FUNGITEST TM 60780

10 ÉPREUVES
DÉTERMINATION DE LA SENSIBILITÉ DES
HONGOS AUX AGENTS ANTIFONGIQUES
1- INTÉRÊT CLINIQUE
Au cours des dernières années, une nouvelle épidémie d'infections a été observée.
champignons, et cela en raison de l'augmentation du nombre d'individus immunodéprimés.
déficients (9).
Cela est principalement dû à l'utilisation de chimiothérapies anticancéreuses plus
potents, to more intensive immunosuppressive treatments in recipients
des transplantations et de l'utilisation d'antibiotiques à large spectre (2, 3).
Cette poussée s'accompagne d'une augmentation du nombre d'espèces
pathogènes identifiés (10) et de l'apparition de résistance dans les
épices auparavant connues.
Dans ce nouveau contexte, un test in vitro de la
sensibilité des champignons aux agents antifongiques (1, 4, 7, 8).
FUNGITESTTMatteindre cet objectif, car il permet la détermination de la
sensibilité des champignons aux agents antifongiques selon une méthode
standardisé dérivé d'une méthode de référence (5, 6), facile à réaliser
cabo et d'interpréter.

2- PRINCIPES
FUNGITESTTMs'utilise pour étudier la croissance des champignons en présence
de 6 agents antimicrobiens à 2 concentrations différentes, dans un milieu
tampon de RPMI 1640 modifié, en présence d'un indicateur de
oxydoréduction.
La vérification de la croissance est basée sur la réduction de l'indicateur de
couleur, qui fait passer le milieu de la couleur bleue au rose. Quand le
l'agent antifongique inhibe la croissance, le milieu reste de couleur
bleu.
Ce test, qui se déroule dans une microplaquette de 16 puits,
consiste en :
• 2 tasses pour le contrôle de la croissance
12 coupelles contenant les agents antifongiques déshydratés
(6 agents antifongiques à 2 concentrations différentes)
• 2 petits bols pour le contrôle négatif
Un inoculum calibré de la souche qui va être testée est dilué dans
le "milieu de suspension" et puis il se distribue dans chacun des
pocillos de la microplaca.
Le "moyen de suspension" inoculé réhydrate à nouveau les agents anti-mi-
cotiques présents dans chaque tasse.

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 Les concentrations antifongiques obtenues correspondent à des concentrations
discriminantes, qui permettent la classification des souches en :
souches sensibles (S)
• cepas intermédiates (I)
souches résistantes (R)
Les seuils de discrimination ont été choisis en fonction de l'étude
de la distribution des agents antifongiques M.I.C. obtenus avec
microplaques prototypes utilisées avec la même procédure que le
FUNGITESTMT.
Cette étude préliminaire (11) a été réalisée dans deux laboratoires de
référence, l'Unité de Mycologie de l'Institut Pasteur de Paris et le
Laboratoire d'immunologie de la Faculté de pharmacie de Montpellier ; se
Ils ont sélectionné 193 souches pour qu'elles soient représentatives des souches isolées
dans la pratique médicale courante, avec l'inclusion de souches résistantes. Dans ce
étude, 8 dilutions de 6 médicaments antifongiques ont été soumises à test et
on a obtenu la distribution des M.I.C. résultants obtenus. Sur la base de
les graphiques de distribution et des données de la littérature médicale récente se
ils ont sélectionné 2 concentrations pour chaque médicament antifongique pour le
présentation finale de la galerie.
Face à l'absence de recommandations internationales actuelles qui donnent une
interprétation des M.I.C., les seuils de discrimination constituent un
engagement et pourraient être modifiés à l'avenir : d'autres sont nécessaires
études définissant la correspondance entre les résultats obtenus in vitro
et son importance clinique.

3- COMPOSITION DE L'ÉTUI
FUNGITESTTMinclut :
• Microplaques : 10 microplaques individuellement emballées de 16 wells
(le diagramme de la microplaque est indiqué sur l'étiquette).
• 10 films adhésifs
• Suspension medium : 10 flacons contenant 3 ml de milieu de
suspension prête à l'emploi
Chaque microplaque est individuellement emballée dans un sachet en aluminium
précisée avec un film adhésif et un déshumidificateur.

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 Diagramme de la microplaque
T+ ➩ Contrôle positif
5 FC ➩ 5-fluorocitosine (2-32 µg/ml)
AB ➩ amphotéricine B (2-8 µg/ml)
MCZ ➩ miconazole (0,5-8 µg/ml)
KET ➩ kétonazole (0,5-4 µg/ml)
ITR ➩ itraconazole (0,5-4 µg/ml)
GRIPPE➩ fluconazole (8-64 µg/ml)
T- ➩ Contrôle négatif

4- CONSERVATION
Les réactifs, conservés à +2 – 8°C, sont stables jusqu'à la date de
date d'expiration indiquée sur l'étui.

