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Techniques d'ensemencement et purification des microorganismes

Le document décrit les techniques d'ensemencement et d'isolement des microorganismes, en précisant les objectifs, le matériel utilisé et les méthodes d'ensemencement. Il aborde également la purification, l'identification et la conservation des isolats, en détaillant les conditions d'incubation et les méthodes de conservation à court et long terme. Les étapes incluent l'observation des colonies et l'utilisation de divers équipements de laboratoire pour garantir la stabilité des produits isolés.

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Techniques d'ensemencement et purification des microorganismes

Le document décrit les techniques d'ensemencement et d'isolement des microorganismes, en précisant les objectifs, le matériel utilisé et les méthodes d'ensemencement. Il aborde également la purification, l'identification et la conservation des isolats, en détaillant les conditions d'incubation et les méthodes de conservation à court et long terme. Les étapes incluent l'observation des colonies et l'utilisation de divers équipements de laboratoire pour garantir la stabilité des produits isolés.

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• Tp2 : L’ensemencement et l’isolement des microorganisme

L’objectif :
L’ensemencement est l’opération qui consiste à déposer des microorganismes sur un
milieu de culture pour leur croissance. Il existe plusieurs techniques selon l’objectif
recherché (isolation, multiplication, purification…)

Matériel utilisé :
• Boîtes de pétri contenant milieu gélosé (ex. : gélose )
• Boucle de platine stérile ou écouvillon stérile
• Bec Bunsen
• Pipettes stérilet
• Solution de microorganismes (culture liquide ou échantillon
environnemental)
• Alcool

Technique d’ensemencement :
• Ensemencement dans les tubes des bouillons
• Ensemencement dans la boîte à pétri :(qui contient le milieu de culture
solide ) :
1. Ensemencement en masse
2. Ensemencement en double couche
3. ensemencement par filtration sûr membrane
4. Ensemencement en surface
-par inondations
-par étalement
-par stries d’épuisement ou méthode de cardans
Exemple :
Tp3 : purification ; identification et conservation

• Objectif

L’objectif de cette manipulation est de purifier un produit brut obtenu à partir de


[préciser : extraction, synthèse, fermentation…], d’identifier la nature chimique
du produit isolé par des méthodes analytiques appropriées, et de mettre en place
une méthode de conservation garantissant la stabilité du produit sur le long
terme

• Matériel utilisé

.Verrerie de laboratoire : béchers, erlenmeyers, colonnes de chromatographie,


tubes à essai.
.Matériel spécifique : pompe à vide, spectrophotomètre UV-Visible,
chromatographe .

1. Purification :
Après développement des colonies, la purification est réalisée par repiquage :
une colonie isolée est prélevée avec une pince stérile et transférée dans une
nouvelle boîte de Pétri.
Incubation :
• 28°C pour les champignons
• 37°C pour les bactéries
2. Identification :
Basée sur l’observation des colonies :
Observation macroscopique : couleur, diamètre, aspect général.
Observation microscopique :

• Champignons : présence/absence de thalle, septum, fructifications.


• Bactéries : forme, assemblage, type de paroi (coloration de Gram +/-).

3. Conservation :

Après purification, les isolats purs (champignons/bactéries) sont conservés pour


un usage futur
Deux types de conservation : t
o Conservation à court terme :
• Milieu solide (gélose inclinée) ou liquide (bouillon nutritif
pour bactéries, bouillon PDL pour champignons).
• Conservation à 4°C, valable pour 6 mois à 1 an.

o Conservation à long terme :

• Cryoconservation à -20°C dans tampon phosphate pH 7.0 /


Glycérol (70/30%).
• Permet de conserver les isolats jusqu’à 3 ans ou plus.
• (Le tampon phosphate pH 7.0 stabilise les cellules
microbiennes.)

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