2 ml de solution d'acide picrique. Décrivez la solution protéique dans chacun des tubes après l'ajout des réactifs alcaloïdiques.

Réactif alcaloïdal Observations

Acide picrique
Acide tannique
 COLLÈGE CAGAYAN DE ORO-PHINMA

Rapport final de laboratoire de biochimie

Name: ___________________ Rating: _____________

Cours/Année/Section : ______ Date Performed: ____________
Groupe n° _______________ Date Submitted: ____________

Expérience n°_____

Title:___________________________________________________________
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Objectif :_______________________________________________________
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Materials: ______________ ________________

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I. Tests de couleur pour les acides aminés et les protéines

A. Test xanthoprotéique

Test xanthoprotéique Observations

Albumine
Gélatine
Tyrosine

Le test de Millon

Test de Millon Observations

Albumine
Tyrosine
Phénol

Test de Cole de C. Hopkin

Test de Cole de Hopkin Observations

Albumine
Gélatine
Tyrosine

D. Test de l'acétate de plomb

Test de l'acétate de plomb Observations

Albumine
Gélatine

E. Test de Biuret

Test de Biuret Observations

 A. Coagulation
1. Par la chaleur

Observations
Tube à essai 1
Tube à essai 2

2. Acides inorganiques

Observations
HCl
H2SO4

3. Alcool

Observations
Albumine
Gélatine

B. Précipitation
1. Par des sels de métaux lourds

Sels de métaux lourds Observations

Acétate de plomb
Nitrate d'argent
Chlorure de mercure

2. Par des réactifs alcaloïdaux

Réactif alcaloïdal Observations

Acide picrique
Acide tannique

Questions
1. Les instruments chirurgicaux sont stérilisés en les chauffant, et l'alcool est utilisé comme désinfectant pour nettoyer la peau au préalable.
à une injection. Pourquoi ces méthodes réussissent-elles à tuer les micro-organismes nuisibles ?
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2. Expliquez pourquoi les blancs d'œufs et le lait sont utilisés comme antidotes pour l'intoxication par les métaux lourds.

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3. Expliquez pourquoi l'acide picrique et les acides tanniques sont utilisés dans le traitement des brûlures.

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4. Quel est le précipité coloré obtenu dans le test au soufre (test de l'acétate de plomb) ?
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