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Dr. Benjamin Q. Bengco III Clinique Médicale et Chirurgicale Village St. Jude Brgy Alfonso Concepcion
Laboratoire Clinique de Tarlac

PROCÉDURES OPÉRATIONNELLES STANDARD

POUR

MICROSCOPIE CLINIQUE
VERSION 2.0

Écrit par

RHENZ ALFRED D. GALDONEZ, RMT Technologiste médical

Date :

2 mars 2020

Révisé par

EMIL BRYAN M. GARCIA, MD

Pathologiste

Date

2 mars 2020
1. ANALYSE D'URINE DE ROUTINE

1.1 Principe
L'examen microscopique est une partie vitale de l'analyses d'urine de routine. C'est un précieux
outil de diagnostic pour la détection et l'évaluation des troubles rénaux et des voies urinaires ainsi que
d'autres maladies systémiques. La microscopie urinaire ne sera effectuée que sur demande des médecins/soins primaires.
demande de donneur pour la gestion clinique ou selon les exigences du protocole d'étude.

1.2 Collecte et manipulation des échantillons

1.2.1 Utilisez un urine fraîchement mélangée recueillie par la méthode de capture propre dans un récipient stérile.
1.2.2 L'échantillon doit être non conservé et non centrifugé.
1.2.3 Tous les échantillons d'urine doivent parvenir au laboratoire dans l'heure qui suit leur collecte.
1.2.4 Les échantillons d'urine doivent être testés dans l'heure suivant la collecte. Si l'urine ne peut pas être
testé dans l'heure (1) qui suit, il peut être stocké jusqu'à quatre (4) heures à 2 à 8°C. (Le spécimen)
doit être porté à température ambiante avant le test.)
1.2.5 Les échantillons d'urine suivants ne sont pas satisfaisants pour les tests :
[Link] Échantillons reçus plus de deux heures après la collecte.
[Link] Échantillons mal étiquetés.
[Link] Échantillons collectés de manière inappropriée. Par exemple, des échantillons d'urine avec
conservateurs, échantillons collectés dans des conteneurs non stériles, ou échantillons collectés dans
Les conteneurs avec des résidus de savon ou de détergent ne seront pas acceptés.
[Link] QNS (Quantité non suffisante) - Le volume minimum recommandé est de 12.
mL. Le volume minimum requis pour un examen microscopique est de 0,50 ml.
[Link] Dans le cas où un échantillon inacceptable est reçu, un autre échantillon
doit être demandé.

1.3 Matériaux et Équipement

1.3.1 Centrifuge Clinique
1.3.2 Microscope
1.3.3 Coupelles de microscope
1.3.4 Lames de microscope.
1.3.5 bandes réactives
1.4 PROCÉDURE
1.4.1 Mélanger l'échantillon d'urine en le faisant tourbillonner.

1.4.2 Pour 5 ml d'urine dans un tube à essai.

1.4.3 Centrifuger pendant 5 minutes à 1 500 tr/min.
1.4.4 Évitez de verser le liquide supernatant, une quantité suffisante d'urine reste dans le tube à essai pour suspendre
les sédiments.
1.4.5 Mélangez le tube à essai et transférez une goutte sur la lame.
1.4.6 Examinez sous le microscope en utilisant LPO puis HPO.

1.5 RÉSULTATS ATTENDUS/CRITIQUES ET PLAGE DE RAPPORT :

1.5.1 Les analytes en gras suivants nécessitent une saisie de résultat lors des résultats microscopiques
même s'ils ne sont pas vus lors de l'examen microscopique. Rapportez "aucun" ou 0-1 ou 0-2 comme indiqué.
Tous les autres analytes sont des entrées optionnelles s'ils sont observés lors de l'examen microscopique.

ANALYTE RÉSULTAT ATTENDU POUR GAMME SIGNALÉE

TOUTES ÂGES
Cylindre hyalin 0-1
Fonte granulaire Aucun 0-1,1-3,3-5,5-10,10-25,25-50,
ou supérieur à (>) 50/LPF.
Cast cellulaire (globules rouges, globules blancs) Aucun Quantifiez chaque type de distribution

ETC) séparément
Cireux Aucun
Cellules épithéliales 0-2
Leucocytes (Globules blancs 0-2 0-2, 2-5, 5-10, 10-25, 25-50
Cellules) ou supérieur à (>) 50/HPF
Globules rouges 0-2
Bactéries Aucun - Peu Aucun
ou Beaucoup
Mucus Aucun-Lumière Léger, Modéré ou Lourd
Cristaux Aucun Peu, Modéré, ou Beaucoup pour
chaque type de cristal
Spermatozoïdes Mâles seulement : Peu Peu, Modéré ou Beaucoup
Levure Aucun Light, Moderate, or Many.
Signalez toute levure bourgeonnante ou
hyphes observées en utilisant
commentaires comme noté ci-dessous
Trichomonas Aucun Peu, Modéré, ou Beaucoup.
Ne peut être signalé que si
mobile.

