Spermogramme

Réalisé par Hassan Bourri

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 Table des matières
I. Prélèvement .............................................................................................. 3

II. Examen Macroscopique ............................................................................... 3

1. Volume : .............................................................................................. 3

2. pH : .................................................................................................... 4

3. Liquéfaction : ........................................................................................ 4

4. Aspect : ............................................................................................... 4

5. Consistance ou Viscosité : ......................................................................... 4

6. Variante : ............................................................................................. 5

III. Examen microscopique............................................................................. 5

1. Agglutinats / Agrégats : ........................................................................... 5

2. Mobilité : ............................................................................................. 6

3. Concentration spermatique / cellules rondes .................................................. 7

3.1. Concentration spermatique...................................................................... 7

3.2. Cellules rondes : .................................................................................. 10

3.3. Vitalité spermatique ............................................................................. 11

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 Spermogramme

Le sperme normal est constitué de spermatozoïdes en suspension dans les sécrétions

d'origine testiculaires et épididymaires qui se mélangent avec les sécrétions de la prostate, des
vésicules séminales et des glandes bulbo-urétrales au moment de l'éjaculation, l'ensemble forme
un liquide fluide visqueux l'éjaculat

I. Prélèvement
Le sperme doit être prélevé après un délai d'abstinence sexuelle de 48 h minimum et
n'excédant pas une semaine. Le prélèvement doit se faire de préférence dans l'intimité d'une
pièce à proximité du laboratoire sinon l'échantillon doit parvenir au laboratoire dans l'heure qui
suit le prélèvement en évitant les températures inférieures à 20" et supérieures à 40°C lors de
transport.

L'éjaculat doit être obtenu par masturbation et émis dans un flacon approprié stérile, à
ouverture évasée après avoir urine et laver soigneusement les mains et le pénis.

Le recueil pur coït interrompu est déconseillé car il y a un risque de perte de la première
partie de l'éjaculat, contamination or diminution de la mobilité des spermatozoïdes par le pH
acide du liquide vaginal.

II. Examen Macroscopique

1. Volume :
Procédure

• Le volume de l’éjaculat est dé terminé en utilisant une pipette graduée

• La mesure doit être faite à 0,1ml près
• Noter la valeur du volume dans le cahier de paillasse
• Alternativement, le volume peut être estimé par pesée (balance avec 2 décimales),
la densité étant voisine de 1 (1ml = 1g)
• Réceptacles de prélèvement pré-pesés

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 2. pH :
7,2 - 8 la mesure doit se faire dans l'heure qui suit l'éjaculation

Procédure

• Le pH doit être mesuré toujours au même moment, dans l’heure qui suit
l’éjaculation.
• Déposer une goutte de sperme bien homogénéisé sur la bandelette de papier pH ou
pH mètre.
• Attendre 20 à 30 secondes (la couleur doit être uniforme).
• Comparer la couleur obtenue à la gamme étalon.
• Noter la valeur du pH sur le cahier de paillasse.
• Pour tout nouveau lot de bandelettes, il faut faire un contrôle du pH avec des
solutions étalons.

3. Liquéfaction :
Le sperme normal se liquéfie en moins d'une heure à température ambiante, la
présence de filament muqueux signe une liquéfaction incomplète.

4. Aspect :
À température ambiante après liquéfaction, le sperme normale est gris opalescent,
moins opaque si la concentration en spermatozoïdes est diminué. Une coloration brune
traduit la présence d’hématies.

5. Consistance ou Viscosité :
Sur sperme liquéfié et à l'aide d'une pipette de 5 ml, faire écouler le sperme. Le
sperme normal s'écoule par gouttes bien séparées. Un sperme trop consistant écoule sous
forme de filaments de plus le 2 cm entre chaque goutte.

Procédure :

La viscosité est évaluée semi-quantitativement en observant la manière dont le sperme

s’écoule à l’extrémité́ de la pipette :

• 0 : normale, gouttes séparées

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 • + : augmentée, gouttes non séparées (filament plus ou moins long)
• ++ : forte, éjaculat très visqueux, s’écoule mal ou pas, reste en bloc
• Noter sur le cahier de paillasse la viscosité de l’éjaculat.

6. Variante :
Tremper une baguette de verre dans l'échantillon et observer la longueur du filament
lorsque l'on retire de l'échantillon, normalement le filament ne doit pas excéder 2 cm.

III. Examen microscopique

1. Agglutinats / Agrégats :
L’agglutination des spermatozoïdes est définie par l’attachement de spermatozoïdes
mobiles entre eux par la tête, par la pièce intermédiaire, ou par le flagelle ; ou de manière mixte,
par exemple, agglutination tête-flagelle.

