Guide sur l'antibiogramme et son utilité
Guide sur l'antibiogramme et son utilité
1. INTRODUCTION
Chaque fois qu'un prélèvement bactériologique à des fins diagnostiques a permis l'isolement
d'une bactérie considérée comme responsable de l'infection. Établir cette responsabilité
exige une collaboration entre le bactériologiste et leclinicien. En effet, dans certaines
circonstances, le microbiologiste ne pourra pas déterminer avec certitude que l'isolement d'une
Les bactéries nécessitent un antibiogramme, sans les données cliniques fournies par le médecin. Par exemple,
une bactérie non pathogène peut être responsable de l'infection d'un malade
immunodéprimé ou dans un endroit déterminé de l'organisme. La présence de signes cliniques
peut également être déterminant pour la réalisation d'un antibiogramme (par exemple : la
infection urinaire avec un nombre réduit de germes.
2. ANTÉCÉDENTS HISTORIQUES
1900-15 Ehrlich conçoit l'idée d'utiliser des composés chimiques de synthèse comme des "balles".
matiques sélectives envers les microorganismes, mais inoffensives pour les personnes ou les animaux
supérieurs. En 1909, il découvre que le salvarsan est efficace contre la syphilis. Il invente le terme
chimiothérapie
1932-35 Domagk, suivant les traces d'Ehrlich, découvre l'action du rouge de prontosil
(la première sulfamide) sur le pneumocoque et d'autres streptocoques in vivo.
1940 Woods découvre le mécanisme d'action des sulfamides. Nous sommes en pleine "Époque
d'or de la chimiothérapie de synthèse.
1929 Fleming découvre la pénicilline, le premier antibiotique naturel, mais échoue dans sa tentative
de le purifier. L'industrie pharmaceutique se montre "indifférente".
Large éventail
Selon son spectre
Spectre limité
Spectre réduit
Bactéricides : Non seulement ils inhibent la croissance des cellules mais aussi
déclenchent des mécanismes à l'intérieur de la cellule qui conduisent à la mort cellulaire.
C'est une méthode qualitative, qui se caractérise par sa facilité d'étandardisation et qui est
indiqué pour les microorganismes non exigeants à croissance rapide. Partant d'un échantillon
il faut toujours réaliser une culture pure pour pouvoir commencer l'étude de la sensibilité
antibiotique. Pour cela, on utilise la technique d'isolement sur des plaques contenant un milieu
adapté à la souche à l'étude (à laquelle des conditions atmosphériques doivent également être attribuées
spécifiques de cette souche). L'antibiogramme par diffusion en disque basé sur le travail de Bauer, Kirby
y collaborateurs, c'est l'une des méthodes que le NCCLS recommande pour la détermination de la
sensibilité bactérienne aux antibiotiques.
4.3. sérum physiologique stérile ou milieu de culture stérile, écouvillons stériles, pinces
stériles ou distributeur, supports, éliminateur, anse bactériologique, étuve de 35°C.
4.4. Disques d'antibiotiques : les disques doivent être conservés au congélateur ou au réfrigérateur
pour maintenir l'activité de l'antibiotique. Ils doivent être retirés une ou deux heures avant
son utilisation. Nous devons toujours vérifier la date d'expiration avant de les utiliser.
4.5. Patron de turbidité : pour standardiser la densité de l'inoculum, on utilise une suspension
de sulfate de baryum comme standard de turbidité correspondant à un 0,5 du néphélomètre
de Mc Farland. La densité est corroborée par un spectrophotomètre. Puis,
préparé le modèle de turbidité est distribué dans des tubes à essai (4 à 6 ml par chacun)
tubo). Ceux-ci doivent être conservés à température ambiante et protégés de la lumière. Ce
La turbidité correspond à 1,5 x 10^8 UFC/ml.
4.7. Procédure (comment préparer l'inoculum) : il existe essentiellement deux façons de comment
préparer l'inoculum.
4. Inoculer la plaque.
Directions dans le
semé supprimer
inoculum sur la
superficie de l'agar.