1.6 RAPPORT DES RÉSULTATS

Enregistrez la couleur de l'urine comme Paille, Jaune clair, Jaune, Jaune foncé, Ambre, Rouge
Orange, etc.
1.6.2 Enregistrez la turbidité de l'urine comme ; claire, trouble, légèrement trouble ou trouble.
1.6.3 Remarque sur la présence de sang et de protéines basée sur la bandelette urinaire, elle est classée comme
suivi : 1+, 2+, 3+.
1.6.4 Le pH de l'urine est classé en fonction de l'alcalinité/l'acidité de l'urine : de 5.0 à 9.0.
1.6.5 La gravité spécifique doit également être notée. Notée comme 1.005-1.030
1.6.6 La présence de GR/GB doit être notée en fonction du nombre moyen par 10 champs de haute puissance.
(c'est-à-dire "WBC=2-5/hpf, RBC=0-1/hpf")
1.6.7 Les bactéries sont enregistrées comme rares, peu nombreuses, modérées ou nombreuses par champ de vision à fort grossissement.
1.6.8 Les cellules épithéliales sont corrélées en fonction de la clarté de l'urine, cela devrait être signalé.
comme Rare, peu, modéré, ou nombreux par lpf.
1.6.9 Amorphe varie selon le pH de l'urine. Si l'urine est acide, elle devrait être
rapporté comme Urates amorphes : Rare/lpf, si alkaline Phosphates amorphes : Rare/lpf.
1.6.10 Les filaments de mucus sont signalés comme rares, peu, modérés ou nombreux par champ de vision.
1.6.11 La présence de levures, de trichomonas doit être signalée comme rare, peu fréquente, modérée ou
de nombreuses par hpf.
 1.6.12 La présence de casts doit également être notée comme le nombre moyen par lpf (c'est-à-dire Hyaline
distribution : 1-3/lpf, etc).

1.7 NOTES DE PROCEDURE

1.7.1 Caractéristiques normales de l'urine :

La couleur jaune de l'urine est due en grande partie au pigment urochrome et à de petites quantités
d'urobiline et d'uroérythrine. L'urine normale est essentiellement claire, et la présence de particules
La matière dans l'urine non centrifugée doit être expliquée au microscope. L'urine normale a une légère.
odeur aromatique d'origine indéterminée.

1.7.2 Sédiment Microscopique :

RBCs : Normalement, on peut observer 0-2 hématies/FFT dans les urines des hommes et des femmes non menstruées.
femelles. Une augmentation du nombre peut indiquer une hématurie rénale.

GB: Normalement, 0-5 GB/HPF peuvent être vus dans l'urine de mâles normaux avec légèrement
des plages plus élevées chez les femmes. Des nombres accrus peuvent indiquer une maladie rénale ou une infection aiguë.

Cellules épithéliales : Quelques cellules épithéliales sont normales et indiquent un desquamation normale de
cellules vieillissantes. Un nombre accru peut indiquer une maladie rénale, une infection des voies urinaires ou une mauvaise
technique de collecte d'échantillons.

Les casts : 0-1 cast hyalin/LPF se trouvent dans une urine normale. Un nombre accru ou plus.
des types avancés indiquent la protéinurie.

Bactéries : Quelques bactéries sont normalement observées en raison d'une mauvaise technique dans la collecte des échantillons.
spécimen. Un nombre accru peut indiquer une infection des reins, de la vessie ou des voies urinaires.

Cristaux : Les cristaux suivants peuvent être observés dans une urine normale ou anormale comme indiqué
ci-dessous. Utilisez le pH de l'urine et les informations de solubilité pour aider à l'identification, si nécessaire. Utilisez également

ressources d'images et de littérature appropriées pour aider à l'identification.

