Université Hassiba Benbouali

Faculté : science de la nature et de la vie.

Département de biologie.

Spécialité : L3 Microbiologie.

MODULE : MICROBIOLOGIE
INDUSTRIELLE.
- BOUNADJA IKRAM - BETTOUATI KARIMA
- GOUMIDI AMEL - GROUPE : 1

TP1, 2et3 :

2021/2022
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 TP 1 :
Préparation de milieux de cultures utilisés en industrie
de production des enzymes et des antibiotiques.

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1- Introduction :
Un milieu de culture est un support qui permet la culture des cellules, des
bactéries, des levures et des moisissures. Afin de permettre leur étude. Les
milieux non sélectifs sont destinés à cultiver les microorganismes afin de
multiplier, il s'agit d’un milieu de culture simple sans agent de sélection qui va
permettre la croissance des microorganismes, de façon indifférenciée.

2- Objectif :
Déterminer la méthode de la préparation d’un milieu de culture.

3- Principe :
Les cellules trouvent dans le milieu de culture les composants indispensables
pour leur multiplication en grand nombre, rapidement, mais aussi par des
éléments qui permettront de privilégier un genre bactérien ou une famille.

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4- Mode opératoire :
Le milieu qui nous allons préparer est un milieu non sélectif, la gélose nutritif
GN.

- Mesurer 25 g de GN hydraté.
- Mettre la quantité sur un bécher et ajouter 1000 ml de l'eau distilé.
- Agiter la solution à l'aide d'un agitateur.
- Mesurer le Ph de solution à l'aide d'un Ph mètre (7.06).
- Ajouter une solution basique NaOH pour élever le Ph jusqu'à (7.4).
- Dans notre milieu, l'agar est égal à 15 g/L .Mais on besoin 18 g/L.
donc:
18g1000ml x1= 2.7g 15g1000ml x2= 2.25g
X1150ml x2150ml
X1 - X2 = 2.7 -2.25 =0.45 g
- Remplir les flacons par la solution, 150 ml sur chaque flacon et le dernièr
flacon contient 140 ml.
- Ajouter sur chaque flacon 0.45 g de agar et le dernièr flacon (140 ml) on
ajoute 0.4 g d’agar.
- 18g1000ml x3= 2.52g 15g1000ml x4= 2.1g
- X3140ml x4140ml
X3 – X4 = 2.52 -2.1 =0.42 g
- On écrit les informations sur le flacon (nom de milieu GN, la date...).
- Faire la stérilisation à l'aide d'un autoclave dans les conditions; 121°C,
pendant 20 min.

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5- Interprétation :
On va préparer un milieu non sélective (GN) il contient GN hydraté, NaOH et
goutte d’agar, leur composition essentielle elles :
- L’extrait de bœuf (extrait de viande), contient des substances.
Hydrosolubles (hydrates de carbone, vitamines, composés azotés et
sels).
- Extrait de levure riche en nutriments ils fournissent des composés
azotés, le complexe vitamine B et d’autre éléments nutritives pour la
croissance.
- Chlorure de sodium pour l’acidité de milieu de culture
- Les peptones, représente la principale source d’azote organique,
notamment par l’intermédiaire des acides aminés et peptides à longue
chaîne.
- L’agar : sert d’agent gélifiant pour la solidifier le milieu.
Utilise le parce que sont essentiels pour la plupart des microorganismes aussi
pour la production des biomasse ou synthèse des Produits désire.
6- Conclusion :
Pour pouvoir identifier une bactérie, il faut connaître ses exigences, pour
connaître les milieux à ensemencer. Car parmi la différents milieux solides et
liquides, chacun on leurs propres propriétés : synthétique, empirique, sélectif.

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 TP2 et TP3 :
Criblage des microorganismes producteurs des
antibiotiques et effet des milieux de culture sur la
production d’ATB culture.

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1- introduction :
Les bactéries lactiques appartiennent à un groupe des bactéries bénéfiques,
dont le trait commun est la production d’acide lactique, Elle ont une activité
antibactérienne due à une substance chimique organique d’origine naturelle ou
synthétique inhibant (bactériostatique) au tuant (bactéricide) les bactéries
pathogènes à faible concentration et possède une toxicité sélective.

2- objectif :
Déterminer la sensibilité des bactéries (E. Coli et bacilococcus) à l’antibiotique
produit par streptomissace.
3- mode opératoire :
3-1- méthode de stries croisées :
- Sur un milieu non sélectif, ensemencer l’actinobactérie par une strie sur
la boite de pétri.
- Incuber à 30°C pendant 8 jour pour permettre la croissance et la
production d’antibiotique.
- Ensemencer le microorganisme cible par une strie perpendiculaire.
- Incuber à 30°C pendant 24h.
3-2- méthode des disques de gélose :
- Utiliser le milieu GN pour la croissance de tous les bactéries.
- Ensemencer la souche productrice d’antibiotiques sur toute la boite de
pétri, et incuber à 30°C pendant 8 jour.
- Prélever et étaler de 0.3 à 0.5 ml de bactérie cible sur la surface du
milieu de culture après la préparation d’une suspension bactérienne à
raison de 106 UFC\ml.
- Incuber à 4°C pendant 2h puis à 30°C pendant 24h.

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4- observation :
4-1- méthode des disques de gélose :
- L’image suivant présent le résultat sur une boite de pétri pour l’activité des
antibiotiques produise par streptomissace sur E. Coli incuber pendant 4 jour.

On remarque une inhibition de diamètre 10 à 11mm. Donc la bactérie est

résistant contre l’antibiotique.
- La deuxième image présent le résultat sur une boite de pétri pour l’activité
des antibiotiques produise par streptomissace sur bacilococcus incuber
pendant 4 jour.

On remarque une inhibition de diamètre 10 à 11mm. Donc la bactérie est

résistant contre l’antibiotique.

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5- interprétation :
5-1- méthode de stries croisées :
- Après l’ensemencement des microorganismes cibles et incubation on a
vu la croissance des microorganismes ça veut dire pas les touchées par
les antibiotiques qui produit par l’actinobactérie.
- La présence des zones d’inhibition ça veut dire les antibiotiques et
antifongique est inhibé la croissance.

5-2- méthode des disques de gélose :

Les résultats se traduiront par des zones d’inhibition ça veut dire il y a
une activation des antibiotiques produire par streptomissace après 7
jours contre les Echirichia coli et contre staphylocoque par la méthode
des disques d’agar et voir aussi la croissance des restes.

6- conclusion :
Les deux méthodes d'écrites pour la détection de souches lactiques
productrices des bactériocines sont Basée sur le principe que ces substances
protéiques peuvent diffuser dans un milieu de culture solide ou semi solide
qu’ces inoculé préalablement avec une souche cible. La production de
bactériocine est détectée par la pouvoir inhibiteur du filtrat des
microorganismes testés sur la croissance du germe cible.