5- MATÉRIAUX REQUIS, MAIS NON INCLUS

• Micropipettes de 20 µl et 100 µl
• Micropipettes de 20 µl et 100 µl
Cones stériles
• Contrôle de l'opacité 1 Mac Farland : code 56499
• Incubateur à 37°C et 32°C.

6- PROCÉDURE
A) PRÉPARATION DE LA SUSPENSION DE CHAMPIGNONS
• On utilise une pipette pour prélever 2 colonies similaires d'une culture pure et
fresco obtenu dans un milieu de Sabouraud avec ou sans antibiotiques et se
introduisez dans 3 ml d'eau distillée stérile en vue d'obtenir un
primer inoculo calibré avec un équivalent d'opacité avec le standard
Mac Farland nº 1 (Contrôle de l'opacité 1 Mac Farland), par exemple,≈ 3 x 106
champignons/ml.

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• Avec une pipette calibrée, 100 µl de cet inoculum sont dilués dans 1,9 ml de
eau distillée stérilisée.
• On inocule 20 ml de la dilution obtenue dans le milieu de suspension.
inclusdansl'é[Link]'inoculumestmaintenant
équivalent à≈ 1 x 103champignons/ml.

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 B) INOCULATION DE LA MICROPLaque
• Avec une pipette calibrée, on distribue 100 µl de cette suspension dans
chaque puits de la microplaque.
• Se couvre avec le film adhésif.
C) INCUBATION DE LA MICROPLQUE
Se incube : - à 32 °C pendant 72 h pour Cryptococcus neoformans
- à 37 °C pendant 48 h pour les autres champignons.

D) LECTURE ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

• La plaque ne sera examinée que lorsque les puits du contrôle positif (T+)
soyez de couleur rose.
• Tout changement de couleur dans les récipients contenant le sera observé.
agente antifongique, en comparaison avec les puits négatifs de
contrôle (de couleur bleue).
• S'interprètera en fonction de la couleur des 2 tasses de chaque agent
antimycotique
-Azul-Azul= absence de croissance : souche inhibée par l'agent
antimycétique in vitro
-Rosa-Azul= croissance lente : souche intermédiaire
-Rosa-Rosa=croissance: souche non inhibée par l'agent antimycotique
in vitro.

7- PRÉCAUTIONS D'UTILISATION
Les réactifs ne doivent pas être utilisés après la date d'expiration.
RECOMMANDATIONS EN MATIÈRE D'HYGIÈNE ET DE SÉCURITÉ
Les souches et les réactifs inoculés sont potentiellement infectieux ; se
doivent être manipulés avec les précautions habituelles et doivent être jetés de
accord avec le règlement actuel en matière d'hygiène et de sécurité pour cela
type de produits.

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8- CONTRÔLE DE QUALITÉ DE L'ESSAI
Les résultats de FUNGITESTTMse contrôlent en utilisant les suivants
cepas
CEPAS RÉSULTAT DE LA CULTURE APRÈS 48 HEURES À 37°C
T+ 5FC AB MCZ KET ITRA FLU T-
C. tropicalisATCC 750 Rosa S S/I S/I S S/I S Azul
C. kruseiATCC 6258 Rosa Je S/I Je S/I S/I Je Azul
C. albicansCIP 884.65 Rosa S S/I S/I S S S Bleu
C. glabrata SDP A35 Rosa S S S/I Je I/R Je/R Azul
C. parapsilosis ATCC 22019 Rosa S S S/I S S/I S Azul
C. neoformansSDP B53* Rosa S/I S S/I S/I S/I I/R Azul

* Incubation pendant 72 heures à 32 °C

9- CONTRÔLE DE QUALITÉ DU FABRICANT

Tous les réactifs ont été fabriqués conformément à notre système.
deQualité,depuislaréceptiondesmatièrespremièresjusqu'à
commercialisation finale du produit. Chaque lot est soumis à des vérifications
de contrôle de qualité et est uniquement commercialisé sur le marché lorsque
est conforme à des critères d'acceptation prédéfinis. Les rapports
relatifs à la production et au contrôle de chaque lot individuel sont conservés
en Bio-Rad.

10-REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Voir la version française.