Une fois que le disque a pris contact avec la surface du milieu, il ne doit pas
être supprimé.
L'agar Müeller Hinton est un milieu nutritif solide, non sélectif, qui est composé
par infusion de viande, péptone acide de caséine, amidon, agar eteau distillé[Link]
le milieu permet un excellent développement microbien de la plupart desbactériesde
croissance rapide.
Il a été créé à l'origine par John Howard Müeller et Jane Hinton pour isoler
bactéries exigeantes du point de vue nutritionnel, commeNeisseria
gonorrhée yNeisseria meningitidis. Cependant, en raison de ses caractéristiques
s'est révélé idéal pour l'étude de la susceptibilité aux antibiotiques,
fournissant des résultats fiables et reproductibles.
C'est pourquoi l'agar Müeller Hinton est le milieu de culture accepté par la Clinical and
Institut des Normes de Laboratoire (CLSI) et Comité Européen sur les Antimicrobiens
Test de susceptibilité, pour la réalisation du test de susceptibilité
antimicrobienne par la méthode de diffusion en disque de Kirby et Bauer.
5.1.1. Fondement : Étant un moyen nutritif non sélectif, il est excellent pour le
croissance de la plupart des bactéries pathogènes. D'autre part, son
une composition simple permet aux substances de se diffuser facilement dessus,
étant une caractéristique essentielle pour le test de susceptibilité par le
méthode de diffusion en disque. Une autre de ses caractéristiques est qu'elle contient peu
quantité d'inhibiteurs, ce qui permet qu'ils puissent être évalués de manière
Les sulfonamides, le triméthoprime et les tétracyclines sont efficaces. Cependant, on...
vous devez garder à l'esprit que le milieu doit remplir certaines conditions pour
garantir son bon fonctionnement, parmi elles : L'ajustement du pH, la profondeur
du gel et de la concentration adéquate de thymine, de timidine, de Ca++, de Mg++ et de Zn++.
Il faut également savoir que la méthodologie est standardisée et donc
tous les paramètres doivent être respectés, tels que : La concentration de
inoculum, la concentration et la conservation des disques d'antibiotiques, la
placement du nombre approprié de disques sur l'agar, la distance entre
un disque et un autre, le placement stratégique de certains antibiotiques, l'atmosphère,
la température et le temps d'incubation.
5.1.2. Preparación
Peser 37 g du milieu Müeller Hinton déshydraté et dissoudre dans 1 litre de
eau distillée. Chauffer le milieu tout en agitant pour aider à son
dissolution. Laisser bouillir pendant 1 minute.
Mettre dans l'autoclave pour stériliser à 121°C pendant 15 minutes. En sortant de
autoclave, il faut placer le flacon dans un bain-marie à 50°C pour le refroidir.
Verser 25 à 30 ml dans des plaques de Petri stériles de 10 cm de diamètre.
Les plaques doivent avoir une épaisseur moyenne de 4 mm (idéal), étant
permis un éventail de 3 à 5 mm.
Si l'on souhaite préparer de l'agar sang en utilisant de l'agar Müeller Hinton comme base, on
versez 5 % de sang de mouton stérile et défibriné avant de servir dans les
plaques.
Le pH final du milieu doit se situer entre 7,2 et 7,4.
Inverser et conserver au réfrigérateur, jusqu'à son utilisation. Laisser la plaque prendre
température ambiante avant utilisation.
La couleur du milieu préparé est beige clair.
5.2.1. Usage : Il est utilisé pour l'analyse de la sensibilité antimicrobienne des isolats de
microorganismes exigeants conformément aux normes du Comité Européen de
Antibiogrammes (EUCAST). Ce milieu est composé d'agar Mueller
Hinton supplémenté avec du sang de cheval défibriné mécaniquement au
5 % et 20 mg/L de ß-NAD. Les directives actuelles de l'EUCAS recommandent l'utilisation
de MH-F pour microorganismes exigeants, y compris Streptococcus
pneumoniae, Haemophilus ssp., Moraxella catarrhalis, Campylobacter jejuni et
E. coli, streptocoques du groupe viridans, streptocoques des groupes A, B, C et
G, Listeria monocytogenes, Pasteurella multocida et Corynebacterium spp.