NORMAL ANORMAL
Urine acide Urine alcaline Urine acide Urine alcaline
Urates amorphes Amorphe Cystine Aucun
phosphates
Acide urique Phosphates triples Tyrosine
Oxalate de calcium Bivirates d'ammonium Leucine
Phosphates de calcium Sulfamide
Sulfadiazine
Carbonates de calcium

Mucus : Un mucus léger se trouve normalement dans l'urine et peut parfois être confondu avec
casts hyalins.
 Spermatozoïdes : Quelques-uns se trouvent normalement dans l'urine des hommes normaux. Un nombre accru
sont retrouvés dans les maladies prostatiques.

Trichomonas : Normalement pas présent dans l'urine. La présence de trichomonas est anormale et
peut indiquer une infection.

Levure : 0-1/HPF ou quelques-unes par champ à fort grossissement sont normales chez les femmes. Des nombres accrus
indiquer une infection.
Les casts : sont classés selon leur matrice, inclusions, pigments et cellules présentes.

1.7.3 Matrices de coulée

Les cylindres hyalins : Ce sont des structures cylindriques translucides composées de mucoprotéines.
On observe une augmentation des chiffres en cas de maladies rénales et de manière transitoire lors de l'exercice, de la fièvre, de l'insuffisance cardiaque.
insuffisance cardiaque et thérapie diurétique.

Casts cireux : Ceux-ci diffèrent des casts hyalins en ce qu'ils sont facilement visualisables en raison de
leur indice de réfraction élevé. Les moulages cireux ont une apparence homogènement lisse. Leur
les marges sont nettes, leurs extrémités sont émoussées, et des fissures ou des convolutions sont souvent observées le long
les marges latérales. Des empreintes cireuses sont communément associées à l'inflammation tubulaire et chronique
insuffisance rénale. Ils sont également trouvés lors du rejet aigu ou chronique d'allogreffe rénale.

1.7.4 Inclusions de coulée :

Les moules granulaires : ce sont des cylindres semi-transparents contenant de petits (fins) ou de grands (grossiers)
granules. Ces granules représentent des agrégats de protéines plasmatiques. Des casts granuleux apparaissent avec
maladies glomérulaires ou tubulaires.

Les casts graisseux : Ce sont des cylindres semi-transparents ou granuleux contenant de grandes particules hautement réfringentes.
vacuoles gouttelettes. Les gouttelettes de graisse visibles sont des triglycérides ou des esters de cholestérol. Ceux-ci sont
souvent observés lorsque la protéinurie est élevée et constituent un signe du syndrome néphrotique.

Cristaux : Inclusion cristalline dans un cylindre semi-transparent ou granulaire.

les cilices indiquent la disposition des cristaux dans le tubule ou le canal collecteur.

1.7.5 Casts cellulaires :

Casts d'érythrocytes (globules rouges) : cylindres semi-transparents ou granulaires contenant

érythrocyte distinct. Troubles reflétés par la présence de casts érythrocytaires dans le sédiment
peut inclure glomérulonéphrite aiguë, néphropathie à IgA, néphrite lupique, infection bactérienne subaiguë
endocardite et infarctus rénal.

Cylindres de leucocytes (globules blancs) : cylindres semi-transparents ou granulaires contenant

les leucocytes. Ils peuvent être observés dans la pyélonéphrite, les maladies glomérulaires, la néphrite interstitielle, le lupus
néphrite et syndrome néphrotique.
2. TEST QUALITATIF POUR LE GLUCOSE URINAIRE

2.1 Principe
Les sucres réducteurs sous condition alcaline se tautomérisent et forment des enediols. Les enediols sont
agents réducteurs puissants. Ils peuvent réduire les ions cupriques (Cu2+) à forme cuprous (Cu+), qui est
responsable du changement de couleur du mélange réactionnel. C'est la base du test de Benedict.
Lorsque les conditions sont soigneusement contrôlées, la coloration développée et la quantité de
Le précipité formé (oxyde de cuivre(I)) dépend de la quantité de sucres réducteurs présents.

2.2 Composition et préparation du réactif de Benedict

Un litre de solution de Benedict peut être préparé à partir de 100 g de sodium anhydre.
carbonate, 173 g de citrate de sodium et 17,3 g de sulfate de cuivre (II) pentahydraté.

CONSTITUANT MONTANT FONCTIONS

Sulfate de cuivre 17,3 g Fournit des ions cuivriques (Cu++)
Carbonate de sodium 100 g Rend légèrement alcalin
Citrate de sodium 173 g Des complexes avec des ions cuivre (II) afin qu'ils ne
se détériorer en ions cuivre (I) pendant le stockage
Eau distillée Jusqu'à 1000 Solvant

Vérification de la qualité : La solution de Benedict est de couleur bleue. Afin de vérifier la pureté de Benedict's
solution prenez 5 ml de la solution de Benedict dans un tube à essai et chauffez-le. S'il ne change pas de couleur, il
cela signifie que c'est pur.