21
10-RÉFÉRENCES
[Link] ELIAS J, KARYOTAKIS NICHOLAS C, HACHEM RAY,DIGNANI MARIA
C., REX JOHN H., ET PAETZNICK VICTOR. Corrélation entre In Vitro et In
Activité in vivo des agents antifongiques contre les espèces de Candida. La Revue de
MaladiesInfectieuses1994;170:384-389.
2. BERENGUER J, FERNANDEZ-BACAV , SANCHEZ R, BOUZA E. Activité In Vitro
de l'Amphotéricine B, de la Flucytosine et du Fluconazole contre les levures causant
[Link].1995;14:362-365.
3. DROMERF, DUPONT B. Le problème croissant des infections fongiques dans le
hôteimmunodéprimé.[Link].Méd.1996;6,Suppl.I:1-6.
4. ESPINEL-INGROFFA, PFALLER [Link] antifongiques et tests de sensibilité.
Dans MURRAY PR, BARON EJ, PFALLER MA, TENOVER FC, YOLKEN RH, éd.
Manuel de microbiologie clinique, 6e éd. Washington, DC : American Society for
Microbiologie,1995.
5. ESPINEL-INGROFF A, RODRIGUEZ-TUDELA JL, et MARTINEZ-SUAREZ JV.
Comparaison de deux procédures de microdilution alternatives avec le national
Comité des normes de laboratoire clinique Méthode de macrodilution de référence
M27-P pour les tests in vitro d'isolats résistants et sensibles au fluconazole
[Link].1995;33:3154-3158.
6. NCCLS. Test de sensibilité antifongique ; Rapport du comité. Document NCCLS
[Link], 771 East Lancaster Avenue, Villanova, Pennsylvanie. Octobre
1995.
7. PAUGAM A. Intérêt de l'étude in vitro de la sensibilité des levures aux
[Link]çaisedeslaboratoires.1996;282:157-159.
8. PFALLER MA, BUSCHELMAN B, BALE MJ, et al. Comparaison multicentrique d'un
méthode de microdilution colorimétrique en milieu avec la méthode de macrodilution de référence
pour le test de sensibilité in vitro des isolats de levures. Diagn Microbiol Infect Dis. 1994 ;
19: 9-13. 4
9. WALSH TJ, GONZALEZ C, ROILIDES E, MUELLER BU, ALI NASR, LEWIS LL,
WHITCOMB TO, MARSHALL DJ, et PIZZO PA. Fungémie chez les enfants infectés
avec le virus de l'immunodéficience humaine : nouveaux modèles épidémiologiques, émergents
Pathogènes et amélioration des résultats avec la thérapie antifongique. Clin. Infect. Dis.
1995;20:900-906.
10. WINGARD JR. Importance des espèces de Candida autres que C. albicans
Pathogè[Link].1995;20:115-125.
11. GARRIGUES ML, MALLIE M, DUPONT B, BASTIDE JM, CARLS B, DROMER
F.Éovund’
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gieralouertréd
tas
slielbnsievluesraux
antifongiques. Colloque de la Société Française de Mycologie Médicale,
Institut Pasteur, 22-23 Novembre 1996.
(FR)• Ce produit contient des composants humains ou animaux. Manipulez avec précaution.
Ce produit contient des composants d'origine biologique humaine ou animale. Manipuler avec précaution.
Ce produit contient des composants humains ou animaux. Manipuler avec soin.
(FR)• Ce produit contient des composants humains ou animaux. Manipuler avec précaution.
(FR)• Ce produit contient des composants d'origine humaine ou animale. Manipuler avec précaution.
(FR)• Ce médicament contient des composants d'origine humaine ou animale. Manipulez avec précaution.
(SE)• Ce produit contient des composants d'origine humaine ou animale. Manipulez le produit avec précaution.
Ce produit contient des composants humains et animaux. Doit être manipulé avec précaution.
(FR)•Ce produit contient des éléments humains ou animaux. Manipulez-le avec précaution.
(FR)• Ce produit contient des ingrédients d'origine humaine ou animale. Il doit être manipulé avec précaution.
(LT)• Ce produit contient des ingrédients d'origine humaine ou animale. Agir avec prudence.
(HU)• Le produit contient des ingrédients d'origine humaine ou animale. À manipuler avec précaution.
(EE)• Ce produit contient des composants d'origine humaine ou animale. Manipuler avec précaution.
(SK)•Ce produit contient des composants d'origine humaine ou animale. Manipulez-le avec précaution.
(FR)•Ce produit contient des composants humains ou animaux. Manipulez-le avec précaution.
(FR)• Ce produit contient des matériaux d'origine humaine ou animale. Manipulez-le avec soin.
(FR)•Ce produit contient des composants humains ou animaux. Soyez prudent lors de son utilisation.
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