Procédure

• L’agglutination doit être évaluée sur au moins 10 champs pris au hasard

• Le degré́ d’agglutination doit être noté (1 à 3 croix) ainsi que le type d’agglutination (par
exemple, par la tête, par la pièce intermédiaire ou le flagelle ou encore mixte quand
différents types sont présents).
• La présence d’agglutinats incite à faire des tests immunologiques : ex Martest Agrégats
• L’attachement de spermatozoïdes immobiles entre eux ou de spermatozoïdes mobiles à
des filaments de substances mucineuses, à d’autres cellules ou à des dé bris constitue une

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 agréation non spécifique (et non une agglutination) qui doit être notée comme telle («
agrégats », 1 à 3 croix).

2. Mobilité :
Plusieurs études ont montré́ que la mobilité́ des spermatozoïdes est une des
caractéristiques du sperme les mieux corrélées à la fertilité́ .

D’un point de vue diagnostic, une anomalie de la mobilité́ peut correspondre à une
anomalie de structure des spermatozoïdes ou à des anomalies de leur maturation lors de leur
transport dans la voie génitale.

• Difficulté de classer les spz « a » et « b » Aussi l’OMS 2010 recommande maintenant

de ne classer qu’en une seule catégorie les spermatozoïdes progressifs (P).

Procédure :

Déposer 2 gouttes de sperme d’un volume fixe de 10 μl sur une lame propre avec une
pipette à déplacement positif et recouvrir chaque goutte d’une lamelle 22mm x 22mm (le poids
de la lamelle étale l'échantillon permettant une observation optimale ; il faut absolument éviter
de former des bulles d’air)

• Laisser stabiliser la préparation

• Commencer à faire l’évaluation sur 5 à 10 champs de la première préparation
• Répéter l’évaluation sur la seconde préparation.

Evaluation selon les trois catégories simplifiées

• Dans chaque champ observé, chaque spermatozoïde est évalué́ comme étant :
➢ Immobile « I » : aucun déplacement, tête et flagelle immobiles
➢ Non progressif « NP » : déplacement de moins de deux longueurs de tête en une
seconde ou, aucun déplacement avec des oscillations de la tête sur place et/ou de
simples mouvements flagellaires
➢ Progressif « P » : tous les autres spermatozoïdes (non immobile et non mobile sur
place).
❖ Evaluation selon les 4 catégories de l’OMS (1999)

Dans chaque champ observé, la mobilité́ de chaque spermatozoïde est évaluée « a », «

b », « c » ou « d », selon les critères suivants :

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 ➢ « a » rapide et progressif : trajectoires rectilignes, mouvement dit fléchant, >25μm/s
à 37°C ou >20μm/s à 20°C (25μm correspond à peu près à cinq longueurs de tête ou
à la moitié de la longueur du flagelle)
➢ « b » lent ou faiblement progressif : trajectoires rectilignes mais faible vitesse ou
faiblement progressif (trajectoires non rectilignes ou sinueuses avec vitesse plus ou
moins grande)
➢ « c » mobile et non progressif : déplacement de moins de deux longueurs de tête une
seconde ou, aucun déplacement avec des oscillations de la tête sur place et/ou de
simples mouvements flagellaires
➢ « d » immobile : aucun déplacement, tête et flagelle immobiles

Noter le mouvement de 100 spermatozoïdes et classer le mouvement de chacun selon

qu'il est:

Rapide et Lent ou faiblement Mobile mais non

Classe de sperme Immobile
progressif progressif progressif.

Pourcentage % % % % %

➢ Répéter l'opération sur une deuxième goutte. Faire la moyenne des deux comptes à
condition que l'écart entre eux ne dépasse pas 10% sinon faire une troisième goutte
et calculer la moyenne des trois comptes.

3. Concentration spermatique / cellules rondes

3.1. Concentration spermatique

Évaluation de la concentration spermatique et de la présence de cellules rondes

(leucocytes, C spermatiques)

• Dilution et décompte sur cellule de Malassez ou la cellule de Neubauer modifiée.

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 Adapter la dilution à effectuer dans le ringer – formol en fonction de l’estimation de la
concentration. Noter la dilution retenue sur la feuille de paillasse.

Estimation des Volume de

spermatozoïdes dilution Volume de sperme PBS -formol
(Millions/ml)
De 5 à 20 1/05 50µl 200µl
De 10 à 20 1/10 20µl 180µl
De 20 à 100 1/20 20µl 380µl
Sup à 100 1/40 20µl 780µl

A l’aide d’une pipette de 20µl monter une cellule de Malassez (en double). Laisser
sédimenter 2 minutes. Compter les spermatozoïdes

• Compter de la même façon les cellules rondes et noter le résultat sur la feuille de paillasse. Si
> 1Million/ml, faire un frottis MGG (May-Grunwald Giemsa) en vue de leur identification.