2.3 Procédure du test de Benedict

2.3.1 Pipettez 5 ml de réactif de Benedict dans un tube à essai (20x150mm).
2.3.2 Ajoutez 8 gouttes d'urine au réactif de Benedict.
2.3.3 Chauffer doucement sur une flamme de brûleur à gaz ou plonger dans de l'eau bouillante pendant 5-10
minutes.
2.3.4 Refroidir sous l'eau du robinet ou en plaçant dans un bécher contenant de l'eau du robinet.
2.3.5 Observer le changement de couleur et la formation de précipités et analyser le résultat du test.

2.4 Interprétation des résultats

La couleur du mélange sert de guide à la quantité de sucre dans l'urine. Enlevez le

tubes et examinez la solution dans chaque tube pour des précipités et des changements de couleur. Signalez le
concentration de sucre comme suit :

COULEUR GLUCOSE APPROXIMATIVE INDICATION

mg/dl
Solution bleue Nul
solution verte <500 mg/dl Trace
PPT vert 500-1000 mg/dl +
Diapositive jaune 1000-1500 mg/dl ++
PPT orange 1500-2000 mg/dl +++
Rouge à rouge brique ppt >2000 mg/dl ++++

3. TEST DE PRÉCIPITATION DES PROTÉINES URINAIRES PAR ACIDE SULFOSALICYLIQUE (SSA)

3.1 Principe

Il existe deux approches de base disponibles pour mesurer les protéines dans les urines, le
méthode turbidimétrique et bandelette réactif colorimétrique. La méthode de l'acide sulfosalicylique appartient à
méthode turbidimétrique. La protéine est dénaturée par l'acide afin qu'elle devienne moins soluble et soit
précipité.

3.2 Procédure
3.2.1 Centrifugez les urines si elles sont troubles ou floues.

Remplir un tube de 10x75 mm au 1/3 avec le surnageant d'urine.

3.2.3 Injectez de force 3 % de SSA jusqu'à ce que le tube soit rempli aux 2/3.
3.2.4 Couvrir avec du parafilm et inverser pour mélanger.
3.2.5 Lisez et rapportez les résultats comme suit :

Négatif pas de précipité (pas cliniquement

protéine significative présente
Trace précipité blanc pâle (1-10
mg/dL

1+ (image) turbide, mais peut voir des lignes et

lire imprimer à travers le tube (15-
30 mg/dL)
2+ (image) ne peut pas lire mais peut
voir lignes (40-100 mg/dL)

3+ No text to translate. ne peut pas voir à travers, bien

des granulés peuvent être présents
(150-350 mg/dL)

4+ (image) précipité floculant ou

tube gélifié (supérieur à 500
mg/dL)
II. FECALYSE ROUTINE
La fécalise, ou examen de selles, est une série de tests effectués sur un échantillon de selles. Cette procédure
détecte des bactéries et des parasites qui sont des agents causatifs de maladies.
En plus de détecter des organismes vivants, un test de coprologie peut également détecter des substances telles que
du sang, de la bile ou du sucre, qui ne se trouvent normalement pas dans les selles.
Avec une analyse de selles, les résultats peuvent également indiquer et détecter le cancer du côlon. Ainsi, les résultats de la
L'analysis fécale est une grande aide pour les médecins dans le diagnostic de la maladie d'un patient.

3.1 Collecte d'échantillons

Avant de commencer la collecte des échantillons, vous aurez besoin de quelques éléments : un échantillon de selles.
un conteneur du laboratoire, une paire de gants et un bassin propre ou un conteneur en plastique.

1. Pour empêcher l'eau des toilettes de contaminer l'échantillon de selles, il est important de déféquer.
sur un bassin propre et sec ou un conteneur en plastique.
2. Collectez les parties des selles qui contiennent du sang ou du mucus et mettez-les dans le petit récipient.
La portion doit au moins être de la taille d'une cacahuète ou, au maximum, de la taille de votre ongle du pouce.
3. Étiquetez le conteneur avec le nom complet du patient, ainsi que la date et l'heure de
collection.

Après la collecte, il est important de soumettre l'échantillon de selles au laboratoire dès que possible.
Cette urgence est due à certains parasites ; en particulier ceux que l'on trouve dans des échantillons de selles aqueuses.
difficile à trouver après 30 minutes écoulées.