5.2.2. Réactifs :
5.2.3. Procédure :
Matériaux non fournis
Solution saline à 0,9 % (en volumes de 5 mL) pour la préparation d'un
inoculum standard
Patron de comparaison de sulfate de baryum (0,5 mL de 0,048 M BaCl2 [1,175%
p/v BaCl22H2O] a 99,5 mL de 0,18 M [0,36 N] H2SO4 [1% v/v]) o
Un dispositif photométrique pour ajuster la turbidité de la suspension d'inoculum
pour qu'il soit équivalent au modèle 0,5 de McFarland.
Comme alternative aux matériaux précédents (1-3), on peut utiliser le système
Système d'inoculation BD Prompt (dispositif volumétrique de préparation de)
inocules)
Cultivo de contrôle : Streptococcus pneumoniae ATCC 49619, Haemophilus
influenzae ATCC 49766 et Campylobacter jejuni ATCC 33560/DSM 4688.
Disques de papier imprégnés avec des quantités spécifiques d'agents
microbiens, tels que les disques d'analyse de sensibilité BD Sensi-Disc.
Dispositif distributeur de disques, comme le distributeur de
autoapisonamiento de 6 positions BD Sensi-Disc.
Règle ou autre dispositif pour mesurer la taille des zones en millimètres.
Une incubateur capable de produire une atmosphère de CO2 à 5 % ou autre
dispositif produisant une atmosphère enrichie en CO2 similaire.
Milieux de culture auxiliaires, réactifs et l'équipement de laboratoire requis.
5.3.1. Utilisation : L'agar Mueller Hinton 2 + 5 % de sang de mouton est un milieu pour
réaliser des tests de susceptibilité antimicrobienne par la méthode de diffusion
en disque pour les microorganismes fas8diosos et qui ont besoin de sang pour leur
croissance.
Contrôle de stérilité :
Incubées à 35°C pendant 48 heures : Pas de développement bactérien
Incubées à 20°C pendant 96 heures : Aucun développement bactérien
5.3.4. Stockage : 4-10°C avec le couvercle de la plaque vers le bas, dans son emballage
Pour éviter la condensation de l'eau, il est recommandé d'éviter les
changements brusques de température.
Mesurer les diamètres des zones d'inhibition complète (y compris le diamètre du disque), en utilisant
une règle ou un calibre. Il faut garder la partie arrière de la plaque de Petri éclairée avec une lumière
refletée localisée à quelques centimètres sur un fond noir. Avoir la précaution de
observer la plaque en suivant une verticale directe pour éviter une lecture erronée des marques de la
règle par effet de parallélisme. Dans les milieux supplémentés avec du sang, les zones sont mesurées
sur le dessus de la surface de l'agar et en retirant le couvercle. Faire attention à ne pas mesurer la zone
del hémolyse sinon celle de l'inhibition de la croissance.
Pour Staphylococcus spp ou Enterococcus spp, utiliser la lumière transmise, en maintenant la plaque au-dessus de
la lumière pour examiner une possible légère croissance de souches résistantes à l'oxacilline/méthicilline ou
Vancomycine dans les halos apparents d'inhibition. Tout développement dans la zone de
L'inhibition est indicative de résistance à la méthicilline (oxacilline) ou à la vancomycine.
Le point final doit être considéré comme la zone qui ne montre pas une croissance évidente, visible, qui peut
être détecté par observation visuelle, sans inclure le voile de croissance ou les colonies très
petites qui ne peuvent être détectées qu'avec beaucoup de difficulté au bord de la zone. Sans
embargo, les grandes colonies croissant dans la zone claire devront être sous-cultivées,
réidentifiées et réévaluées. Certains Proteus spp, en raison de leur grande mobilité, peuvent présenter
un vélo d'invasion ou "swarming" dans les zones d'inhibition de certains antibiotiques. Dans ces
Dans les cas, le voile du swarming doit être ignoré lors de la mesure des halos d'inhibition.