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Exemples de calcul :

Pour les spermes riches : faire dilution au 20eme. Compter le nombre de spz dans 5
carrés (RM) : faire la moyenne [spz] Mill/ml : moyenne (RM) x 1/dilution X 100 X 1000

✓ Exemple 25 27 24 23 21 dans 5 RM : moyenne 24 spz (dilution au 1/20 ème) [spz]

Mill/ml : 24.0 X 20 (Dilution) X 100 X 1000 : 48 Millions/ml

Pour les spermes pauvres: faire dilution au ½ compter toute la cellule : QM [spz]
Mill/ml : Nbre de spz dans QM x 1/dilution X 1000 - 2 spz

✓ Exemple si observé 2 dans QM : concentration : 2 X 2 (dilution) x 1000 : 4000/ml -

[spz] Mill/ml : 2 X 2 x 1000 : 0.004 Mill/ml ((4000/ml).
❖ Cas particulier : absence de spermatozoïdes à l’état frais :

Centrifugation et observation du culot

Procédure :

➢ Centrifuger, dans plusieurs tubes à fond conique, le maximum du volume de l’éjaculat,

à 3000g pendant 15 minutes
➢ Examiner au grossissement final x400 de manière standardisée (champs jointifs,
balayage en méandre) dans chacun des tubes au moins deux aliquots de 10μl placés
entre lame et lamelle 22mm x 22mm.
➢ La présence d’un spermatozoïde ou plus dans au moins l’une des préparations conduit
à conclure : « cryptozoospermie ».

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 ➢ L’absence de spermatozoïdes sur l’ensemble des préparations faites après centrifugation
conduit à conclure : « absence de spermatozoïde à l’examen direct et après concentration
» ou « azoospermie vérifiée sur le culot de centrifugation ».

3.2. Cellules rondes :

❖ Mesure de la concentration de cellules rondes, Ces cellules peuvent être :

➢ Des cellules épithéliales desquamées du tractus génital
➢ Des cellules de la lignée germinale
➢ Des cellules de la lignée blanche.
➢ Une concentration notablement augmentée de cellules de la lignée germinale peut
signifier une desquamation anormale de l’épithélium séminifère, souvent d’origine
toxique
➢ Une concentration notablement augmentée de leucocytes (leucospermie) peut
signifier un processus inflammatoire au niveau du tractus génital (surtout si elle est
associée à une baisse du volume de l’éjaculat et de la mobilité des spermatozoïdes).
Elle peut aussi retentir sur la qualité́ fonctionnelle des spermatozoïdes car les
leucocytes sont capables d’initier des phénomènes oxydatifs importants et les
spermatozoïdes sont des cellules très sensibles au stress oxydatif.

Déroulement de la coloration MGG (kit coloration rapide RAL 555) :

• Flacon 1 : FIX-RAL 5x1 seconde

• Egoutter
• Flacon 2 : EOSINE-RAL 5x1 seconde
• Egoutter
• Flacon 3 : BLEU-RAL 5x1 seconde
• Rincer à l’eau du robinet

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 3.3. Vitalité spermatique

Coloration à l’éosine négrosine (frotti). Décompte de 200 spz (Rose = mort); (Blanc =
vivant)

Basée sur l’exclusion d’un colorant vital par les spermatozoïdes vivants le colorant
pénètre les spermatozoïdes morts ou moribonds (spermatozoïdes présentant une membrane
altérée).

Procédure :

➢ Préparer des lames dégraissées

➢ Homogénéiser le sperme au vortex
➢ Mettre dans un tube à hémolyse 10 μl de sperme
➢ Ajouter 20 μl d’éosine
➢ Bien mélanger
➢ Attendre 30 secondes et ajouter 30 μl de nigrosine
➢ Bien mélanger

Faire un frottis à partir de cette préparation :

o (le frottis ne doit pas être trop épais : (10 μl de la préparation))

➢ Laisser sécher à l’air
➢ Lire à l’objectif x100 à immersion en lumière transmise (grossissement x 1000 final)
➢ Classer un minimum de 200 spermatozoïdes pour déterminer le pourcentage de
spermatozoïdes vivants :
✓ Les spermatozoïdes vivants ne sont pas colorés
✓ Les spermatozoïdes morts ont la tête colorie en rose
✓ S’il existe une faible coloration : le spermatozoïde est classé « mort »
✓ les têtes isolées ne sont pas comptées.

