(éosine au bleu
Réalisé par Hassan Bourri
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Gélose de EMB
Généralités
La gélose éosine au bleu de méthylène (EMB) est un milieu sélectif et
différentiel utilisé pour l'isolement des bacilles gram négatifs dans les aliments, les produits
laitiers et les échantillons cliniques.
La gélose EMB a été initialement formulée en 1916 par Holt-Harris et Teague, puis, la
gélose a été modifiée par Levine en 1918 qui a retiré le saccharose de la formule et augmenté
la teneur en lactose.
De nos jours, la gélose EMB est une combinaison entre la formulation décrite par Holt-
Harris et Teague et Levine.
Principe de la gélose EMB
La gélose EMB contient deux colorants, l'éosine et le bleu de méthylène qui inhibent
la croissance de nombreux microorganismes Gram-positifs qui l'accompagnent. Ces colorants
servent d'indicateurs différentiels en réponse à la fermentation des glucides.
❖ Les bactéries gram-négatives fermentant le lactose acidifient le milieu et, dans des
conditions acides, les colorants produisent un complexe violet foncé qui est
généralement associé à un éclat métallique vert. Cet éclat vert métallique est un
indicateur de la capacité vigoureuse de fermentation du lactose et/ou du saccharose
typique des coliformes fécaux.
❖ Une plus petite quantité de production d'acide, qui est le résultat d'une fermentation
lente (par des organismes à fermentation lente du lactose), donne une coloration brun-
rose de la croissance.
❖ Les non-fermenteurs de lactose, tels que Shigella et Salmonella, forment des colonies
transparentes, incolores ou ambrées qui se distinguent facilement des coliformes.
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Le lactose et le saccharose sont les sources d'énergie en étant des glucides
fermentescibles.
Le phosphate tamponne le milieu.
➢ Note :
L'éclat métallique distinctif produit par E. coli sur ce milieu est dû à la production
d'acide entraînant une liaison amide entre l'éosine et le bleu de méthylène, les autres coliformes
ne produisant pas suffisamment d'acide pour provoquer cette réaction.
Suspendre les composants, poudre déshydratée, dans l'eau (36 grammes dans 1000 ml
d'eau purifiée/distillée). Le milieu est bouilli pendant quelques secondes jusqu'à dissolution
complète des ingrédients. Stériliser à l'autoclave à une pression de 15 lb (121 °c) pendant 15
minutes. éviter la surchauffe.
Refroidir à 45-50°C et agiter le milieu pour oxyder le bleu de méthylène (c'est-à-dire lui
redonner sa couleur bleue) et mettre en suspension le précipité floculant. Verser dans des boîtes
de Pétri.
Ingrédients Gramme/litre
Digeste peptique de tissu animal 10
Phosphate dipotassique 02
Lactose 05
Sucrose 05
Éosine – Y 0,40
Bleu de méthylène 0.06
Gélose 13.5
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Préparation / Composition gélose EMB
Après 24 heures à 37°C en aérobiose, en général :
Organismes Croissance
E. coli Colonies bleu-noir avec reflet métallique vert
Klebsiella Colonies roses et mucoïdes
Enterobacter aerogenes Bonne croissance; rose, sans éclat
Taille variable, de couleur bleu-vert à bleue ou saumon, la plupart
Proteus des souches étant de couleur noire au centre ou sur toute leur
surface
Salmonella Colonies incolores
Shigella Colonies incolores
Pseudomonas Colonies incolores
Bactéries Gram positives Inhibition (partielle à complète)
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Klebsiella sur gélose EMB [Link] sur gélose EMB
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