Université Hassiba Benbouali
Faculté : science de la nature et de la vie.
Département de biologie.
Spécialité : L3 Microbiologie.
MODULE : MICROBIOLOGIE
ALIMENTAIRE.
- BOUNADJA IKRAM - DAD FATIMA ZOHRA
GROUPE : 1
TP1 :
Analyse microbiologie de lait.
2021/2022
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1- Introduction :
Le lait est un produit alimentaire très utilisé par l’homme. Mais il est un milieu
riche en microorganisme. Et c’est pourquoi il doit être sauvée correctement pour
reste utilisable.
2- Objectif :
- savoir la qualité de lait par rapport à la présence des microorganismes.
- dénombrement et recherche des microorganismes qui se trouvent dans un
échantillon de lait de vache et de lait UHT (Candia).
- détecter la présence de microorganisme par test de coagulation et réduction de
colorons.
- faire la différence entre l’ensemencement en masse et en surface.
- recherche de coliforme (microorganisme pathogène par rapport à le nombre).
- recherche de bactérie thermorésistante.
3- Mode opératoire :
Préparation des dilutions décimales :
- Lait de vache :
- on remplit 6 tube à essai avec 9 ml de l’eau distillé.
- on ajoute 1 ml de lait de vache dans le tube 1 (dilution 10-1).
- on prend 1ml de tube 1 et on met dans tube 2 (dilution 10-2).
- on répète l’expérience jusqu’à dilution 10-6.
NB : on prépare les dilutions pour diminuer le nombre de cellules dans
l’échantillon étudiées.
- Lait Candia :
Nous n’avons pas besoin de faire des dilutions, parce que le lait UHT ne
contient aucun microorganisme.
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Préparation des boites à pétri :
On prépare 5 boites à pétri pour les différentes expériences.
- On prépare 3 boites à pétri en masse :
- boite à pétri 1 : recherche de la flore aérobie mésophile
(FTAM) :
On met 1 ml de la dilution 10-6 dans la boite à pétri sous forme des gouttes.
On ajoute le milieu de culture (tiède) qui est le gélose ordinaire (GN). Et on
agite manuellement.
On laisse la boite à pétri repose jusqu’à la gélose gèle.
On incube pendant 24h à 30°C.
- boite à pétri 2 et 3 : recherche des coliformes totaux et fécaux :
On met 1 ml de la dilution 10-6 dans la boite à pétri sous forme des gouttes.
On ajoute le milieu de culture (tiède) qui est dans cette fois le gélose V.R.B.L. et
on agite manuellement.
On laisse la boite à pétri repose jusqu’à la gélose gèle.
On incube pendant 48h à 30°C pour la boite à pétri 2 (coliformes totaux), et à
45°C pour la boite à pétri 3 (coliformes fécaux).
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- On prépare 2 boites à pétri en surface :
- boite à pétri 4 : dénombrement de la flore bactérienne totale :
On met le milieu de culture qui est le GN dans une boite à pétri. Et laisse-la
repose jusqu’à la gélose gèle.
On prend 0.1 ml de la dilution 10-6, on met dans la boite à pétri.
Avec une pipette pasteur on faire l’ensemencement et on met des stries.
On met la boite à pétri dans l’incubateur pour la formation de UFC.
- boite à pétri 5 : recherche de la flore thermorésistante :
On met dans la boite à pétri le milieu de culture, gélose ordinaire (GN), et laisse
la gélose gèle.
On met un tube de 10 ml dans un bain marie (100°C) pendant 3 min.
On prend 0.1 ml de cet échantillon est ensemencé dans la boite à pétri.
On incube pendant 24h à 30°C.
Préparation des tubes :
- réduction des colorants : tube 1 :
On remplit dans un tube à essai 9 ml de lait.
On ajoute 1 ml de bleu de méthylène.
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On agite bien avec l’agitateur.
On incube à 30°C pendant 24h.
- test de coagulation : tube 2
On met 10 ml de lait dans un tube.
On incube à 30°C pendant 24h.
Test de PH :
Avec un PH mètre, on mesure le PH de lait (6,6 à 6.8)
NB : on répète les mêmes étapes pour le lait de vache et le lait UHT.
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4- Résultat et Interprétation :
- recherche de la flore aérobie mésophile (FTAM) :
Lait de vache : lait Candia :
On remarque que la flore aérobie mésophile se présente dans le lait de vache
avec un nombre important mais on ne peut pas observe ces micro-organisme
dans lait Candia.
On compte l’UFC : on a 276 colonie dans la boite à pétri.
UFC = 276 x 1 \ 10-5 = 276 x 10-5 cellule\ml
- recherche des coliformes totaux :
Lait de vache : lait Candia :
On remarque que les coliformes totaux se présente avec une couche vaste dans
la boite à pétri qui contienne le lait de vache mais lait Candia ne contient pas des
coliformes totaux.
Donc on compte le nombre de coliforme et on compare les résultats obtenus
avec les normes. Pour une bonne qualité du lait.
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- recherche des coliformes fécaux :
Lait de vache :
On peut remarquer les coliformes fécaux dans le lait de vache. Et comme les
coliformes totaux on a besoin de comparer les résultats obtenus avec les normes.
- dénombrement de la flore bactérienne totale :
Lait de vache :
Les bactéries sont bien visibles sur la boite à pétri. On peut faire le comptage le
nombre est 220 colonie.
UFC = 220 x 0.1 \ 10-5 = 22 x 105 cellule\ml
Ce chiffre représente le nombre des micro-organismes (bactérie, levures,
moisissures) aérobioses par 0.1ml de lait (dilution 10-5). Mais ne présente pas
des germes pathogènes.
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- recherche de la flore thermorésistante :
Lait de vache : lait Candia :
On remarque que les micro-organisme thermorésistante se présente dans le lait
de vache mais ne sont pas présenté dans le lait Candia (UHT).
Donc il y des bactéries qui résiste à l’haute température (100 °C) dans le lait de
vache.
- réduction des colorants :
Lait de vache : lait Candia :
Les bactéries vivantes présentes dans le lait réduisent le bleu de méthylène et le
rendent incolore.
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- test de coagulation :
Lait de vache : lait Candia :
La coagulation du lait est provoquée par la dénaturation de la caséine, protéine
majoritaire du lait. La matière grasse et les séroprotéines ont un rôle passif.
Test de PH :
Lait de vache : PH= 6.73
Lait Candia : PH= 6.69
Les résultats sont compris entre 6.6 et 6.8 donc le lait est frais.
5- Conclusion :
Les contrôles sur le lait sont nombreux, pour obtenu un lait avec une bonne
qualité. Les producteurs sont tenus de respecter des règles strictes, pour la santé
des consommateurs.