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 Seuil
correspond
Normes OMS Définition de l’anomalie ant à une
baisse de
fécondité
❖ Volume du sperme ❖ OMS-1999 :
➢ OMS-1999 : Sup a 2 ml ❖ < 2 ml = Hypospermie
➢ OMS-2010 : sup a 1.5 (1.4 – 1.7) ❖ OMS-2010 :
• L’abstinence entre 2 et 8 jours ➢ < 1.5 ml = Hypospermie
➢ > 6ml : Hypospermie
❖ Numération des spermatozoïdes (par ml) : ❖ 0 : Azoospermie
➢ OMS-1999 : > 20 millions/ml ➢ OMS-1999 :
➢ OMS-2010 : > 15 millions/ml (12 – 18) • <20 millions/ml = Oligospermie ❖ <5
❖ Numération des spermatozoïdes (par ➢ OMS-2010 :
millions/
éjaculat) : • <15 millions/ml = Oligospermie ml
➢ OMS-1999 : > 40 millions/ml • 200 millions/ml = Polyspermie
➢ OMS-2010 : > 39 millions/ml (33 – 46)

❖ Mobilité des ❖ OMS-

spermatozoïdes a la 1999 :
première heure après Mobilité
l’éjaculation progressive (de
❖ Classement : type a+b) des
➢ Grade (a) : Mobilité spermatozoïde
❖ OMS-1999 :
en trajet fléchant, s : > 50%
< 50%
rapide (>25 ❖ OMS-
❖ OMS-2010 :
microm/s) 2010 :
< 32% (ou < 30%)
➢ Grade (b) : Mobilité Mobilité
lente et progressive progressive de
(5-25 microm/s) type a+b) des
➢ Grade (c) : Mobilité spermatozoïde
sur place s : > 32% (31 à
➢ Grade (d) : immobile 34) (ou > 30%)
❖ 20 à
➢ OMS- ❖ Asthenospermie
30%
1999 :
Mobilité de
type (a) des
spermatozoïde
s : > 25%
➢ OMS- ❖ OMS-1999 :
2010 : type (a) : < 25%
Mobilité de ❖ OMS-2010 :
type a) des Type (a+b+c) : < 40%
spermatozoïde
s : non précise
Mobilité de
type a+b+c)
des
spermatozoïde

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 s : > 40% (38 –
42)

❖ Mobilité a la quatrième ❖ Chute de ❖ Chute de mobilité supérieure à 50%

heure après l’éjaculation mobilité ➢ OMS-1999 : (Classification de
inférieure à David) : < 30% = Teratospermie
50% ➢ OMS-2010 : < 4% = Teratospermie (se
comparativ rapproche de la classification Kruger)
ement aux ❖ Ou : <15% (selon la classification de
chiffres de Kruger)
la première ❖ Ou : 15% (selon la classification de David
heure modifiée par Auger et Eustache)
❖ < 4%
❖ Morphologie normale des
spermatozoïdes :
➢ OMS-1999 : >30% (selon la
classification David)
➢ OMS-2010 : >4% (3 – 4) (se rapproche
de la classification Kruger)
• Ou : > 15% (selon la classification
de David) Modifier par auger et
eustache).
❖ Leucocytes < 1 million/ml ❖ > 1 million/ml : leucospermie
❖ pH :
➢ OMS-1991 : entre 7.2 et 8
➢ OMS-2010 : non précise
❖ Vitalité des spermatozoïdes :
➢ OMS-1991 : > 60%
➢ OMS-2010 : > 58% (55 – 63)

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 Fiche de paillasse :
Délai d’abstinence -
Liquéfaction (mettre à l’étuve a 37C) -

Macroscopie
Consistance Normale Diminuée Augmentée
Couleur - - -
Odeur - - -
Volume ml
PH -

Microscopie
Mobilité
A B C D
(une goutte
(Progressifs (Progressifs (Mobiles (Immobiles)
entre lame et
Rapides) Lents) Sur places)
lamelle)
1H
4H

Dilution au formol + 9 gouttes sérum physiologique) – 1goutte + goutte du

Numération sperme
Lecture : Cellule de Mallassez
Nombre/ml M/ml (Nbre compté dans un rectangle x 106)
Nombre/éjaculat M/éjaculat
Cellules rondes (si > 1M/ml, vérifier si PNN ou cellules
(y compris leucocytes) germinales sur MGG)
Hématies -
Parasites -
Agglutinats Absence Quelque Nombreux

Vitalité (coloration VITA-

EOSINE) 1H 4H
décompte su 100 ou 200 SPZ
(Vitalité > ou = a la mobilité)
% SPZ vivants
% SPZ morts (en rose)

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