Université Hassiba Benbouali
Faculté : science de la nature et de la vie.
Département de biologie.
Spécialité : L3 Microbiologie.
MODULE : MICROBIOLOGIE
ALIMENTAIRE.
- BOUNADJA IKRAM - DAD FATIMA ZOHRA
GROUPE : 1
TP2 :
Les techniques d’ensemencement et d’isolement des
microorganismes sur la boite de pétri.
2021/2022
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1- introduction :
L’ensemencement et l’isolement sont des opérations très utilisable dans la
microbiologie. L’ensemencement est le fait d’introduire des microorganismes
dans un bouillon de la culture comme dans une boite de pétri. Et l’isolement
est une technique qui permet de séparer les bactéries d’un échantillon en
utilisent des milieux de culture. Et c’est pour l’identification des
microorganismes (bactéries, levures et moisissures).
2- objectif :
La réalisation de plusieurs méthodes d’ensemencement.
3- mode opératoire :
On prépare 3 boites de pétri :
3-1- la suspension bactérienne :
- Met dans un tube, 5ml d’eau distillée.
- Avec la pipette pasteur prend un peu de l’échantillon et mélange dans un
tube.
- Agite bien.
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Schéma1 : expérience pour préparer la suspension bactérienne.
Image1 : l’échantillon utilisé. Image2 : la suspension
bactérienne
3-2- ensemencement en double couche :
- Faire couler une première couche 10ml du milieu de culture, et laisser
solidifier.
- Déposer 1ml de la suspension bactérienne et ensemencer par étalement
à l’aide d’un râteau.
- Couvrir d’une deuxième couche 10ml du milieu de culture en surface.
- Laisser solidifier puis incuber.
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Râteau
Pipette pasteur 2eme couche de
Milieu de
milieu de culture
culture (GN) 1ml de
suspension
Boite de pétri
Schéma2 : expérience pour l’ensemencement en double couche.
3-3- ensemencement en surface par inondation :
- Couler le milieu de culture sur boite de pétri et laisser solidifier.
- Plonger un écouvillon en coton stérile dans la suspension bactérienne et
éliminer l’excès de liquide en tournant l’écouvillon sur les parois du tube.
- Ecouvillonner sur la totalité de la surface de la gélose dans trois
directions.
Schéma3 : expérience pour l’ensemencement en surface par inondation.
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3-4- ensemencement en surface par stries d’épuisement (méthode des
cadrans) :
- A l’aide d’une pipette pasteur prenez quelques colonies bactériennes
bien isolées.
- Déposer vos bactéries sur le 1er cadran et tracez des stries serrées.
- Retournez la boite vers le 2eme cadran et réalisez des stries de la même
façon que le premier cadran.
- Retournez la boite vers le 3ème cadran et contrairement aux deux autres
cadrans, ensemencez par des stries éloignées.
Schéma4 : expérience pour la méthode des cadrans.
4- résultat et interprétation :
4-1- ensemencement en double couche :
On utilise cette méthode pour crée une zone micro aérobie (isolement des
anaérobies facultatifs)
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4-2- ensemencement en surface par inondation :
On utilise cette méthode pour isoler facilement les bactéries et pour favoriser
la multiplication des bactéries sur un milieu nutritif.
On utilise cette méthode pour l’antibiogramme.
4-3- ensemencement en surface par stries d’épuisement (méthode des
cadrans) :
On utilise cette méthode pour la purification et l’identification…
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5- conclusion :
L’examen microscopique tout seul n’est pas suffisant pour caractériser et
identifier un germe. Pour cela, il est nécessaire d’ensemencer le
microorganisme sur des milieux de culture avec plusieurs méthodes selon le
type de croissance et de vie d’un microorganisme.