On utilise une règle et on mesure le rayon de l'halo d'inhibition en partant de l'endroit où se trouve le disque de
antibiotique jusqu'à ce que la croissance soit inhibée.
Les longueurs obtenues seront ensuite comparées à des normes qui nous indiqueront si le médicament
sera efficace ou non dans le traitement
Par exemple, dans une plaque de Petri avec un milieu de culture approprié, on a introduit une
série de disques imprégnés de différentes concentrations d'un certain produit, et il est souhaité
connaître l'activité de chacune des concentrations à partir du halo de réaction ou d'inhibition
que chaque disque imprégné produit autour de lui, après un certain temps d'incubation.
Pour cela, il est nécessaire de mesurer avec précision le diamètre de ce halo, mais sans connaître le centre du
cercle et en tenant compte que l'aura peut ne pas être totalement circulaire.
La figure montre l'image (gracieuseté de BBraun) d'une capsule avec 6 disques et ses
halos d'activité correspondants. Avec la fonction du programme MIP pour mesurer le diamètre de
un cercle, à partir de trois points marqués dessus, les valeurs précises ont été obtenues
del taille de ces halos. Les mesures répétées sur un même cercle permettent d'obtenir un
valeur moyenne de son diamètre et de sa surface.
I.BÉTALACTAMIQUE :
Pénicillines :
Pénicillines naturels -
Pénicilline G
- Pénicilline V
Aminopénicillines : Ampicilline
- Amoxicilline
Céphalosporines :
Carbapénèmes : Imipenem
- Meropène
AMINOGLYCOSIDES: Gentamicine
- Tobramycine
- Kanamycine
- Amikacine
- Neomycine
- Netilmicine
- Espectinomicine (AMINOCICLITOL)
- Norfloxacine
- Ofloxacine
- Pefloxacine
- Ciprofloxacine
- Levofloxacine
- Esparfloxacine
- Moxifloxacine
- Érythromycine
- Roxitromicine
- Clarithromycine
- Azithromycine
[Link]
- Clindamycine
- Linezolid
- Vancomycine
- Teicoplanine
VIII.TÉTRACYCLINES:- Oxytétracycline
- Clortétracycline
- Doxiciclina
- Minocycline
AUTRES Chloramphénicol
- Rifampicine
- Métronidazole
- Fosfomycine–Trométamol
- Cotrimoxazole
ANNEXE N° 2
ANNEXE 3
ANNEXE N° 4
AMCAMOXICILINE/ACIDE GENTAMICINE
CLAVULANIQUE IPMIMIPENEM
AMKAMIKACINA LVXLEVOFLOXACINO
AMPAMPICILINE MEMMEROPENEM
AMXAMOXICILINE NALÁCIDO NALIDÍXICO
ATMAZTREONAM NIT NITROFURANTOÏNE
AZMAZITROMICINE NORNORFLOXACINO
CECCEFACLOR OFXOFLOXACINO
CEPCEFALOTINA OXAOXACILINE
CHLORAMPHENICOL Pénicilline
CIP CIPROFLOXACINE PTZPIPERACILINE/TAZOBACTAM
CLRCLARITROMICINE SAMAMPICILINE/ SULBACTAM
CROCEFTRIAXONE SXTTRIMETROPÍN/SULFAMÉTROXAZOLE
CTXCEFOTAXIMACXM TCYTETRACICLINA
CEFUROXIME TECTEICOPLANINA
CZOCEFAZOLINA VANVANCOMICINE
DOXDOXICILINE RIF RIFAMPICINE
ERYTHROMYCINE COLCOLISTINA
FEPCEFEPIMA GEHGENTAMICINE À HAUTE CHARGE
FOXCEFOXITINA STHSTREPTOMICINE À HAUTE CHARGE
FRZFURAZOLIDONA
Source :
DONNÉES WHONET
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RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES